原發性肝癌患者血清miR-6861-5p表達與其臨床病理特征、生存時間的相關性研究

孟春陽 孟玉麗 張紅旭

原發性肝癌病情進展迅速,腫瘤侵襲能力強,增殖速度快,惡化程度高,可導致肝衰竭,臨床盡早明確診斷、予以治療是改善患者預后的關鍵[1]。血清中miRNAs存在形式以外泌體磷脂膜包裹為主,可調控基因表達,對基因轉錄、翻譯進行干擾,調節靶基因,在原發性肝癌發生發展中均有參與[2]。既往臨床認為,原發性肝癌患者中血清miR-6861-5p呈高表達,但關于該指標在原發性肝癌診斷、病情評估、預后判斷中的作用尚缺乏相關報道[3]。鑒于此,本研究進一步探討原發性肝癌患者血清miR-6861-5p水平及臨床意義。現總結如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年1月至2019年1月我院收治的原發性肝癌患者60例,其中男性37例,女性23例;年齡48～81歲,平均年齡(63.78±5.07)歲;體重42～83 kg,平均體重(68.34±4.08)kg;9例無遠處轉移,51例有遠處轉移;腫瘤分期:Ⅰ～Ⅱ期26例,Ⅲ～Ⅳ期34例;病灶直徑2～8 cm,平均直徑(4.39±1.01)cm。另外選擇同期于我院進行常規體檢的健康者作為對照組,其中男性38例,女性22例;年齡47～82歲,平均年齡(63.28±5.31)歲;體重42～84 kg,平均體重(68.67±4.22)kg。兩組性別、年齡、體重比較,差異無統計學意義(P>0.05)。醫學倫理委員會批準本研究。

1.2 入選標準

納入標準:①符合《原發性肝癌診療規范(2017年版)》[4]相關診斷標準,并經病理確診;②既往無肝癌治療史;③入選者意識清楚,能夠配合相關檢查;④入選者均自愿簽署知情同意書。排除標準:①并發其他惡性腫瘤;②存在認知障礙或精神疾病;③重要臟器功能衰竭;④不接受隨訪或中途失訪者。

1.3 方法

所有入選者均檢測血清miR-6861-5p水平,取5 ml空腹外周血,使用HaiGene公司生產的試劑盒提取總miRNA,并使用同公司生產的反轉錄試劑盒進行反轉錄操作,檢測方法為實時熒光定量聚合酶鏈反應,反應條件:95 ℃ 10 min ,95 ℃ 30 s,55 ℃ 20 s,共進行42個循環,隨后60 ℃ 60 s。內參照為6U。miR-6861-5p上游引物:5＇- ACACTCCAGCTGG-GACTGGTAGGTGGGC-3＇,下游引物:5＇-GTGCAGGGTC-CGAGGT-3＇。以2-ΔΔCt法計算相對表達量。所有肝癌患者均進行定期隨訪,以電話或復查的方式隨訪,隨訪至截止時間,中途患者死亡隨訪自動截止,截止時間為2021年11月30日。

1.4 觀察指標

比較兩組miR-6861-5p水平;并對所有肝癌患者均進行定期隨訪,分析miR-6861-5p與患者臨床病理特點以及與患者生存時間的關系。

1.5 統計學分析

2 結果

2.1 miR-6861-5p水平

肝癌組血清miR-6861-5p水平為(1.90±0.24),高于對照組的(1.02±0.08),差異有統計學意義(t=26.944,P=0.000)。

2.2 miR-6861-5p與患者臨床病理特點的關系

血清miR-6861-5p水平與病灶數量、肝硬化、腫瘤直徑、病毒性肝炎無關(P>0.05);血清miR-6861-5p水平與淋巴結轉移、腫瘤分期、遠處轉移有明顯相關性(P<0.05),見表1。

表1 miR-6861-5p與患者臨床病理特點的關系

2.3 miR-6861-5p與患者生存時間的關系

以miR-6861-5p水平升高5倍作為閾值,將肝癌患者分為低表達組與高表達組。低表達組無病生存時間、總生存時間均長于高表達組,差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 miR-6861-5p與患者生存時間的關系月)

3 討論

原發性肝癌為臨床常見的惡性腫瘤類型,發病率、致死率均較高,發病機制較為復雜,與肝炎、肝硬化均存在密切關系,會對患者健康及生命安全造成較大威脅[5]。隨著人們健康意識增強及醫學技術發展,原發性肝癌的檢出率逐年提高,但惡性細胞侵襲性高,易發生轉移,導致預后并不理想,整體生存率未得到顯著提升[6]。因此,尋找生物標志物對肝癌早期診斷、指導治療、評估預后均有重要意義。

miRNA是一種內源性的非編碼單鏈RNA,廣泛存在于真核細胞生物內,在基因組中比例較小,與惡性腫瘤發生發展存在密切關系[7-8]。細胞核中miRNA在RNA聚合酶催化下轉錄成初級miRNA,長度約為數千核苷酸,經RNA酶識別后可進行切割,形成前體miRNA,不同miRNA具有不同的細胞調控作用,在惡性腫瘤發生發展均有參與,能夠促使病灶進展及轉移,部分惡性腫瘤中存在多種miRNA異常[9]。臨床認為監測miRNA表達,對疾病早期診斷、評估治療及預后均有重要意義[10]。外周血中miRNA表達較為豐富、穩定,因其內源性結構特性使其存在抗核糖酸酶作用,血清標本即使經過反復凍融、pH值改變仍不會影響miRNA表達。miRNA應其穩定性較好,已被臨床認為是最具潛力的生物標志物,在惡性腫瘤中監測有較高價值[11]。原發性肝癌患者存在多種miRNA表達異常,miR-6861-5p位于人染色體12q24.13上,目前關于該標志物的研究較少,是重要的潛在腫瘤標志物。本研究結果顯示,肝癌組血清miR-6861-5p水平高于對照組;血清miR-6861-5p水平與病灶數量、肝硬化、腫瘤直徑、病毒性肝炎無關;血清miR-6861-5p水平與淋巴結轉移、腫瘤分期、遠處轉移有明顯相關性;低表達組無病生存時間、總生存時間均長于高表達組。表明與健康人群相比,血清miR-6861-5p在原發性肝癌患者中水平較高,與患者腫瘤分期、轉移情況存在密切關系,監測其水平變化對評估患者預后有重要意義。其原因為血清miR-6861-5p在原發性肝癌血管內皮細胞形成中有所參與,可促使腫瘤分泌細胞因子,激活纖溶酶原,使腫瘤的遷移活動增強,在原發性肝癌患者中呈現明顯高表達,且其水平升高患者病情則更加嚴重,在疾病評估、預測預后中有較高的應用價值[12]。

綜上所述,血清miR-6861-5p在原發性肝癌患者中表達水平較高,與腫瘤分期、轉移情況之間具有相關性,監測其水平變化對評估患者病情及預后有重要意義。