晚期肺癌血清Ape1/Ref-1表達及其對阿帕替尼聯合三線化療療效的預測價值

王 祥 丁紀濤 劉 洋

肺癌屬于臨床上常見的惡性腫瘤之一,在所有惡性腫瘤疾病中,肺癌位居死亡率第一位[1]。目前將肺癌病理類型主要劃分為鱗癌、腺癌等。肺癌患者常見臨床癥狀為咳嗽、腹部脹痛等,嚴重威脅患者的生命安全。目前臨床上常采用手術、放化療等方式進行治療,但是對于晚期患者,無法采用手術治療,僅能進行化療治療。在郝奐伶的研究中[2],研究報道阿帕替尼聯合常規三線化療治療晚期肺癌患者,可以有效抑制腫瘤發展,延長晚期肺癌患者生存時間。脫嘌呤脫嘧啶核酸內切酶1/氧化還原因子1(Ape1/Ref-1)屬于多功能蛋白,可以參與多種腫瘤疾病的發生和發展,如食管鱗癌[3]、胰腺癌[4]以及骨髓瘤[5]等。目前關于Ape1/Ref-1蛋白與晚期肺癌之間的關系研究較少。本次研究主要探討血清Ape1/Ref-1晚期肺癌組織中的表達及對阿帕替尼聯合三線化療療效的預測價值,內容如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象

收集2017年12月至2019年10月在我院就診的70例晚期肺癌患者病例資料。納入標準:本次研究納入的研究對象均符合《CSCO原發性肺癌診療指南2016》中關于晚期肺癌疾病的診斷標準[6];入院資料均完整;心、肺等重要臟器功能均正常;均同意接受化療治療;治療依從性較好;均未出現遠處轉移的情況;近半年內均未進行抗腫瘤治療;均經過影像學、細胞學等檢查證實;生存時間均大于3個月。排除標準:既往存在消化系統、免疫血液系統等疾病者;病灶組織未進行病理學檢查;拒絕予以化療治療;存在精神心理疾病者;具有化療治療史者;合并其他類型惡性腫瘤疾病者。

采用隨機數字表法進行分組,即對照組和研究組,均35例。對照組:男性22例,女性13例;年齡40～77歲,平均年齡(55.41±9.32)歲;病理類型:鱗癌21例,腺癌14例;組織學分化:低分化10例,中分化14例,高分化11例。研究組:男性20例,女性15例;年齡41～78歲,平均年齡(55.36±9.27)歲;病理類型:鱗癌23例,腺癌12例;組織學分化:低分化9例,中分化16例,高分化10例。兩組患者一般資料進行比較,差異無統計學意義(P>0.05),具有可比性。納入的研究對象均同意參加本次研究,已簽署知情同意書,且本研究已通過我院倫理委員會的批準。分別獲取兩組肺癌組織以及癌旁組織進行檢測。

1.2 治療方法

對照組采用常規三線化療治療。靜脈注射紫杉醇脂質體(160 mg/m2)、順鉑(75 mg/m2)、培美曲塞二鈉(500 mg/m2)、多西他賽(75 mg/m2)、卡鉑(350 mg/m2)、吉西他濱(1000 mg/m2),治療療程為6周。

研究組在對照組的基礎上再予以阿帕替尼藥物治療。口服方式服藥,0.25g/次,1次/d,治療療程為6周。

1.3 免疫組織化學染色法

獲取肺癌組織以及癌旁組織,常規脫蠟處理,不同梯度濃度的酒精溶液脫水處理,抗原修復,加入比例為1∶800Ape1/Ref-1一抗抗體,孵育過夜,PBS清洗,3次×5 min,再加二抗抗體,孵育,30 min后,PBS清洗,3次×5 min,DAB溶液顯色,自來水清洗,復染,干燥、封片。Ape1/Ref-1蛋白陽性表達表示不僅有細胞核表達,又存在細胞質以及核漿共表達,陽性細胞數≥10%,顏色呈現棕黃色或者深棕褐色,無色或淡黃色表示陰性[7]。

1.4 免疫蛋白印跡實驗

獲取上述肺癌組織以及癌旁組織,剪碎,加入PBS溶液清洗,裂解半小時后,取5 μl樣品,再加上樣緩沖溶液,煮沸5 min后,聚丙烯酰胺凝膠電泳,變性,電壓設為120 V,直至溴酚藍進入底部,取出凝膠,轉移至硝酸纖維素膜上,加入5%脫脂奶粉,于37 ℃封閉1.5 h,再在4 ℃下,加入比例為1∶800的Ape1/Ref-1一抗抗體溶液,再加入二抗抗體,于37 ℃反應,約1.5 h后,再加入顯色液,GAPDH為內參,檢測相對Ape1/Ref-1蛋白相對表達量。

1.5 統計學方法

2 結果

2.1 晚期肺癌及癌旁組織中Ape1/Ref-1蛋白陽性表達

晚期肺癌組織Ape1/Ref-1蛋白陽性表達率(91.43%)顯著高于癌旁組織(χ2=33.600,P=0.000),見表1。

表1 晚期肺癌及癌旁組織中Ape1/Ref-1蛋白陽性表達(例,%)

2.2 兩組晚期肺癌患者化療前后Ape1/Ref-1蛋白表達

化療前,兩組晚期肺癌患者Ape1/Ref-1蛋白相對表達量比較,差異無統計學意義(P>0.05);化療后,兩組Ape1/Ref-1蛋白相對表達量均明顯低于化療前,進一步組間比較,研究組Ape1/Ref-1蛋白相對表達量明顯低于對照組,差異具有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 兩組晚期肺癌患者化療前后Ape1/Ref-1蛋白相對表達量

2.3 晚期肺癌患者化療3個周期后生存情況

Ape1/Ref-1陰性組生存率(87.50%,35/40)顯著高于Ape1/Ref-1陽性組(60.00%,18/30)(χ2=3.949,P=0.047),研究組累積生存率(91.43%,32/35)顯著高于對照組(31.43%,11/35)(χ2=10.096,P=0.001),見圖1、圖2。

圖1 Ape1/Ref-1陽性組和Ape1/Ref-1陰性組K-M曲線

3 討論

晚期肺癌患者一般采用化療方式治療,可以延長患者生存時間,也有采用靶向治療,可以有效減輕對患者機體正常細胞的損傷程度[8]。目前關于晚期肺癌的治療策略準確性較低,并且多種生物學指標差異導致晚期肺癌患者對化療敏感性存在一定差異性。晚期肺癌患者經過化療治療后,5年生存率低于25%[9]。由此,積極尋找可預測化療療效的標志物具有重要意義。

Ape1/Ref-1屬于一類多功能因子,大量來源于組織細胞內,其發揮作用主要通過對轉錄因子的氧化還原狀態發生改變,進而影響轉錄因子的活性,另外其可作為限速酶,參與DNA堿基切除修復途徑[10]。越來越多的研究均表明,Ape1/Ref-1蛋白表達量與DNA修復活性之間存在一定關系,在多種腫瘤疾病病理過程中[11-12],Ape1/Ref-1蛋白均存在異常表達情況,如肝衰竭[13]、中晚期胰腺癌[14]、卵巢癌[15]等。本次研究結果發現與癌旁組織進行比較,晚期肺癌組織Ape1/Ref-1蛋白陽性表達顯著更高,進一步提示Ape1/Ref-1蛋白有利于晚期肺癌疾病的診斷。Ape1/Ref-1通過調節轉錄因子的活性程度,如c-Fos、c-Jun等,半胱氨酸殘基的氧化還原能力加強后,可以促使上述轉錄因子與DNA之間的相互作用能力,從而調控細胞增殖、分化等因子的表達,最終促進癌癥進展。在Guo等[16]的研究中,研究報道Ape1/Ref-1在晚期非小細胞肺癌組織中明顯高于癌旁組織。

阿帕替尼為一種新型靶分子藥物,可以通過抑制VEGF、PDGFR等,從而抑制相關傳導信號通路的活性,抑制腫瘤血管的生成,最終抑制腫瘤疾病的發生和發展。本次研究結果顯示與對照組比較,研究組Ape1/Ref-1蛋白相對表達量明顯下降,雖然對照組經常規三線化療后可顯著降低Ape1/Ref-1蛋白量,但是效果較阿帕替尼聯合常規三線化療低。結果提示阿帕替尼可有效降低Ape1/Ref-1蛋白表達量,同時也說明Ape1/Ref-1蛋白表達量越低,說明化療療效越理想。在實際臨床應用中,阿帕替尼藥物不良反應發生率較低,安全性高[17]。本次研究進一步觀察Ape1/Ref-1+組和Ape1/Ref-1-組生存時間,發現Ape1/Ref-1-組生存率顯著低于Ape1/Ref-1+組,表明通過檢測Ape1/Ref-1表達可以預測患者預后;同時觀察對照組與研究組患者生存預后,發現研究組生存率顯著高于對照組,即使Ape1/Ref-1陽性蛋白表達高,但經有效的化療治療后,也可顯著提高患者生存率。

綜上所述,Ape1/Ref-1在晚期肺癌組織中呈現高表達,其蛋白表達越低,表明阿帕替尼聯合三線化療療效越好,檢測其表達對患者預后具有一定預測作用。但是本次研究也存在局限性,樣本量少,結果可能存在偏倚性,另外關于對照組與研究組的生存時間,尚未控制變量,研究結果的準確性有待提高。