白菜中19種農(nóng)藥殘留檢測能力驗證

曾華芳

摘 要：目的：參加福建省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳組織的2022年度農(nóng)藥殘留檢測能力驗證項目，評價實驗室白菜中農(nóng)藥殘留定量檢測能力，提高實驗室檢驗人員檢測水平。方法：根據(jù)作業(yè)指導(dǎo)書，參照國家標(biāo)準(zhǔn)GB 23200.121—2021中基本操作步驟，采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法對考核樣進行檢測，外標(biāo)定量法。結(jié)果：樣品空白未檢出農(nóng)藥殘留；樣品白菜中吡唑醚菌酯檢測值為0.17 mg·kg-1。一個月后考核結(jié)果為合格，通過能力驗證。結(jié)論：參加該次能力驗證活動，發(fā)現(xiàn)并解決了檢驗人員在實驗過程中存在的問題，提升了檢驗人員的檢測能力。

關(guān)鍵詞：白菜；農(nóng)藥殘留；檢測能力驗證

Abstract： Objective： To participate in the 2022 pesticide residue detection capacity verification project organized by Fujian Provincial Department of Agriculture and Rural Affairs， to evaluate the laboratorys ability to quantitatively detect pesticide residues in Chinese cabbage， and to improve the testing level of laboratory inspectors. Method： According to the operation guide， referring to the basic operation steps in the national standard GB 23200.121—2021， liquid chromatography-mass spectrometry was used to test the assessment samples with external standard quantitative method. Result： No pesticide residues were detected in the sample blank; the detection value of pyraclostrobin in the sample Chinese cabbage was 0.17 mg·kg-1. The result of the assessment after one month was qualified and passed the proficiency testing. Conclusion： Participating in this detection capacity verification project has identified and solved the problems of the inspectors in the experimental process， and improved the detection capacity of the inspectors.

Keywords： Chinese cabbage; pesticide residues; detection capacity verification

隨著現(xiàn)代農(nóng)業(yè)的高質(zhì)量發(fā)展，農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn)對農(nóng)藥、抗生素和激素等外源物質(zhì)依賴日益加深。農(nóng)藥在農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn)過程中使用量較大、農(nóng)藥不規(guī)范使用以及農(nóng)藥本身質(zhì)量問題等都是農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留超標(biāo)的原因。因此農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留檢測是把控農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量和安全的第一道關(guān)口，關(guān)乎著人們的食品安全、農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)的發(fā)展和社會穩(wěn)定[1]。本文依托于參加福建省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳開展的2022年農(nóng)藥殘留檢測能力驗證項目，介紹了白菜中的農(nóng)藥殘留量測定能力驗證的整個流程[2]，并總結(jié)了能力驗證需要注意的幾點關(guān)鍵事項，目的在于加強交流學(xué)習(xí)，促進縣級檢測中心農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留檢測技術(shù)和管理水平的提升。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

能力驗證實驗的盲樣由福建省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗檢測中心統(tǒng)一制備發(fā)放，本次盲樣的基質(zhì)為白菜，樣品處于冷凍勻漿狀態(tài)，樣品包括1份約為200 g的考核樣和1份約為200 g的空白樣。

19種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品（吡蟲啉、啶蟲脒、多菌靈、噻嗪酮、噻菌靈、克百威、嘧菌酯、烯酰嗎啉、噻螨酮、咪鮮胺、吡唑醚菌酯、茚蟲威、滅多威、3-羥基克百威、甲萘威、抗蚜威、戊唑醇、甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽和莠滅凈），質(zhì)量濃度為100 ?g·mL-1，壇墨質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心；乙腈（HPLC）、甲醇（色譜純）、冰乙酸（AR）和甲酸（HPLC），賽默飛有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

LX50-QSight110液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國珀金埃爾默公司）、電子天平（福州志華科學(xué)儀器有限公司）、振蕩器（江蘇省金壇市江南儀器廠）和漩渦儀等。

1.3 方法

1.3.1 驗證項目和方法

本次參加能力驗證的項目共19種，包括吡蟲啉、啶蟲脒、多菌靈、噻菌靈、克百威、嘧菌酯、烯酰嗎啉、咪鮮胺、吡唑醚菌酯、茚蟲威、滅多威、3-羥基克百威、甲萘威、抗蚜威、戊唑醇、甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽、噻嗪酮、噻螨酮、莠滅凈[3]，根據(jù)本實驗室資質(zhì)認(rèn)定證書附表中的承檢范圍確定。

根據(jù)實驗室的實際條件，能力驗證選擇的方法是《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 植物源性食品中331種農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測定 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法》（GB 23200.121—2021）[4]。樣品用有機溶劑乙腈進行提取，所得提取液經(jīng)凈化進行液質(zhì)聯(lián)用儀上機檢測，外標(biāo)法定量。

1.3.2 實驗條件

（1）液相色譜條件。色譜柱：C18柱（100 mm×2.1 mm，2.7 μm）；柱溫：35 ℃；流動相：A為2 mmol·L-1甲酸銨-甲酸水溶液，B為2 mmol·L-1甲酸銨-甲酸甲醇溶液；進樣量：2.0 μL；流速：0.25 mL·min-1；流動相梯度洗脫見表1。

（2）質(zhì)譜條件。離子源類型：ESI電噴霧離子源；正離子掃描方式；多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；電噴霧電壓：5 000 V；霧化器溫度：180 ℃；離子源溫度：250 ℃。19種農(nóng)藥及其代謝物的質(zhì)譜參數(shù)見表2。

1.4 能力驗證測定

1.4.1 樣品領(lǐng)取

樣品的領(lǐng)取是能力驗證較重要的步驟之一。樣品是省廳檢測中心直接用順豐冷鏈速運，檢測人員應(yīng)隨時跟蹤快遞信息，確保及時收到樣品，收到樣品時應(yīng)檢查樣品是否存在破裂撒漏等現(xiàn)象，若出現(xiàn)上述現(xiàn)象應(yīng)立即與省廳檢測中心聯(lián)系。

1.4.2 樣品的提取

分別稱取解凍至室溫的樣品白菜和樣品空白各10 g于50 mL離心管中，各3個平行，另外取空離心管做試劑空白。分別加入10 mL乙腈、1顆陶瓷均質(zhì)子，劇烈振蕩1 min；加入提取鹽包（內(nèi)含4 g無水硫酸鎂、1 g氯化鈉、1 g檸檬酸鈉二水合物、0.5 g檸檬酸二鈉鹽倍半水合物），劇烈振蕩1 min，4 200 r·min-1離心5 min。

1.4.3 樣品的凈化

從每個離心管吸取上層乙腈溶液5.00 mL，分別加入凈化鹽管（內(nèi)含除水劑和凈化材料），再經(jīng)混勻用渦旋儀渦旋1 min，4 200 r·min-1離心5 min，吸取上清液經(jīng)過濾膜，等候測定。

1.4.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的配制

將上述1.1中的19種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品（濃度為100 ?g·mL-1）用乙腈配制成濃度為2 ?g·mL-1的19種農(nóng)藥混標(biāo)溶液A，再將混標(biāo)溶液A稀釋成濃度梯度分別為0.005 ?g·mL-1、0.010 ?g·mL-1、0.020 ?g·mL-1、0.050 ?g·mL-1和0.100 ?g·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，上機測定，建立標(biāo)曲曲線。

1.4.5 結(jié)果上報

上機檢測完畢后，實驗人員應(yīng)及時打印檢測結(jié)果并分析數(shù)據(jù)得到結(jié)果，收集色譜圖以及做好原始記錄的完善，結(jié)果數(shù)據(jù)分析確認(rèn)無誤后，在規(guī)定的時間內(nèi)提交驗證結(jié)果以及報送圖譜與原始記錄等，然后針對此次能力驗證進行全面梳理，及時進行分析總結(jié)與整理歸檔工作。

2 結(jié)果與分析

2.1 定性和定量檢測結(jié)果

為防止待測液目標(biāo)未知物衰減，樣品處理結(jié)束后立即安排上機檢測，允許的情況下，每個樣品上機重復(fù)測定3次以上，減少系統(tǒng)誤差。初檢結(jié)果顯示，樣品空白未檢出農(nóng)藥殘留；樣品白菜檢測出含有吡唑醚菌酯，其余18種農(nóng)藥均未檢出，檢出結(jié)果如表3所示。

2.2 回收率試驗

根據(jù)初檢結(jié)果，樣品白菜含有的吡唑醚菌酯平均濃度為0.202 mg·kg-1。稱取3個空白樣品10 g，分別加入1 mL 混標(biāo)溶液A以及9 mL的乙腈，剩余步驟與1.4.2、1.4.3步驟一致，獲得加標(biāo)待測液，再進行上機測定，計算回收率[回收率=（加標(biāo)濃度-初檢濃度）/質(zhì)控添加濃度×100%]，結(jié)果如表4所示。

2.3 能力驗證結(jié)果

通過對樣品空白、樣品白菜以及加標(biāo)回收質(zhì)控樣進行上機檢測分析，質(zhì)控回收率滿足70%～120%這一要求的范圍。為使結(jié)果更為準(zhǔn)確，將樣品檢出值經(jīng)質(zhì)控回收率矯正后上報結(jié)果，即考核盲樣中檢出農(nóng)藥及含量：樣品空白為未檢出；樣品白菜中檢出吡唑醚菌酯檢測值為0.17 mg·kg-1，結(jié)果上報1個月后收到反饋結(jié)果為合格，通過此次能力驗證。

3 農(nóng)殘檢測能力驗證的注意事項

3.1 樣品保存

收到的樣品處于冷凍狀態(tài)，樣品可能存在水和冰晶，此時應(yīng)重新勻漿再取樣檢測。

3.2 稱量

稱量樣品時應(yīng)注意是否具有代表性，盡量用比較大的稱量勺，減少樣品間的差異性；瓜果類冷凍蔬菜樣品，需要在完全解凍后再均勻混合處理進行稱量，以保證檢測數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性[5]。稱量樣品時應(yīng)注意是否過度解凍；稱量之前應(yīng)該充分?jǐn)嚢瑁环Q量時盡量使用開口較大的容器，可以避免樣品粘在容器邊緣；稱量前應(yīng)規(guī)劃好樣品的用量，防止實驗過程中出現(xiàn)過失時需要重新稱取樣品而樣品量不夠的情況。

3.3 提取

根據(jù)實驗標(biāo)準(zhǔn)操作，應(yīng)注意樣品是深綠色時，如青菜椒、菠菜、菜心等，可以在均質(zhì)前加入石墨粉先將大部分色素去除，再進行提取；樣品為汁液時，如桃汁、菠菜汁等，這類樣品含水分多且呈酸性，建議在稱取之前先將pH調(diào)制中性，再進行提取。

3.4 標(biāo)準(zhǔn)品配制

（1）標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)按說明書要求來存放。濃度為500～1 000 mg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)品，一般存放溫度在-18 ℃左右，有效期為6個月；濃度為1～10 mg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)品，一般存放溫度在0～5 ℃，有效期為1個月；濃度為0.5～1.0 mg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)品，一般存放溫度在0～5 ℃，有效期為2～3周。

（2）實驗室管理標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)該做到規(guī)范并且可追溯，應(yīng)建立標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)管理臺賬和配制領(lǐng)用臺賬。每種標(biāo)準(zhǔn)品都能溯源到所購買標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)證書。

（3）標(biāo)準(zhǔn)品在配制時應(yīng)逐級稀釋，做到現(xiàn)配現(xiàn)用，應(yīng)使用在保質(zhì)期內(nèi)且新開封的標(biāo)準(zhǔn)品，避免標(biāo)準(zhǔn)品放置時間過久出現(xiàn)濃度變化的情況。

（4）當(dāng)標(biāo)液濃度與樣品的濃度相差較大時若使用單點校準(zhǔn)，容易導(dǎo)致結(jié)果偏差較大，因此本實驗采用五點校準(zhǔn)。

3.5 檢測過程中質(zhì)量控制

①先做試劑空白，根據(jù)空白值高低來判斷試劑是否有問題或者是器皿是否被污染。②質(zhì)量控制加標(biāo)時盡量使用混標(biāo)進行添加，避免因添加溶劑體積過大而對結(jié)果造成影響。③回收率試驗時，可用樣品空白進行添加，添加的濃度應(yīng)盡量與考核樣品初步定量一致，以確保數(shù)據(jù)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

3.6 儀器設(shè)備維護

在接到能力驗證通知時，檢測人員應(yīng)對儀器設(shè)備進行全方位維護[5]，對儀器狀態(tài)有清晰的把握，及時確定儀器設(shè)備的準(zhǔn)確度、靈敏度、穩(wěn)定性等各項關(guān)鍵參數(shù)。可將新配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液進行上機測定，與之前記錄的標(biāo)準(zhǔn)溶液響應(yīng)值進行比較，響應(yīng)值一致，則表明儀器設(shè)備正常，否則需一一排查是否需要更換色譜柱、更換進樣隔墊、清洗離子源等，最終使設(shè)備處于最佳運行狀態(tài)。

3.7 數(shù)據(jù)處理

（1）在日常實驗中，需要加強實驗的前處理過程，否則容易出現(xiàn)結(jié)果不平行、回收率偏高或偏低等。如若出現(xiàn)兩個樣品結(jié)果不平行的情況，首先要排除儀器問題，再排查前處理環(huán)節(jié)問題。

（2）原始記錄應(yīng)及時填寫，不能補記；所填寫的信息應(yīng)該完整并且可追溯；填寫有效數(shù)字的數(shù)位要正確，并且使用國家規(guī)定的法定計量單位；有效數(shù)字計算應(yīng)符合有效數(shù)字運算規(guī)定；數(shù)值修約應(yīng)符合GB/T 8170—2008標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定；農(nóng)藥殘留和農(nóng)藥污染物檢測的計算結(jié)果一般保留2位有效數(shù)字，若含量超過1 mg·L-1時，保留3位有效數(shù)字。

4 結(jié)論

農(nóng)藥殘留能力驗證結(jié)果是否合格直接反映了實驗室是否具備農(nóng)藥殘留檢測能力。要想順利通過能力驗證，檢驗人員應(yīng)夯實基本功，規(guī)范各項操作規(guī)程，不斷分析總結(jié)，提升檢測水平，最終為農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全以及人們的身體健康提供保障。本文以福建省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳組織的農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留能力驗證為例，分享整個實踐過程中應(yīng)注意的各項關(guān)鍵點，旨在于加強交流學(xué)習(xí)，為農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留檢測機構(gòu)提高能力驗證水平提供參考和借鑒。

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