新生兒急性呼吸窘迫綜合征患兒血清miR-877-5p表達變化及其與病情嚴重程度和預后的關系

程旺松，蘇小智，陳鼎瑞

1 深圳市龍華區中心醫院 廣東醫科大學附屬龍華中心醫院新生兒科，廣東深圳518110；2 河源市深河人民醫院新生兒科

新生兒急性呼吸窘迫綜合征（NARDS）是由于缺乏肺泡表面活性物質，出生后不久即可出現進行性加重的呼吸窘迫和呼吸衰竭，其病理上有肺透明膜的改變，故又被稱為新生兒肺透明膜病，多見于早產兒。近年來，隨著早產兒數量逐漸增多，NARDS的發病率也隨之升高。NARDS的病死率為30%～40%，是導致新生兒死亡的重要原因［1］。肺部炎癥反應失控是導致NARDS發生、發展的重要原因［2］。有研究表明，微小RNA（miRNA）能夠通過調控炎癥反應、免疫應答、肺泡表面活性物質等參與NARDS的發生、發展［3］。miR-877-5p是一種高度保守的miRNA家族成員。有研究報道，miR-877-5p在呼吸道合胞病毒感染嬰兒外周血中表達下調，并且其表達越低，病情越重［4］。但目前血清miR-877-5p表達與NARDS病情嚴重程度和預后的關系尚不清楚。鑒于此，我們進行了相關研究。現報告如下。

1.料與方法

1.1.床資料 選擇2018年1月—2023年1月深圳市龍華區中心醫院收治的NARDS患兒95例（觀察組）。納入標準：①符合NARDS診斷標準［5］；②發病至確診時間＜1周；③臨床資料完整。排除標準：①合并先天畸形或遺傳缺陷者；②合并其他肺部疾病者；③合并腦性過度換氣者；④合并原發性肺泡表面活性物質缺乏者；⑤合并心、肝、腎等重要臟器功能不全者；⑥合并惡性腫瘤者。其中，男61例、女34例，出生日齡1～28（18.65 ± 2.33）d，胎齡25～41（35.14 ± 2.51）周；分娩方式：經陰道分娩46例，剖宮產49例；病因：胎糞吸入9例，肺炎21例，膿毒癥36例，誤吸21例，其他8例。同期選擇健康新生兒40例（對照組），男26例、女14例，出生日齡1～28（18.44 ± 2.18）d，胎齡32～42（36.02 ± 2.25）周；分娩方式：經陰道分娩22例，剖宮產18例。兩組性別、出生日齡、胎齡、分娩方式具有可比性。本研究經深圳市龍華區中心醫院倫理委員會批準（倫理批號：2019-03-215），患兒監護人均知情同意并簽署書面知情同意書。

1.2.ARDS病情嚴重程度和預后評估 NARDS患兒入重癥監護室首次行機械通氣時記錄動脈血氧分壓、平均氣道壓、吸入氧濃度，計算氧指數。氧指數=平均氣道壓×吸入氧濃度×100/動脈血氧分壓。參照NARDS蒙特勒診斷標準［5］，根據氧指數評估NARDS病情嚴重程度。其中，NARDS輕度（氧指數4～＜8）38例、中度（氧指數≥8～＜16）35例、重度（氧指數≥16）22例。記錄NARDS患兒28 d內臨床結局，其中死亡21例、存活74例。

1.3.清miR-877-5p表達檢測 采集所有新生兒外周靜脈血3 mL，3 000 r/min離心15 min、離心半徑10 cm，留取上層血清，-80 ℃冰箱保存。取部分血清，采用TRIzol法提取血清總RNA，經微量分光光度計鑒定，OD260/OD280為1.8～2.0。按TaKaRa反轉錄試劑盒說明將總RNA反轉錄合成為cDNA。反轉錄條件：37 ℃ 1 h，80 ℃ 5 s。以cDNA為模板，按SYBR?Premix Ex TaqTM試劑盒說明進行實時熒光定量聚合酶鏈式反應。引物序列：miR-877-5p上游引物5'-AGTCCATTCCACGCCTAC-3'、下游引物5'-GAGCACGATCAGAACAT-3'，U6上游引物5'-GAACGGGAAGCTCACTGG-3'、下游引物5'-GCCTGCTTCACCACCTTCT-3'。PCR反應體系共20 μL：cDNA模板1 μL，上下游引物各0.5 μL，Universal miRNA qPCR primer 0.5 μL，2 × TransStart?Top Green qPCR SurperMix 10 μL，無核酸酶水7.5 μL；反應條件：95 ℃ 90 s，95 ℃ 30 s、63 ℃ 30 s、72 ℃ 15 s共40個循環。以U6為內參，采用2-ΔΔCT法計算血清miR-877-5p相對表達量。

1.4 血清IL-1β、IL-6、TNF-α檢測 取剩余血清，采用酶聯免疫吸附試驗檢測血清IL-1β、IL-6、TNF-α。

1.5.計學方法 采用SPSS28.0統計軟件。符合正態分布的計量資料以±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，進一步兩兩比較采用LSD-t檢驗；兩組間比較采用t檢驗或Z檢驗；不符合正態分布的計量資料以M（P25，P75）表示，多組間比較采用單因素方差分析，進一步兩兩比較采用Z檢驗；兩組間比較采用Z檢驗。計數資料比較采用χ2檢驗。相關性分析采用Spearman相關分析法。預測效能分析采用受試者工作特征（ROC）曲線。P＜0.05為差異有統計學意義。

2.果

2.1.組血清miR-877-5p表達及IL-1β、IL-6、TNF-α水平比較 見表1。

表1.組血清miR-877-5p表達及IL-1β、IL-6、TNF-α水平比較

2.2.同病情嚴重程度NARDS患兒血清miR-877-5p表達及IL-1β、IL-6、TNF-α水平比較 見表2。

表2.同病情嚴重程度NARDS患兒血清miR-877-5p表達及IL-1β、IL-6、TNF-α水平比較

2.3.ARDS患兒血清miR-877-5表達與氧指數及血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平的關系 NARDS患兒氧指數為11.00（6.00，15.00）。Spearman相關分析顯示，NARDS患兒血清miR-877-5p表達與氧指數及血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平均呈負相關關系（rs分別為-0.785、-0.779、-0.778、-0.788，P均＜0.01）。

2.4.ARDS患兒死亡者與存活者血清miR-877-5p表達比較 NARDS患兒死亡者與存活者血清miR-877-5p表達分別為0.84（0.64，0.97）、1.11（0.99，1.21）。NARDS患兒死亡者血清miR-877-5p表達低于其存活者（Z=4.252，P＜0.01）。

2.5.清miR-877-5p表達對NARDS診斷和預后的預測效能分析結果 ROC曲線分析顯示，血清miR-877-5p表達診斷NARDS的曲線下面積（AUC）為0.857（95%CI：0.787～0.911），其最佳截斷值為1.23，此時其診斷NARDS的靈敏度為73.68%、特異度為95.00%；血清miR-877-5p表達預測NARDS死亡的AUC為0.805（95%CI：0.711～0.879），其最佳截斷值為0.97，此時其預測NARDS死亡的靈敏度為80.95%、特異度為75.68%。

3.論

NARDS是新生兒重癥監護室常見的危重癥之一，其發病不局限于剖宮產、早產、妊娠期合并癥、胎膜早破、胎兒宮內窘迫等圍產期因素，任何引起急性呼吸窘迫綜合征的因素均可誘發NARDS［6-7］。雖然NARDS與兒童或成人急性呼吸窘迫綜合征有著共同的發病危險因素和相同的病理生理表現，但NARDS還具有早產、胎糞吸入、胎膜早破、胎兒窘迫等特有的誘發因素，以及肺成熟度、肺功能和免疫功能等生理差異。近年來，隨著NARDS蒙特勒診斷標準［5］發布，NARDS診斷和治療取得了較大進展，但呼吸支持仍然是目前NARDS最主要的治療方法，臨床尚缺乏特效的治療手段，故NARDS患兒病死率仍然較高。因此，深入探索NARDS發生、發展的分子機制具有重要意義［8］。

研究認為，炎癥反應是NARDS發生、發展的重要病理生理基礎。肺臟具有獨特的先天免疫系統，當受到感染或創傷刺激時激活其先天免疫系統，可產生細胞因子、抗體、黏液等效應因子構建免疫屏障，以維持肺臟免疫微環境穩態。但當病原微生物突破防御屏障時可引起肺臟免疫穩態失控，引起失控性炎癥反應，加劇肺泡和肺毛細血管損害，最終導致急性呼吸窘迫綜合征發生［9］。miRNA是一類由18～25個核苷酸組成的非編碼單鏈小RNA分子，能夠通過堿基互補配對的方式與靶mRNA的3'非翻譯區特異性結合，誘導mRNA降解或抑制其翻譯，通過介導炎癥反應參與急性呼吸窘迫綜合征的發生、發展［10-11］。miR-877-5p是一種高度保守的miRNA家族成員，定位于人染色體6p21.33。既往研究報道，miR-877-5p可作為抑癌基因抑制肺癌細胞的增殖、侵襲和遷移［12-13］。近年研究發現，miR-877-5p能夠靶向叉頭框蛋白M1抑制炎癥反應來改善關節功能，還能通過抑制乙酰氨基酚誘導的炎癥反應來改善肝損傷［14-15］。上述研究表明，miR-877-5p具有抗炎作用。WANG等［4］研究報道，miR-877-5p能夠靶向IL-13受體A1抑制呼吸道合胞病毒誘導的嬰幼兒炎癥反應。而病毒感染是急性呼吸窘迫綜合征常見的一個致病原因［16］。由此，我們推測miR-877-5p可能與NARDS的發生、發展有關。

本研究結果顯示，觀察組血清miR-877-5p表達低于對照組；隨著病情加重，NARDS患兒血清miR-877-5p表達逐漸降低；NARDS患兒死亡者血清miR-877-5p表達低于其存活者。結果表明，miR-877-5p能夠參與NARDS的發生、發展，并與患兒預后密切相關。IL-1β、IL-6和TNF-α是反映機體炎癥反應的重要細胞因子，可參與急性呼吸窘迫綜合征的發生、發展。本研究結果發現，觀察組血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平高于對照組；隨著病情加重，NARDS患兒血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平逐漸升高。進一步證實，炎癥反應能夠參與NARDS的發生、發展。本研究相關分析顯示，NARDS患兒血清miR-877-5p表達與氧指數和血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平均呈負相關關系。結果提示，miR-877-5p可能通過調控IL-1β、IL-6、TNF-α等炎癥因子參與NARDS的發生、發展。究其原因，miR-877-5p能夠激活細胞周期蛋白依賴性激酶抑制因子1B，通過調控多條信號傳導通路誘導IL-1β、IL-6、TNF-α等炎癥細胞因子表達，引起肺部炎癥和結構破壞，最終導致NARDS病情加重和預后不良［17-18］。本研究ROC曲線分析顯示，血清miR-877-5p表達診斷NARDS的曲線下面積為0.857，其最佳截斷值為1.23，此時其診斷NARDS的靈敏度和特異度分別為73.68%、95.00%；血清miR-877-5p表達預測NARDS死亡的曲線下面積為0.805，其最佳截斷值為0.97，此時其預測NARDS死亡的靈敏度和特異度分別為80.95%、75.68%。結果提示，miR-877-5p可作用NARDS診斷和預后評估的血清生物學標志物。

綜上所述，NARDS患兒血清miR-877-5p表達降低，其表達變化與病情嚴重程度和預后密切相關。