結核性漿膜炎患者應用T 細胞斑點試驗、腺苷脫氨酶檢測的診斷價值

閆 坤，任立軍，劉 薇，楊媛媛，張 欣

（1.包鋼集團第三職工醫院感染疾病科；2.包鋼集團第三職工醫院急診科，內蒙古 包頭 014010）

結核性漿膜炎起病隱匿，多與肝硬化、肺炎等因素所致的漿膜腔積液混淆，痰結合分歧桿菌培養為診斷結核性漿膜炎的金標準，但該診斷方式的培養周期相對較長[1]。腺苷脫氨酶（ADA）是參與嘌呤核苷代謝的一種酶，在淋巴細胞內含量最多，其活性增強則表示機體局部細胞出現免疫活化，發生結核性漿膜炎時因細胞受刺激漿膜腔積液中淋巴細胞明顯增多，但在其他導致免疫功能障礙的疾病中也可出現升高現象[2]。結核感染T 細胞斑點試驗（T-SPOT.TB）是將酶聯免疫斑點技術作為檢測原理，主要檢測結核桿菌特異性抗原早期分泌抗原靶6 和培養濾過蛋白刺激T 淋巴細胞產生的γ-干擾素，有著簡便快捷、檢測效率高等優勢[3]。基于此，本研究將針對結核性漿膜炎患者應用T-SPOT.TB 檢測、ADA 檢測的診斷價值進行探討與分析，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2020 年10 月至2022 年10 月包鋼集團第三職工醫院所收治的160 例漿膜腔積液患者，進行前瞻性研究，根據痰結核分歧桿菌培養檢查結果分為非結核性漿膜炎組（87 例）和結核性漿膜炎組（73 例）。非結核性漿膜炎組患者年齡26~70 歲，平均（41.35±3.20）歲；男性48 例，女性39 例。結核性漿膜炎組患者年齡25~70 歲，平均（41.37±3.22）歲；男性49 例，女性24 例。對比兩組患者一般資料，差異無統計學意義（P＞0.05），組間具有可比性。納入標準：符合《漿膜積液細胞圖譜新解及病例分析》[4]中漿膜腔積液的診斷標準；影像學檢查結果顯示漿膜腔有明顯積液者；結核性漿膜炎組患者同時經實驗室診斷為胸腔積液結核桿菌培養陽性，有發熱、盜汗、胸痛等相應臨床表現；非結核漿膜炎組患者已確診為其他疾病，隨訪1~3 個月無結核病表現等。排除標準：近3 個月有胸部手術、創傷史者；病因診斷不明確者；接受過抗結核治療者等。本研究已經院內醫學倫理委員會批準，且患者均自愿簽署知情同意書。

1.2 檢測方法

1.2.1 痰結核分歧桿菌培養 采集兩組患者痰液樣本約4 mL，放入適合結核桿菌生長的培養基中進行培養，將培養基呈傾斜狀態放置，形成斜面，若無菌落生長則為陰性，菌落生長于斜面則為陽性。

1.2.2 T-SPOT.TB 檢測 ①外周血T-SPOT.TB 檢測：采集患者空腹外周血大約3 mL，并將其置于抗凝管中，在6 h 內送檢，利用RPMI 1640 培養液、Ficoll 淋巴細胞分離液，以密度梯度離心法提取血液中的單個核細胞，分離完成后通過AIM-V 培養液將單個核細胞濃度調整至2.5×105個/mL。在T-SPOT.TB 試劑盒微孔板上各孔分別注入50 μL AIM-V 培養液（陰性對照）、50 μL 植物血凝素（陽性對照）、50 μL 結核分歧桿菌特異抗原ESAT-6（A孔）、50 μL 抗原CEP-10（B 孔），然后各微孔分別統一注入100 μL 標準溶液（濃度為2.5×105個/mL 的單個核細胞工作液），然后將微孔板放置于37 ℃、5% CO2培養箱，16~20 h 后取出，采用磷酸鹽緩沖溶液洗板，重復4 次后，各微孔中加入由堿性磷酸酶標記的二抗（γ-干擾素抗體），于2~8 ℃的條件下孵育60 min，再次進行4 次洗板，注入底物顯色溶液并以正常室溫避光孵育7 min，采用去離子水重復沖洗直至反應終止，于室溫下干燥2~3 h 后，利用酶聯免疫斑點分析儀[ 復星診斷科技（長沙）有限公司，型號：ES-15]計數斑點形成細胞數（SFC），一個斑點代表1 個效應T 細胞。②漿膜腔T-SPOT.TB 檢測：抽取兩組患者約50 mL 漿膜腔積液放置于肝素抗凝管中，其余操作同外周血T-SPOT.TB 檢測。③陽性判斷標準：使用斑點計數法判斷，陰性對照斑點數為0~5 個，若測試孔A 或B 斑點數減去陰性對照孔斑點數≥ 6 個，或陰性對照斑點數≥ 6 個，測試孔A 或B 斑點數≥ 2 倍陰性對照孔斑點數則為陽性[5]。

表1 兩組患者外周血、漿膜腔積液SFC及漿膜腔積液ADA 水平比較(±s)

表1 兩組患者外周血、漿膜腔積液SFC及漿膜腔積液ADA 水平比較(±s)

注：與外周血T-SPOT.TB 檢測比，*P＜0.05。SFC：斑點形成細胞數；T-SPOT.TB：結核感染T 細胞斑點試驗；ADA：腺苷脫氨酶。

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1.2.3 ADA 檢測 抽取兩組患者約5 mL 漿膜腔積液，離心（5 000 r/min，10 min）后，取上清液，通過生化分析儀（浙江普施康生物科技有限公司，型號：MS200）檢測ADA，若ADA＞30 U/L 則為陽性[6]。

1.3 觀察指標①統計兩組患者外周血、漿膜腔積液T-SPOT.TB 檢測的SFC，以及漿膜腔積液ADA 水平。②比較3 種檢測方法診斷結核性漿膜炎的檢測結果比較。③比較3 種檢測方法診斷結核性漿膜炎的診斷效能。

1.4 統計學方法采用SPSS 20.0 統計學軟件分析本研究所有數據，計量資料均使用S-W 法檢驗證實服從正態分布，以(±s)表示，采用t檢驗；計數資料以[ 例(%)]表示，兩組間比較采用χ2檢驗，3 組間比較采用χ2趨勢檢驗。以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者外周血、漿膜腔積液SFC 及漿膜腔積液ADA 水平比較結核性漿膜炎組外周血、漿膜腔積液SFC 及漿膜腔積液ADA 水平均顯著高于非結核性漿膜炎組；且漿膜炎積液SFC 較外周血更高，差異均有統計學意義（均P＜0.05），見表1。

2.2 3 種檢測方法診斷結核性漿膜炎的檢測結果比較外周血T-SPOT.TB、漿膜腔積液T-SPOT.TB、漿膜腔積液ADA 檢測診斷結核性漿膜炎的陽性率分別為56.25%（90/160）、60.62%（97/160）、53.75%（86/160），3 種檢測方法的陽性率及兩者間兩兩比較，差異均無統計學意義（均P＞0.05），見表2。

表2 3 種檢測方法診斷結核性漿膜炎的檢測結果比較(例)

2.3 3 種檢測方法診斷結核性漿膜炎的診斷效能比較漿膜腔積液T-SPOT.TB、外周血T-SPOT.TB 診斷結核性漿膜炎的靈敏度、準確度、陽性預測值、陰性預測值均顯著高于ADA 檢測，且漿膜腔積液T-SPOT.TB 診斷顯著高于外周血T-SPOT.TB，漿膜腔積液T-SPOT.TB 診斷結核性漿膜炎的特異度顯著高于ADA 檢測，差異均有統計學意義（均P＜0.05），見表3。

表3 3 種檢測方法診斷結核性漿膜炎的診斷效能比較

3 討論

結核性漿膜炎屬于一類較為常見的肺外結核類型，目前臨床上多采用痰培養檢查診斷該疾病，雖然靈敏度高，但送檢不及時、留取方式錯誤等均會影響痰標本檢測的陽性率，導致陽性率較低，且檢測周期較長，可能貽誤治療[7]。

SPOT.TB 可記錄機體中每個活化的結核特異效應T 細胞，并通過對結核特異效應T 細胞的檢測判斷患者體內是否出現結核桿菌感染，且敏感度相對較高[8]。ADA 是一類可參與嘌呤核苷代謝的酶類物質，其可催化腺嘌呤核苷降解為次黃嘌呤核苷，而后經核苷磷酸化酶催化成次黃嘌呤。ADA 主要存在于淋巴細胞中，其水平與淋巴細胞的激活和分化有關，當患者發生結核性漿膜炎時，由于機體受到結核分歧桿菌的刺激，淋巴細胞可有不同程度的分化、激活，漿膜腔積液中淋巴細胞明顯增多，導致ADA 含量也顯著增多，從而可診斷為結核感染[9]。

雖然T-SPOT.TB 檢測可通過結合效應T 細胞來診斷患者是否出現結核感染，但當患者外周血中淋巴細胞減少時，仍有不確定結果或假陰性等情況出現，其診斷效能可隨之降低。漿膜炎積液T-SPOT.TB 檢測是從患者局部病灶直接獲取結核特異效應T 淋巴細胞，由于結核性漿膜炎患者結核桿菌可誘導機體淋巴細胞聚集于局部的炎癥反應，各類積液中淋巴細胞數量增多，遠遠多于外周血，因此漿膜腔積液T-SPOT.TB 檢測價值更高，可避免由于患者處于潛伏期或病情好轉時期而出現漏診、誤診[10]。由于漿膜腔積液患者本身已處于疾病狀態，其體內可能存在多種致病菌，且T-SPOT.TB 檢測雖對結核分歧桿菌存在較高的敏感性，但仍可檢出患者體內的非結核分歧桿菌，存在一定的陽性誤差。ADA 基本在淋巴細胞和淋巴組織中表達，但當患有淋巴瘤、感染性疾病等疾病時，漿膜腔積液中ADA 水平也會升高，因此診斷結核性漿膜炎的效能較差。本研究中，結核性胸膜炎漿膜炎組外周血、漿膜腔積液T-SPOT.TB 檢測出的SFC 及ADA 均顯著高于非結核性胸膜炎漿膜炎組，漿膜炎積液T-SPOT.TB 檢測出的SFC 均較外周血T-SPOT.TB 檢測更高，同時漿膜腔積液T-SPOT.TB、外周血T-SPOT.TB 診斷結核性漿膜炎的診斷效能均顯著高于ADA 檢測，且漿膜腔積液T-SPOT.TB 診斷顯著高于外周血T-SPOT.TB，漿膜腔積液T-SPOT.TB 診斷結核性漿膜炎的特異度顯著高于ADA 檢測，表示外周血、漿膜腔積液T-SPOT.TB 檢測及漿膜腔積液ADA 水平可診斷結核性漿膜炎，且漿膜腔積液T-SPOT.TB 檢測的診斷價值較高。

綜上，外周血、漿膜腔積液T-SPOT.TB 檢測及漿膜腔積液ADA 水平可診斷結核性漿膜炎，但T-SPOT.TB 檢測的診斷價值高于漿膜腔積液ADA 檢測，且漿膜腔積液T-SPOT.TB 檢測的診斷價值最高，可對結核性漿膜炎患者的病情診斷及預后評估起到一定的參考價值。