貴陽市發(fā)熱呼吸道癥候群病例常見細(xì)菌性病原體檢測與分析*

馬 青,楊 敏,劉 英,王 月,李世軍△

1.貴州省疾病預(yù)防控制中心,貴州貴陽 550004;2.貴陽市云巖區(qū)衛(wèi)生健康局,貴州貴陽 550004

發(fā)熱呼吸道癥候群(FRS)是一類由呼吸系統(tǒng)急性感染引起的以發(fā)熱及呼吸道癥狀為主要臨床表現(xiàn)的疾病,其病原體復(fù)雜,流行廣泛,易感人群眾多,發(fā)展迅速,部分危重患者可發(fā)展為急性呼吸窘迫綜合征甚至呼吸衰竭,最終死亡[1-3]。呼吸道感染的病原體種類繁多,除了常見的甲、乙型流感病毒之外,還有細(xì)菌、真菌、支原體、衣原體等,其病原譜受到年齡、性別、地域、氣候、經(jīng)濟(jì)情況、衛(wèi)生條件等多方面因素的影響,常見的細(xì)菌性感染性疾病是臨床常見的感染性疾病,常根據(jù)臨床經(jīng)驗(yàn)診斷和用藥[4]。因?yàn)椴缓侠硎褂每咕幬锛敖槿胄灾委熢龆?條件致病菌引起的呼吸道感染增多,感染程度隨著細(xì)菌譜的變遷和其對抗菌藥物的耐藥性不斷地增高,因此對呼吸道傳染病的主要病原體進(jìn)行準(zhǔn)確及時地分析和檢測十分重要[5-7]。本研究旨在對近年來貴陽市FRS病例細(xì)菌性病原體及其特征開展研究,分析病原譜的構(gòu)成和病原體流行特征,為呼吸道傳染病的預(yù)防和控制提供科學(xué)依據(jù),提高呼吸道傳染病的防控能力。

1 材料與方法

1.1標(biāo)本來源 采集來自貴陽市婦幼保健院、貴陽市肺科醫(yī)院、清鎮(zhèn)市第一人民醫(yī)院和貴陽市第五人民醫(yī)院4家監(jiān)測哨點(diǎn)醫(yī)院2018年9月至2019年12月FRS患者的標(biāo)本,采集155例患者共計381份標(biāo)本,其中全血138份、痰液88份、鼻咽拭子155份。全血標(biāo)本和痰液標(biāo)本用于檢測6種目標(biāo)菌,鼻咽拭子標(biāo)本用于肺炎支原體和肺炎衣原體的檢測。

1.2全血、痰液標(biāo)本的細(xì)菌性病原學(xué)檢測 根據(jù)國家傳染病監(jiān)測技術(shù)平臺項目《發(fā)熱呼吸道癥候群監(jiān)測技術(shù)方案》,將全血培養(yǎng)液和痰液標(biāo)本分別接種到血瓊脂培養(yǎng)基、巧克力瓊脂培養(yǎng)基和麥康凱瓊脂培養(yǎng)基,經(jīng)5% CO2培養(yǎng)箱放置24～48 h后,將可疑的目標(biāo)菌(肺炎鏈球菌、肺炎克雷伯菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、流感嗜血桿菌和A組乙型鏈球菌)進(jìn)行純培養(yǎng),再根據(jù)菌落形態(tài)、革蘭染色鏡檢、氧化酶試驗(yàn)、觸酶試驗(yàn)等進(jìn)行初步鑒定,最后通過實(shí)時熒光定量PCR法對疑似目標(biāo)菌核酸進(jìn)行鑒定。所用試劑盒為深圳生科原生物有限公司生產(chǎn)的肺炎鏈球菌核酸測定試劑盒、金黃色葡萄球菌核酸測定試劑盒、肺炎克雷伯菌核酸測定試劑盒、銅綠假單胞菌核酸測定試劑盒、A組乙型鏈球菌核酸測定試劑盒和流感嗜血桿菌核酸測定試劑盒。

1.3鼻咽拭子標(biāo)本的核酸檢測 運(yùn)用TaKaRa寶生物工程有限公司的MiniBEST Viral RNA/DNA Extraction Kit Ver.4.0 試劑盒提取核酸,然后用深圳深科原有限公司生產(chǎn)的肺炎支原體和肺炎衣原體核酸測定試劑盒對人體鼻咽拭子標(biāo)本中的病原體核酸進(jìn)行實(shí)時熒光定量PCR法檢測。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理 使用Excel2019進(jìn)行實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的整理,采用SPSS22.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計數(shù)資料以頻數(shù)或百分率表示,組間比較采用χ2檢驗(yàn),以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1患者基本情況 155例FRS患者中,男87例,女68例,分別占患者總數(shù)的56.13%和43.87%,男女性別比為1.28∶1.00。將155例患者按年齡分為5個年齡段:嬰幼兒(0～6歲)52例;青少年(>6～17歲)9例;青年(>17～45歲)11例;中年(>45～68歲)36例;老年(>68歲)47例。155例患者共采集到381份標(biāo)本,其中有88例患者均采集到3種標(biāo)本(全血、痰液、鼻咽拭子);有50例患者均采集到血液和鼻咽拭子標(biāo)本;有17例只采集到鼻咽拭子標(biāo)本。

2.2不同標(biāo)本病原體核酸檢出情況 從155例患者采集到的381份標(biāo)本中,未發(fā)現(xiàn)患者有混合感染的情況。88份痰液標(biāo)本中15份檢出病原體核酸,檢出率為17.05%;138份全血標(biāo)本中檢出1株金黃色葡萄球菌核酸,且與痰液標(biāo)本中檢出的金黃色葡萄球菌不是來自同一例患者。155份鼻咽拭子標(biāo)本中檢出肺炎支原體核酸6份;不同標(biāo)本的病原體核酸檢出率比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=28.047,P<0.05),以痰液標(biāo)本病原體核酸檢出率最高,為17.05%,全血標(biāo)本病原體核酸檢出率最低,為0.72%。見表1。

表1 不同標(biāo)本病原體核酸檢出率比較

2.3各類病原體核酸檢出情況 138份患者標(biāo)本(88例患者同時采集到全血和痰液,50例患者只采集到血液)應(yīng)用分離培養(yǎng)方法進(jìn)行檢測,病原體核酸總檢出率為11.59%(16/138);其中肺炎克雷伯菌核酸檢出率最高,為4.35%;肺炎鏈球菌和銅綠假單胞菌核酸檢出率均為2.17%,流感嗜血桿菌和金黃色葡萄球菌核酸檢出率均為1.45%。155份鼻咽拭子標(biāo)本中6份檢出肺炎支原體核酸,檢出率為3.87%,未檢出肺炎衣原體核酸。貴陽市FRS患者細(xì)菌性病原體核酸的檢出主要以肺炎克雷伯菌(4.35%)、肺炎鏈球菌(2.17%)和銅綠假單胞菌(2.17%)為主。見表2。

表2 FRS患者各類病原體核酸檢出情況

2.4不同性別、年齡患者的病原體核酸檢出情況 從性別分布來看,男性患者病原體核酸檢出率為16.09%(14/87),女性患者病原體核酸檢出率為11.76%(8/68),不同性別患者病原體檢出率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.587,P>0.05),但不同性別患者的構(gòu)成比不同,男性患者較女性患者多。從年齡分布來看,不同年齡組患者病原體核酸檢出率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=3.182,P>0.05)。但各年齡組患者的構(gòu)成比不同,病原體核酸檢出情況也不同;以0～6歲和>68歲的患者數(shù)最多;以0～6歲年齡病原體核酸檢出率最高,為21.15%,以肺炎支原體、肺炎克雷伯菌和肺炎鏈球菌為主;其次,>68歲年齡段病原體核酸檢出率較高,為12.77%,病原體檢出以肺炎支原體為主。見表3。

表3 FRS患者不同年齡病原體檢出情況

3 討 論

呼吸道癥候群患者的常見病原體為肺炎支原體和肺炎衣原體,其均為苛養(yǎng)菌,培養(yǎng)環(huán)境條件苛刻,甚至不能進(jìn)行培養(yǎng)[8],因此本研究直接采用實(shí)時熒光定量PCR法對人體鼻咽拭子標(biāo)本中的病原體核酸進(jìn)行檢測。實(shí)時熒光定量PCR法檢測過程中沒有引物、探針之間的拮抗,檢測結(jié)果更加準(zhǔn)確可靠,樣品的擴(kuò)增和實(shí)時的測定都基本在一個完全封閉的檢測體系中進(jìn)行和完成,很大程度上降低了被細(xì)菌污染的可能性,并且對于擴(kuò)增后的樣品無需額外進(jìn)行電泳等操作[9],為臨床鑒別診斷和治療細(xì)菌性呼吸道傳染病提供了更多的病原學(xué)依據(jù),與常用的傳統(tǒng)檢測方法相比靈敏度和特異度更高,對檢測肺炎衣原體與肺炎支原體這些難以培養(yǎng)的苛養(yǎng)菌優(yōu)勢也更加顯著[10]。

本研究結(jié)果顯示,88份痰液標(biāo)本中15份檢出目標(biāo)菌;138份全血標(biāo)本中檢出1株金黃色葡萄球菌且與痰液標(biāo)本中檢出金黃色葡萄球菌的患者不是同一例;155份鼻咽拭子標(biāo)本中6份檢出肺炎支原體核酸。不同標(biāo)本病原體核酸檢出率比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=28.047,P<0.05),以痰液標(biāo)本病原體核酸檢出率最高,為17.05%,痰液標(biāo)本的病原體核酸檢出率明顯高于全血標(biāo)本,全血標(biāo)本病原體核酸檢出率最低,為0.72%。鼻咽拭子標(biāo)本核酸檢出率為3.87%,檢出病原體以肺炎支原體為主,明顯高于2012-2013年貴陽市同類研究報道[11]。兒童社區(qū)獲得性肺炎和呼吸道感染常見的兩種病原體為肺炎支原體和肺炎衣原體,且這兩種病原體的聯(lián)合檢測在早期鑒別和診斷社區(qū)獲得性肺炎中有一定的參考價值,應(yīng)進(jìn)一步引起臨床的重視[12]。

138份患者標(biāo)本(88例患者同時采集到全血和痰液,50例患者只采集到血液)中,病原體核酸總檢出率為11.59%(16/138);其中肺炎克雷伯菌檢出率最高,為4.35%;肺炎鏈球菌和銅綠假單胞菌檢出率均為2.17%,流感嗜血桿菌和金黃色葡萄球菌檢出率均為1.45%。155份鼻咽拭子標(biāo)本中共檢出6份肺炎支原體,檢出率為3.87%。通過分析各類病原體的檢出結(jié)果可知FRS患者細(xì)菌性病原體的檢出以肺炎克雷伯菌(4.35%)、肺炎鏈球菌(2.17%)和銅綠假單胞菌(2.17%)為主。與之前2012-2013年貴陽市的調(diào)查報道[11]顯示的病原體檢出率不同,呼吸道細(xì)菌性病原體核酸檢出率前3位的結(jié)果也不太一致,提示該疾病的病原譜結(jié)構(gòu)可能發(fā)生了變化。

從性別分布來看,不同性別患者病原體核酸檢出率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.587,P>0.05),但男性患者較女性患者多。從年齡分布來看,不同年齡組患者病原體核酸檢出率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=3.182,P>0.05)。但各年齡組患者的構(gòu)成比不同,病原體檢出情況也不同;以0～6歲和>68歲的患者數(shù)最多;以0～6歲年齡病原體核酸檢出率最高,為21.15%,且該年齡段病原體感染種類較復(fù)雜,以肺炎支原體、肺炎克雷伯菌和肺炎鏈球菌為主;其次,>68歲年齡段病原體核酸檢出率較高,病原體檢出以肺炎支原體為主。社區(qū)獲得性肺炎可發(fā)生于任何年齡階段,其中以低年齡段兒童及老年群體多發(fā)[13]。本研究中,肺炎支原體主要在0～6歲和>68歲患者中被檢出,本研究也印證了以往研究結(jié)果[13]。肺炎支原體與肺炎衣原體是小兒肺炎的主要病原體,它們?nèi)糸L期在患兒體內(nèi)沒有得到及時清除,嚴(yán)重時可導(dǎo)致心肌炎、腦膜炎等嚴(yán)重疾病,提示該類病原體在免疫力低下群體中檢出率高,臨床治療中應(yīng)特別重視這類群體的病原體檢測[14-15]。

綜上所述,貴陽市2018年9月至2019年12月FRS患者常見細(xì)菌性病原體以肺炎克雷伯菌、肺炎鏈球菌和銅綠假單胞菌為主。該疾病的感染人群以0～6歲和>68歲人群多見,不同性別患者病原體檢出率未見差異。通過分析貴陽市4家哨點(diǎn)醫(yī)院監(jiān)測FRS患者細(xì)菌性病原體結(jié)果,可以在一定程度上反映全市FRS患者發(fā)病特征和規(guī)律,為FRS病例監(jiān)測和臨床救治提供科學(xué)依據(jù)。