不同促根劑對煙苗根系發(fā)育和氮代謝的影響

劉威 段史江 曾宇 韓助君 程小強 彭玉富 賈世偉 陳小龍

摘要：研究不同促根劑對移栽后煙苗生長、根系發(fā)育和根系氮代謝的影響，確定利于煙苗生長和根系發(fā)育的促根劑。以烤煙品種云煙87為試驗材料，采用盆栽試驗，設(shè)置對照、黃腐酸鉀、生物炭、高碳基肥4個處理，分析不同促根劑對移栽后煙苗和根系的生長發(fā)育、根系氮代謝相關(guān)酶的影響，通過實時定量PCR研究不同促根劑處理下烤煙根系氮代謝相關(guān)基因的表達模式。比較分析不同促根劑的煙苗長勢、根系參數(shù)和活力發(fā)現(xiàn)，生物炭的促苗生根效果最好，高碳基肥次之，黃腐酸鉀效果最差；測定根系中硝酸還原酶（NR）、谷氨酰胺合成酶（GS）、亞硝酸還原酶（NiR）和谷氨酸脫氫酶（GDH）的活性，4種酶活性排序為生物炭＞高碳基肥＞黃腐酸鉀＞對照。根系氮代謝相關(guān)基因表達模式的分析表明，NR、GS、NIR3這3個基因的表達模式與上述的表型和氮代謝酶活性變化趨勢相同；根系氮代謝關(guān)鍵酶活性與相應(yīng)基因表達量的相關(guān)性分析表明，NR、GS、NIR3這3個基因分別是調(diào)控NR活性、GS活性和NiR活性的關(guān)鍵基因，這些基因的表達水平與對應(yīng)酶活性存在正相關(guān)性。生物炭對促進移栽后煙苗的生長發(fā)育效果最好，高碳基肥效果次之，NR、GS、NIR3是調(diào)控根系氮代謝酶活性的關(guān)鍵基因。

關(guān)鍵詞：烤煙；促根劑；氮代謝；酶活性；基因表達

中圖分類號：S572.01 文獻標志碼：A

文章編號：1002-1302（2023）15-0093-07

基金項目：江西省煙草公司吉安市公司資助項目（編號：202136080027195）。

作者簡介：劉 威（1999—），男，河南許昌人，碩士研究生，研究方向為煙葉調(diào)制。E-mail：liuwei99111@163.com。

通信作者：陳小龍，博士，農(nóng)藝師，主要從事煙葉原料研究。E-mail：cxlong119@163.com。

移栽后煙苗的早生快發(fā)有利于提高煙苗的成活率，提早進入并相對延長旺長期，增加旺長期干物質(zhì)的積累，進而影響到煙葉產(chǎn)質(zhì)量的提升［1-3］。根系對于煙株水分和養(yǎng)分吸收起到重要的作用。煙株的正常生長、養(yǎng)分吸收、煙葉合成和積累有機物以及產(chǎn)質(zhì)量與煙株根系發(fā)育的情況有著很大的關(guān)系［4-5］。煙苗移栽后促進煙株根系的快速生長對于煙株早生快發(fā)具有十分重要的意義。

氮代謝作為烤煙植株基本的生理代謝過程，也是煙葉品質(zhì)形成的核心代謝途徑。煙草氮代謝包括有機含氮化合物的轉(zhuǎn)化、合成以及無機氮（硝態(tài)氮）的還原、同化等過程［6］。烤煙煙葉化學(xué)成分的含量及組成比例、產(chǎn)量和品質(zhì)的形成與氮代謝的強度以及動態(tài)變化有關(guān)［7-9］。氮代謝相關(guān)基因的表達直接受到土壤營養(yǎng)的調(diào)控，因此，根系氮代謝調(diào)控是移栽后煙苗早生快發(fā)的關(guān)鍵。

植物通過根系細胞膜上的氮轉(zhuǎn)運蛋白吸收土壤中的氮素并輸送到體內(nèi)［10］。硝酸還原酶（nitrate reductase，簡稱NR）、谷氨酰胺合成酶（glutamine synthase，簡稱GS）、亞硝酸還原酶（nitrite reductase，簡稱NiR）和谷氨酸脫氫酶（GDH）等酶類在高等植物的氮代謝中起著重要的作用，各種酶活性調(diào)控的相關(guān)基因已經(jīng)被陸續(xù)鑒定［11-14］。

目前在煙草的栽培中，施用肥料仍然是促進煙株根系生長和提升烤煙品質(zhì)的重要方式。煙草專用高碳基肥富含多種對煙草生長有利的營養(yǎng)元素，具有改善土壤微生態(tài)系統(tǒng)的作用以及無污染等優(yōu)點［15-17］。生物炭具有化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定、吸附性強、孔隙度和比表面積較高等特點［18-19］，可被用于改善土壤理化性狀，提高作物產(chǎn)質(zhì)量等，增施適量的生物炭對于提高煙株根系的生長和煙葉質(zhì)量具有較好的效果［20-23］。黃腐酸鉀中的有機成分可以有效地提高土壤的有效氮供應(yīng)量，根系對氮素、水分等的吸收利用得到提升，促進烤煙植株的根系生長，改善煙葉品質(zhì)，提高煙葉產(chǎn)量［24-26］。

本研究以云煙87為試驗材料，比較高碳基肥、生物炭、黃腐酸鉀3種促根劑對根系生長發(fā)育、根系氮代謝相關(guān)酶活性和氮代謝基因表達量的影響，以期能夠更好地促進煙株生長發(fā)育，為烤煙優(yōu)質(zhì)栽培提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

供試烤煙品種為云煙 87。盆栽試驗土壤來自江西吉安永豐縣，土壤類型為水稻土，挖取0～20 cm 的耕層土壤充分混合后進行盆栽試驗。土壤基本理化性質(zhì)：有機質(zhì)含量為33.68 g/kg，土壤水解性氮含量為134.59 mg/kg，有效磷含量為 26.37 mg/kg，速效鉀含量為115.8 mg/kg，pH值為5.87。試驗所用促根劑為高碳基肥、生物炭（煙草行業(yè)煙草栽培國家重點實驗室/河南省生物炭工程技術(shù)研究中心），黃腐酸鉀（鄭州銀之海化工產(chǎn)品有限公司）。盆缽規(guī)格：盆面直徑20.49 cm，盆底直徑11.00 cm，盆高11.20 cm，每盆裝入風(fēng)干土1.57 kg。

1.2 試驗設(shè)計

試驗于2021年9月在河南農(nóng)業(yè)大學(xué)進行。云煙87種子播種在育苗盤中進行漂浮育苗，3周后進行盆栽，試驗共設(shè)置4個處理（包括CK處理），每個處理3次重復(fù)。設(shè)置對照（CK），即不加促根劑處理；T1為黃腐酸鉀處理；T2為生物炭處理；T3為高碳基肥處理。

T1處理按照肥 ∶水=1 ∶1 000（質(zhì)量體積比）的比例于移栽當(dāng)天澆灌在煙苗根系周圍；T2和T3處理分別按照促根劑：土壤為2 ∶100和1 ∶100（質(zhì)量比）的比例混勻后進行移栽和封窖處理。同時CK及T2和T3處理澆灌 400 mL水/株，以保證試驗的一致性。盆栽置于光照度2 000 lx、16 h/8 h明/暗光周期、26 ℃條件的光照培養(yǎng)室培養(yǎng)。移栽后每隔10 d澆1次水，共3次，每盆澆水量為300 mL。

1.3 測定項目與方法

1.3.1 農(nóng)藝性狀測定 煙株的農(nóng)藝性狀測定采用煙草行業(yè)標準YC/T 142—2010《煙草農(nóng)藝性狀調(diào)查方法》方法進行［27］。移栽后30 d將對照及每個處理的根、葉分開，用水把根上的土沖洗干凈，在105 ℃的條件下殺青 30 min，用70 ℃烘至恒質(zhì)量，對根干質(zhì)量和葉干質(zhì)量分別進行稱量。煙葉SPAD值的測定利用日本柯尼卡美能達公司便攜式葉綠素儀（SPAD 502型）進行。利用WinRHIZO根系分析軟件統(tǒng)計總根長、根表面積、根體積和根平均直徑。采用氯化三苯基四氮唑（TTC）法測定根系活力［28］。

1.3.2 煙株根系氮代謝酶活性測定 采用試劑盒測定，各稱取0.1 g新鮮根系，洗凈并用濾紙吸干，放入含有提取液的研缽中，冰浴研磨，進行離心，取上清液置于冰上待測。將分光光度計預(yù)熱，調(diào)節(jié)測定各個酶符合的波長，蒸餾水調(diào)零。測定吸光度，分別計算硝酸還原酶（NR）、谷氨酰胺合成酶（GS，又稱為N素轉(zhuǎn)移酶）、亞硝酸還原酶（NiR）、谷氨酸脫氫酶（GDH）的活性。

1.3.3 q-PCR分析 煙草根部總RNA采用Trizol法進行提取，用M-MLV Reverse Transcriptase試劑盒進行cDNA合成。在GenBank（http：//www.ncbi.nlm.nih.gov）中搜索烤煙氮同化途徑（圖1）中的關(guān)鍵酶——硝酸還原酶（NR）、谷氨酰胺合成酶（GS）、亞硝酸還原酶（NIR）和谷氨酸脫氫酶（GDH）的基因編碼序列，利用Primer 5.0軟件在基因保守域設(shè)計q-PCR引物（表1）。按照SYBR Green Realtime PCR Master Mix說明書進行實驗操作，試驗結(jié)果采用 2-ΔΔCT公式計算每個基因的相對表達量［29］，以L25作為內(nèi)參基因。

1.4 數(shù)據(jù)處理

使用Excel 2010對數(shù)據(jù)進行整理，運用SPSS 17.0軟件對數(shù)據(jù)進行多重比較、方差分析和顯著性檢驗。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同促根劑對煙苗生長發(fā)育的影響

煙苗移栽后30 d，比較不同促根劑中煙苗長勢，結(jié)果顯示，不同土壤促根劑處理的煙株生長狀態(tài)不同，其中T2處理的煙苗長勢最好，T3次之，T1和CK長勢最差（圖2）。由表2可見，T2的最大葉長、最大葉寬和地上部干物質(zhì)含量均顯著高于CK、T1、T3，而CK、T1、T3這3個處理之間差異不大。在葉片SPAD值方面，各處理的差異不明顯。促根劑處理可在不同程度上增加煙株的根冠比，其中T2處理效果最為顯著。可見，生物炭（T2）處理對烤煙葉長、葉寬、SPAD值、地上部干物質(zhì)質(zhì)量和根冠比的綜合促進效果最好，高碳基肥效果次之，黃腐酸鉀對煙苗促生早發(fā)的效果不明顯。

2.2 不同促根劑對烤煙根系生長的影響

移栽后30 d，綜合分析煙苗的根部參數(shù)和根系活力 結(jié)果顯示 T2處理下煙苗根質(zhì)量、 總根長、根表面積、根體積、平均直徑和根系活力均顯著高于CK和T1，根質(zhì)量、 總根長、根表面積和根體積顯著高于T3，而根系平均直徑和根系活力和T3處理無明顯差異（表3）。比較根系參數(shù)和活力發(fā)現(xiàn)，在土壤中添加生物炭能顯著促進煙苗發(fā)育，高碳基肥次之，黃腐酸鉀對幼苗期長勢無明顯促進作用。

2.3 不同促根劑對煙株根系氮代謝相關(guān)酶活性的影響

不同促根劑處理的煙株根系氮代謝相關(guān)酶NR、GS、NiR和GDH活性測定結(jié)果（圖3）顯示，與CK相比，各處理的NR、GS、NiR和GDH的活性均顯著提高，其中酶活性最高的為T2處理，其次為T3處理，T1處理活性較低。綜合來看，T2處理對于NR、GS、NiR和GDH這4種氮代謝相關(guān)酶的活性提升效果最為顯著，說明生物炭可以促進煙草根系氮代謝相關(guān)酶活性，增強氮代謝效率。

2.4 生物炭對煙株根系氮代謝關(guān)鍵基因表達的影響

分析不同促根劑處理下煙株根系氮代謝相關(guān)基因的表達量差異，結(jié)果表明，4種處理下根系氮代謝相關(guān)基因的表達模式不同；NR、GS和NIR3的表達量在T1、T2和T3中均高于CK，基因表達量從高到底依次為T2＞T3＞T1＞CK；4個處理中NIR1和NIR2基因的表達水平?jīng)]有顯著差別；4個處理中GDH基因的表達量從高到底依次為T3＞T2＞CK＞T1（圖4）。總體來看，生物炭（T2）處理可以提高根系氮代謝關(guān)鍵基因的表達水平。

2.5 氮代謝相關(guān)酶活性與基因表達量的相關(guān)性分析

分析生物炭處理下根系氮代謝相關(guān)酶活性與根系氮代謝關(guān)鍵基因表達量的相關(guān)性發(fā)現(xiàn)，NR活性與NR基因表達量呈顯著正相關(guān)關(guān)系（r=0.899，P<0.05）；GS活性與GS基因表達量呈顯著正相關(guān)關(guān)系（r=0.944*，P<0.05）；NiR活性與NIR3基因表達量呈顯著正相關(guān)關(guān)系 （r=0.947*，P<0.05）（表3）。NR基因與NIR1基因表達量之間呈顯著正相關(guān)關(guān)系（r=0.933*，P<0.05），GDH基因與NIR3基因、GS基因表達量之間呈極顯著正相關(guān)關(guān)系（r=0.998**、r=0.983**，P<0.01），GS基因與NIR3基因表達量之間呈極顯著正相關(guān)關(guān)系（r=0.971**，P<0.01）。可見，移栽后煙苗根系中NR、GS、NiR活性可能受到NR基因、GS基因和NIR3基因的調(diào)控，與這些基因的表達水平存在相關(guān)性。

3 討論與結(jié)論

在提升煙葉產(chǎn)量和品質(zhì)當(dāng)中施肥是重要的管理措施，合理施肥有利于促進烤煙生長發(fā)育，提高煙葉的產(chǎn)量和品質(zhì)。煙草的葉長、葉寬和干物質(zhì)積累量會受環(huán)境、土壤等因素的影響，其中施肥影響很大［31-33］。作物根系干物質(zhì)的分配量可隨著水、肥等外界環(huán)境條件的改變而改變［34-35］。煙葉品質(zhì)的高低與葉綠素含量高低密切相關(guān)［36］，葉綠素含量可以用SPAD值來表示［37］，它們之間存在顯著線性關(guān)系［38-39］。本研究發(fā)現(xiàn)，生物炭處理對烤煙葉長、葉寬、SPAD值、地上部干物質(zhì)質(zhì)量和根冠比的綜合促進效果最好，高碳基肥效果次之，黃腐酸鉀促進煙苗生長發(fā)育的效果不明顯。可見，生物炭對烤煙根系對營養(yǎng)元素的吸收、利用和積累有促進作用。

根系對養(yǎng)分和水分的吸收受根系形態(tài)及其生理特性的影響，同時根系對于植物吸收養(yǎng)分和水分十分重要［40-41］。通過對根系參數(shù)和活力的比較分析發(fā)現(xiàn)，在土壤中添加生物炭能顯著促進煙苗發(fā)育，高碳基肥次之，黃腐酸鉀對幼苗期的長勢無明顯促進作用，與劉先良等的研究結(jié)果［42］相似。本研究結(jié)果顯示，施用生物炭促進煙苗發(fā)育，提升了根系吸收利用養(yǎng)分，可能與土壤的通透性和根際的營養(yǎng)狀況因施用了生物炭得到了改善有關(guān)。

氮代謝在煙草有機物的合成和轉(zhuǎn)化以及生長過程中起著重要的作用［43］。NR、GS、NiR和GDH是高等植物氮代謝中十分重要的酶。NR在氮代謝中的作用是將NO-3轉(zhuǎn)換成NO-2，有利于煙株的生長發(fā)育［44］；GS在谷氨酸合成循環(huán)中催化谷氨酸與NH3形成谷氨酰胺，GS與植物含氮化合物的新陳代謝也有一定的關(guān)系［45］；NiR在氮代謝中的作用主要是將NO-2轉(zhuǎn)換成為NH+4，從而進一步被植物使用［46］；GDH參與谷氨酸的分解代謝，在NH+4積累時同化NH+4，在碳氮代謝中有著重要的作用［47-48］。本研究結(jié)果顯示，生物炭處理的NR、GS和NIR3基因的相對表達水平均顯著高于對照、黃腐酸鉀和高碳基肥處理，與煙草根系氮代謝相關(guān)酶活性表現(xiàn)一致，推測移栽后煙苗根系中NR、GS、NiR活性可能受到NR基因、GS基因和NIR3基因的調(diào)控，與這些基因的表達水平存在相關(guān)性；4個處理的NIR1和NIR2這2個基因的相對表達量沒有顯著差別，推測這2個NIR家族中的基因可能表達不明顯；而4個處理中GDH基因的表達量從高到低依次為高碳基肥＞生物炭＞CK＞黃腐酸鉀，推測GDH基因的表達可能與生育時期、品種特性、器官和土壤養(yǎng)分的狀況等有關(guān)。總體來看，生物炭處理可以提高根系氮代謝關(guān)鍵基因的表達水平和根系氮代謝相關(guān)酶活性，促進煙株根系的氮代謝。

綜上所述，比較不同促根劑中移栽后煙苗和根系的生長發(fā)育發(fā)現(xiàn)，生物炭的效果最好，高碳基肥效果次之，黃腐酸鉀對于煙苗的促生效果不顯著。土壤中添加黃腐酸鉀、高碳基肥和生物炭均能顯著增加根系中氮代謝相關(guān)酶活，效果排序為生物炭＞高碳基肥＞黃腐酸鉀＞CK。3種促根劑處理后根系氮代謝相關(guān)基因的表達量普遍上調(diào)，其中NR、GS和NIR3基因表達量從高到底依次為生物炭＞高碳基肥＞黃腐酸鉀＞CK。NR、GS、NIR3這3個基因可能是調(diào)控NR酶活性、GS酶活性和NiR酶活性的關(guān)鍵基因，這些基因的表達水平與對應(yīng)酶活性存在正相關(guān)性。

參考文獻：

［1］趙 靜，徐照麗，段勝智，等. 水楊酸對移栽后煙株早生快發(fā)的影響［J］. 中國農(nóng)學(xué)通報，2013，29（22）：152-159.

［2］夏海乾，錢曉剛，杜德強，等. 不同莖長移栽及施肥方式對烤煙前期生長發(fā)育的影響［J］. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008，36（2）：581-582.

［3］劉貫山. 大田前期不同栽培措施對烤煙早發(fā)的影響［J］. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，1997（4）：36-37，55.

［4］楊占偉，何躍興，李名榮，等. 不同移栽方式對烤煙生長發(fā)育及煙葉產(chǎn)質(zhì)量的影響［J］. 江西農(nóng)業(yè)學(xué)報，2014，26（3）：50-53，57.

［5］籍 越，饒學(xué)明，劉衛(wèi)群，等. 芝麻餅肥與無機肥配比對煙草根系生長發(fā)育的影響［J］. 河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2003，37（3）：241-244，256.

［6］陳常瑜，竇玉青，沈 晗，等. 土壤pH對烤煙氮代謝酶活性及化學(xué)成分的影響［J］. 分子植物育種，2020，18（11）：3736-3742.

［7］馬興華，石 屹，張忠鋒，等. 施氮量與基追比例對煙葉品質(zhì)及氮肥利用率的影響［J］. 中國煙草科學(xué)，2015，36（4）：34-39.

［8］尚志強. 施氮量對白肋煙生長發(fā)育及產(chǎn)量質(zhì)量的影響［J］. 中國農(nóng)學(xué)通報，2007，23（1）：299-301.

［9］黃國文，陳良碧. 干旱對上部煙葉細胞結(jié)構(gòu)和化學(xué)成分的影響［J］. 生命科學(xué)研究，2004，4（2）：183-187.

［10］劉維智，賈宏昉，尹貴寧，等. 缺氮及氮素形態(tài)對煙草幼苗糖代謝的影響機理初探［J］. 西北植物學(xué)報，2014，34（3）：530-535.

［11］張明方，李志凌. 高等植物中與蔗糖代謝相關(guān)的酶［J］. 植物生理學(xué)通訊，2002，38（3）：289-295.

［12］Kyaing M S，顧立江，程紅梅. 植物中硝酸還原酶和亞硝酸還原酶的作用［J］. 生物技術(shù)進展，2011，1（3）：159-164.

［13］譚彩霞，封超年，陳 靜，等. 作物淀粉合成關(guān)鍵酶及其基因表達的研究進展［J］. 麥類作物學(xué)報，2008，28（5）：912-919.

［14］劉炳清，許嘉陽，黃化剛，等. 不同海拔下烤煙碳氮代謝相關(guān)酶基因的表達差異分析［J］. 植物生理學(xué)報，2015，51（2）：183-188.

［15］張紀利，趙文龍，韋建玉，等. 不同用量高碳基肥對富川烤煙生長發(fā)育和產(chǎn)值的影響［J］. 中國農(nóng)學(xué)通報，2021，37（34）：21-28.

［16］張 珂，劉國順，王國峰，等. 高碳基肥對舞陽煙區(qū)土壤特性和煙葉品質(zhì)形成的影響［J］. 江西農(nóng)業(yè)學(xué)報，2016，28（12）：52-56.

［17］尚 峰. 高碳基肥料對許昌煙區(qū)烤煙品質(zhì)的影響［J］. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015，43（8）：60-61.

［18］Atkinson C J，F(xiàn)itzgerald J D，Hipps N A. Potential mechanisms for achieving agricultural benefits from biochar application to temperate soils：a review［J］. Plant and Soil，2010，337（1/2）：1-18.

［19］Renner R. Rethinking biochar［J］. Environmental Science and Technology，2007，41（17）：5932-5933.

［20］吉貴鋒，王鵬澤，張書偉，等. 生物炭對植煙褐土C/N值及烤煙根系發(fā)育的影響［J］. 河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2018，52（6）：863-867，902.

［21］陳溫福，張偉明，孟 軍. 農(nóng)用生物炭研究進展與前景［J］. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，46（16）：3324-3333.

［22］Ahmed A，Kurian J，Raghavan V. Biochar influences on agricultural soils，crop production and the environment：a review［J］. Environmental Reviews，2016，24（4）：495-502.

［23］雷海迪，尹云鋒，劉 巖，等. 杉木凋落物及其生物炭對土壤微生物群落結(jié)構(gòu)的影響［J］. 土壤學(xué)報，2016，53（3）：790-799.

［24］霍昭光，邢雪霞，孫志浩，等. 黃腐酸鉀對烤煙生長發(fā)育及其葉片礦質(zhì)元素積累的影響［J］. 貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2018，46（2）：70-73.

［25］朱京濤，曹 霞，王學(xué)東. 生物黃腐酸對番茄幼苗發(fā)育及產(chǎn)量品質(zhì)的影響［J］. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，37（3）：964-965，968.

［26］趙永長，宋文靜，邱春麗，等. 黃腐酸鉀對滲透脅迫下烤煙幼苗生長和光合熒光特性的影響［J］. 中國煙草學(xué)報，2016，22（4）：98-106.

［27］國家煙草專賣局. 煙草農(nóng)藝性狀調(diào)查測量方法：YC/T 142—2010［S］. 北京：中國標準出版社，2010.

［28］鄒 琦. 植物生理學(xué)實驗指導(dǎo)［M］. 北京：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)出版社，2000.

［29］Schmidt G W，Delaney S K. Stable internal reference genes for normalization of real-time RT-PCR in tobacco （Nicotiana tabacum） during development and abiotic stress［J］. Molecular Genetics and Genomics，2010，283（3）：233-241.

［30］Glass A D M，Britto D T，Kaiser B N，et al. The regulation of nitrate and ammonium transport systems in plants［J］. Journal of Experimental Botany，2002，53（370）：855-864.

［31］張廣雨，褚德朋，劉元德，等. 生物炭及海藻肥對煙草生長、土壤性狀及青枯病發(fā)生的影響［J］. 中國煙草科學(xué)，2019，40（5）：15-22.

［32］楊俐蘋，白由路. 改變傳統(tǒng)化驗操作模式，提高測土配方施肥效率［J］. 土壤通報，2009，40（5）：1151-1155.

［33］李健銘，劉青麗，李志宏，等. 不同有機肥料對烤煙氮素吸收和產(chǎn)值的影響［J］. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2022，50（9）：83-88.

［34］Jiang D，Dai T，Jing Q，et al. Effects of long-term fertilization on leaf photosynthetic characteristics and grain yield in winter wheat［J］. Photosynthetica，2004，42（3）：439-446.

［35］韓 毅，陳發(fā)元，趙銘欽，等. 生物炭與有機無機肥配施對煙草和土壤汞含量及保護酶活性的影響［J］. 山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2016，48（8）：74-79.

［36］馮曉英，陳啟迪. 烤煙葉綠體色素含量的動態(tài)變化及其與產(chǎn)質(zhì)量的關(guān)系［J］. 貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（4）：38-40.

［37］徐照麗，楊彥明，盧秀萍，等. 不同烤煙品種葉綠素SPAD值的變化特征［J］. 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2010，36（5）：499-501.

［38］李佛琳，趙春江，劉良云，等. 烤煙鮮煙葉成熟度的量化［J］. 煙草科技，2007（1）：54-58.

［39］潘義宏，顧毓敏，楊 森，等. 不同品種中部煙葉SPAD值及其與葉綠素含量的相關(guān)性分析［J］. 河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2017，51（2）：156-162，211.

［40］褚 光，周 群，薛亞光，等. 栽培模式對雜交粳稻常優(yōu)5號根系形態(tài)生理性狀和地上部生長的影響［J］. 作物學(xué)報，2014，40（7）：1245-1258.

［41］宋海星，李生秀. 水、氮供應(yīng)和土壤空間所引起的根系生理特性變化［J］. 植物營養(yǎng)與肥料學(xué)報，2004，10（1）：6-11.

［42］劉先良，張 春，鄧 茂，等. 施用生物炭和AM真菌對烤煙根系形態(tài)、生理特性及化學(xué)成分的影響［J］. 煙草科技，2017，50（8）：30-36.

［43］Davis D L，Nielsen M T. Tobacco：production，chemistry and technology［M］. Oxford：Blackwell Science，1999：265-284.

［44］Ratnavathi C V，Nageswara Rao K. Nitrate reductase of tobacco in relation to age and nitrogen fertilization［J］. Tobacco Research，1992，18（12）：121-124.

［45］周齊志. 煙草煙堿含量研究進展［J］. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008，36（6）：2359-2361.

［46］黃偉超，范宇博，顧萬榮，等. 不同氮效率基因型玉米物質(zhì)積累及氮代謝相關(guān)酶活性的差異［J］. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2017，45（34）：22-26.

［47］Melo-Oliveira R，Oliveira I C，Coruzzi G M. Arabidopsis mutant analysis and gene regulation define a nonredundant role for glutamate dehydrogenase in nitrogen assimilation［J］. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，1996，93（10）：4718-4723.

［48］Gálvez S，Lancien M，Hodges M. Are isocitrate dehydrogenases and 2-oxoglutarate involved in the regulation of glutamate synthesis？［J］. Trends in Plant Science，1999，4（12）：484-490.