微柱凝膠技術與凝聚胺技術對ABO 新生兒溶血病輸血前檢驗的價值分析

王新利

（輝縣市人民醫院輸血科，河南 新鄉 453600）

新生兒溶血病（HDN）主要是因母嬰血型不合，母體的ⅠgG 抗體可經胎盤進入到胎兒體內，破壞胎兒紅細胞，誘發免疫性反應而發生溶血，可致患兒出現多種異常情況，如貧血、高膽紅素血癥、溶血、黃疸等，嚴重時可引起流產、死胎、死產等[1]。ABO-HDN 是HDN 常見類型之一，其患兒血型多為B 型或A 型，母親血型為O 型，且患兒體內存在母親抗體，無法根據常規方式實施同型輸血，防止溶血反應加重[2]。故，輸血前新生兒血型進行準確檢驗對保障輸血安全具有積極意義。臨床常用血清游離抗體試驗、紅細胞抗體釋放試驗、抗人球蛋白試驗鑒別HDN，其中血清游離抗體試驗檢測新生兒血清內有無過度抗體未結合到紅細胞；抗人球蛋白試驗可檢測新生兒紅細胞有無受外在抗體致敏的影響，兩者均是輔助診斷方式[3]。紅細胞抗體釋放試驗是對HDN 最有價值的診斷方式，可檢測釋放液與酶處理后新生兒紅細胞上ABO 血型ⅠgG 抗體。但傳統方式是利用試管法實施檢測，需對患兒血液樣本中紅細胞反復清洗，操作步驟相對繁瑣，且檢查結果易受人為因素影響，降低診斷準確性，且具有用時長、重復性不好等缺陷，臨床應用受到一定局限性[4]。

因此，本研究分析微柱凝膠技術MGT 與凝聚胺技術在ABO-HDN 輸血前檢驗中應用效果，為臨床診治提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇48 例疑似ABO-HDN 患兒為研究對象，于2021 年3 月至2023 年2 月就診于本院。本研究經醫學倫理委員會審核通過。45 例患兒日齡1～5d，平均（2.35±0.44）d；男25 例，女20 例；出生體質量2.41～3.62kg，平均（3.10±0.21）kg。納入標準：主要癥狀為黃疸或黃疸進行性加重；母體血型為O 型；間接膽紅素水平增高；血常規檢查顯示網織紅細胞增高、有核紅細胞增多、血紅蛋白降低；患兒家長簽署知情同意書。排除標準：家族心臟病史；先天性心臟??；畸形兒；臨床資料不完整者。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑與儀器

北京榮興光恒科技有限公司生產的奧林巴斯顯微鏡；長春博研科學儀器有限責任公司生產的血型血清學用離心機，金壇區西城新瑞儀器廠生產的金壇電子恒溫水浴箱；長春博研科學儀器有限責任公司生產的免疫微柱孵育器（FYQ 型）。Diagnostic Grifols S.A.提供的抗人球蛋白卡；上海血液生物醫藥有限責任公司生產的ABO 血型反定型試劑盒；上海潤普生物技術有限公司生產的凝聚胺檢測試劑盒。

1.2.2 實驗方法

采集入組患兒血樣，離心10 min，離心半徑為13.5 cm，轉速2000 rpm。分離血清與紅細胞，紅細胞用0.9%氯化鈉注射液洗滌，配置紅細胞懸液，濃度為3%，將0.9%氯化鈉注射液1 mL 加入1 mL 的紅細胞懸液內，水浴7 min（56℃），離心取上清液，作為放散液備用。

（1）MGT

用微柱凝膠試劑卡標記患兒血液標本，將血液標本置于凝膠試管內，離心，對其有無凝聚反應進行觀察。若在凝膠底部則評定為陰性，若凝膠上層或中間分散則評定為陽性。

（2）凝聚胺技術

取1 支試管，將紅細胞放散液或1 滴配型紅細胞懸液、0.7mL 低離子介質、2 滴血清置入，混合均勻，加入2 滴凝聚胺溶液，離心棄上清液，搖勻試管，查看是否有凝集現象。若無凝集發生則重復上述操作，有凝集發生后，將2 滴混合重懸液加入，，若有凝集反應則評定為配血不合，反之則評定為配血合。每例患兒實施交叉配血試驗3～6 次，以確保研究的準確性，共實施了258 次。

1.3 觀察指標

（1）對比放散液MGT 與凝聚胺技術交叉配血結果；（2）比較血清MGT 與凝聚胺技術交叉配血結果；（3）分析放散液、血清MGT 與凝聚胺技術交叉配血結果的一致性。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 診斷結果

48 例患兒均確證為ABO-HDN，其中血清游離抗體試驗檢測陽性率為81.25%（39/48）、紅細胞抗體釋放試驗檢測陽性率為100.00%（48/48）、改良抗人球蛋白試驗檢測陽性率為 50.00%（24/48）。見表1。

表1 三項血清試驗診斷結果（n）

2.2 放散液MGT 與凝聚胺技術交叉配血結果對比

放散液MGT 共檢出陽性108 次（41.86%），放散液凝聚胺技術共檢出陽性24 例（9.30%）。見表2。放散液MGT 陽性檢出率較放散液凝聚胺技術高，差異有統計學意義（χ2=71.830，P=0.000）。經kappa檢驗顯示，放散液MGT 與凝聚胺技術交叉配血結果一致性較差（kappa=0.249，P=0.000）。

表2 放散液MGT 與凝聚胺技術交叉配血結果（n）

2.3 血清MGT 與凝聚胺技術交叉配血結果對比

血清MGT 共檢出陽性118 次（45.74%），血清凝聚胺技術共檢出陽性21 例（8.14%）。見表3。血清MGT 陽性檢出率較血清凝聚胺技術高，差異有統計學意義（χ2=92.648，P=0.000）。經kappa檢驗顯示，血清MGT 與凝聚胺技術交叉配血結果一致性較差（kappa值=190，P=0.000）。

表3 血清MGT 與凝聚胺技術交叉配血結果（n）

3 討論

HDN 發病機制是胎兒階段從父親基因方面遺傳了母體不存在的抗原，當母體抗體經胎盤進入胎兒體內后，抗原與抗體難以相互容納，進而發生免疫作用，損傷紅細胞，可致患兒出現貧血、水腫、黃疸等，嚴重時可致患兒死亡[5]。HDN 患兒體內含有母源溶血性ⅠgG 抗體，部分抗體可經分解進入血液，其余部分會在紅細胞表面附著，尋找時機與紅細胞相結合[6]。

臨床常用血清游離抗體試驗、紅細胞抗體釋放試驗、抗人球蛋白試驗鑒別HDN。但傳統方式是利用試管法實施檢測，需對患兒血液樣本中紅細胞反復清洗，操作步驟相對繁瑣，且檢查結果易受人為因素影響，降低診斷準確性，且具有用時長、重復性不好等缺陷，臨床應用受到一定局限性[6,7]。

輸血前須對患兒行交叉配血試驗，其包含游離血清、紅細胞放散液，放散液檢測能夠反映結合在細胞上的溶血性抗體與輸注紅細胞間的不相容性，血清檢測可反映輸注紅細胞與患兒血液內溶血性抗體的不相容性[6,7]。本研究中，放散液、血清MGT 陽性檢出率較凝聚胺技術高，放散液、血清MGT 與凝聚胺技術交叉配血結果一致性較差，提示ABO-HDN 輸血前采用MGT 檢測準確性高于凝聚胺技術。凝聚胺技術檢驗的主要原理是凝聚胺自身帶正電荷，能夠經結合紅細胞，減少紅細胞表面電荷數，導致紅細胞發生非特異性凝聚，加入枸櫞酸鈉葡糖糖溶液再懸時，可有效中和凝聚胺的正電荷，促使非特性凝集紅細胞重新散開，但特異性的抗原抗體凝集散開難度較大，進而判斷有無抗原存在[7]。凝聚胺技術檢驗具有用時短、操作簡單等優點，但對結果評定相對嚴格，抗體濃度較低時易有假陰性出現，易發生漏檢，診斷敏感度較低。MGT 檢驗原理是將符合血清學標準的稀釋液制作呈凝膠，用微管柱灌注對紅細胞凝膠顆粒分子進行過濾，保留聚集的紅細胞，明確凝聚反應結果[8]。MGT 檢驗具有標本少、特異性強、敏感度高、結果可直觀觀察、重復性好、結果穩定等優點，同時其無需使用顯微鏡，離心后沉于凝膠底部為陽性，在凝膠上層或中間分散即為陽性。但MGT 難以識別紅細胞上的不完全抗體，且檢驗操作時間相對較長，不適用于急性患兒群體。

綜上所述，ABO-HDN 輸血前采用MGT 檢測準確性高于凝聚胺技術，但MGT 檢測存在不足，無法完全替代凝聚胺技術，臨床可結合患兒生理特征與血清免疫學特點，靈活選擇多種方式聯合診斷篩查抗原抗體，提高輸血安全性。