月季分生組織培養技術要點

任武婷

摘? ?要? ?以月季未萌發的腋芽為外植體，利用組織培養技術誘導出無菌芽，然后進行增殖，復壯，生根，煉苗，移栽，能夠在短時間內生產出大量品質穩定、無感染且保持母株優良特性的月季種苗，滿足市場需求，優化了月季組織培養快繁技術。

關鍵詞? ?月季；腋芽；組織培養

月季是薔薇科薔薇屬多年生木本植物，觀賞期長，花色豐富，花朵碩大，帶有濃郁的香味。月季適應性強，對土壤條件要求不嚴格，用途廣泛，在園林綠化、節日用花、城鄉道路旁、家庭小院等都有種植。月季常用的繁殖方法主要有扦插繁殖和壓條繁殖，月季枝條數量少，而且受季節影響，冬季修剪下來的枝條不能及時使用，要先沙藏保存，等到春季才可扦插，繁育周期長，生產成本增高。

利用組織培養方法繁育月季，全年都能生產，不受季節影響，能保持母株的優良性狀，又能在短期內生產出大批量無毒苗。月季的組織培養外植體主要有莖尖、芽尖、莖節、普通腋芽、腋芽分生組織等。現將腋芽分生組織快繁技術總結如下。

1? ?準備階段

準備實驗所用的工具、器具，制備出適宜的培養基并經高壓滅菌備用，配置出實驗用的化學消毒劑（當天配制，當天用完），準備一臺體視顯微鏡。

2? ?外植體的選擇及清洗

1）選擇。一般在晴天中午11：00或下午? 3：00前采取（忌陰雨天采取）。選取生長旺盛、沒有病蟲害、品質優良、變異小的豐花月季，當年新抽嫩枝頂尖部位（長約4 cm）。剪取外植體時工具和手必須消毒，以防感染。最好在沒有開花的月季植株上選取。

2）清洗。采回的外植體進行修整，剪掉葉片、葉柄、莖刺等不需要的部分，在自來水下沖洗10～15分鐘，再用洗衣粉或洗潔精仔細刷洗，用流水沖洗干凈。

3? ?消毒

外植體清洗干凈后，放在消毒過的超凈工作臺上，用無菌的脫脂棉擦拭1遍外植體表面。

75％酒精消毒1分鐘，用無菌水沖洗1次；有效氯2%的NaClO溶液消毒20分鐘，用無菌水沖洗3次。最后加入0.1 mg/L Vc浸泡20分鐘。

4? ?接種及培養條件

刀用酒精燈灼燒滅菌，解剖刀、鑷子的先端在95%的酒精中蘸一下，再用酒精燈灼燒滅菌，置于刀架上冷卻，待用。用鑷子夾住蘸有酒精的脫脂棉點著，對接種盤里外進行灼燒滅菌，滅菌好的接種盤放上濾紙。

把消毒好的外植體放在濾紙上，吸干表面水分，然后放在體視顯微鏡下，在葉腋處拔出分生組織（未萌發的腋芽）。接種到芽誘導培養基MS+2 mg/L 6-BA+0.5 mg/L GA3+30 g/L糖，瓊脂6.5 g/L，pH值5.7。每個試管接種1個分生組織，蓋上試管，試管上標明編號、日期、品種，培養基名稱，接種人員等，放入培養室進行培養。

培養室溫度25 ℃，光照時間16小時/天，光照強度800～1 000 lx，濕度50%。

接種1周后，在體視顯微鏡下觀察，有無污染（真菌、細菌）、死亡或干枯的分生組織，有則移出。每周在體視顯微鏡下觀察1次，4～6周后，只保留生長旺盛且健康的、仍保持綠色的分生組織。大約兩個月后，芽陸續長出，觀察芽的生長情況，是否有異常癥狀出現。

5? ?增殖培養

將健康的芽切割下來，轉接到增殖培養基MS+0.3 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IAA+30 g/L糖，瓊脂4.7 g/L，pH值5.8。

增殖階段改為玻璃瓶，每瓶放3個芽，放置培養室培養，溫度25 ℃，光照時間12小時/天，光照強度1 500 lx。

接種3天后檢查芽感染情況，并及時清理。大約培養20天左右，萌發出2～3片葉子。兩個月后，月季芽長到一定高度，形成單個芽或多個芽簇狀。剪掉葉片，剪成 1.5 cm長帶有芽（1～2個）的莖段，進行繼代培養。每個月繼代1次，以后每月大約可以5倍的速度繁育，1年內就可以形成大量的植株。

檢查增殖過程中穩定性，對增殖進行評估， 4～6周進行1次為準。檢查是否芽過度分化、玻璃化、植株矮化、老齡化、植株發黃、褐化、壞死、喪失芽分化能力等問題。如果出現上述問題，則要進行培養基調整。

如果芽過度分化，應降低6-BA濃度，如減半添加；減少硝酸銨的添加量，可按1/4 的量使用；減少蔗糖添加量，可由30 g降到20 g；減少每個植株帶芽數量，從帶2～3個芽減少為只帶1個芽；增加瓊脂添加量。

如果老化，喪失芽分化能力，可增加6-BA濃度，增加蔗糖添加量，減少瓊脂用量，轉接時不要分株，整個植株一塊轉。

出現以上情況，嘗試重建一個穩定的增殖體系。

6? ?復壯培養

只有當增殖體系穩定，達到一定的數量時，才可進行壯苗培養。選取無病菌、 帶3～4片葉、長度約2 cm的芽，轉接到壯苗培養基MS+30 g/L糖， 瓊脂4.7 g/L，pH值5.8。壯苗和生根階段每瓶接種16個芽苗，剩余莖段，繼續接到繼代培養基中增殖培養。

轉接后放在光照12小時/天、光照強度? ? ?2 000 lx、溫度26 ℃、濕度50%的培養室進行培養。

7? ?生根培養

月季芽苗生長到一定高度時，選擇健壯無傷口、帶3～4片葉、長度約2 cm的芽（轉接時不要傷葉片或莖部）。用消毒過的剪刀剪下來，轉入生根培養基1/4MS+0.1 mg/L NAA+30 g/L糖，瓊脂4.7 g/L，pH值5.8。大約20天左右長出根來，根長約0.5 cm，3～4條，這時把瓶苗移到溫室進行馴化煉苗。

8? ?馴化及移栽

從培養室移到溫室的瓶苗，在移栽前必須進行馴化，需15～20天。先用遮陰網把瓶苗全部蓋住，白天溫度23～27 ℃，晚上20～23 ℃，濕度70%左右，使瓶苗逐漸適應溫室環境。經過一段時間的鍛煉，幼苗葉片由嫩綠色變深綠色，萌發新葉，莖變粗壯，幼苗整體長高，并生出新根，表明幼苗已經適應外界環境。選擇陰天或晴天早上移栽。

出瓶前1天，打開瓶塞，蓋上報紙，使瓶內濕度與溫室濕度接近，用高錳酸鉀對花盆、苗盤滅菌。準備好所需的基質，堆肥與珍珠巖按比例混合（60 ∶ 40），并用多菌靈消毒備用。

用鑷子從瓶里將幼苗取出，注意不要弄傷葉片和根部。剪掉黃葉，扔掉爛根的、死亡的、一條根的苗，選擇生長健壯，根系發達、條數多的幼苗，用純凈水洗掉雜質和培養基，放入10%多菌靈溶液中消毒60秒。移栽至120 mm花盆中，基質要壓實一些，根系要充分展開，避免根部損傷，深度適中，以免造成幼苗爛根。

栽好后，按品種擺放在苗床上，標注品種、日期。幼苗移栽后不能直接澆水，先用噴霧器噴霧，打濕基質表面，注意噴霧太多容易造成幼苗腐爛，噴霧不及時，幼苗葉片發黃、萎蔫、干枯，甚至死亡。天晴溫度高時，要不定時查看幼苗生長情況，根據實際情況調整噴霧次數，光照強要適當遮陰。定期噴施殺菌劑，防止病害發生。