基于TGF-β1/Smad信號通路探討健脾化瘀湯抗肝硬化的療效和作用機制

張杭洲,朱巖潔,王菲,婁靜,徐嬌嬌,侯留法,趙雷

[河南省中西醫結合醫院(河南省中醫藥研究院附屬醫院) 肝膽脾胃科,河南 鄭州 450004]

乙肝肝硬化主要是由乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染所致,大部分進展為肝硬化或終末期肝病[1]。乙肝肝硬化形成與肝細胞損傷有關,纖維瘢痕組織增多,進而造成肝臟彌漫性纖維化、再生結節形成[2]。臨床治療乙肝肝硬化主要以抗病毒、保肝及肝移植等為主,福富馬酸替諾福韋二吡呋酯是抗病毒藥物,可用于治療慢性乙肝,有效阻礙HBV逆轉錄過程,從而發揮抗病毒作用[3]。中醫認為乙肝肝硬化與肝失疏泄、肝氣凝結、肝腎虧虛等有關,治療當以活血祛瘀、疏肝健脾為準則,而健脾化瘀湯藥是經典名方,治療該病效果確切。轉化生長因子-β1(transforming growth factor- β1,TGF-β1)/Smad信號通路與抗纖維化密切相關,且中藥干預TGF-β1/Smad信號通路治療肝纖維化效果明確[4]。本研究基于TGF-β1/Smad信號通路探討健脾化瘀湯抗肝硬化的臨床療效。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2021年12月至2022年10月在河南省中西醫結合醫院診治80例的乙肝肝硬化患者作為研究對象,按照隨機數字表法分為對照組和治療組,各40例。對照組:男25例,女15例;年齡25～68(49.44±7.84)歲;病程1～7(4.11±1.12)a。治療組:男29例,女11例;年齡 25～39(47.57±7.38)歲;病程1～7(4.34±1.01)a。兩組一般資料均衡可比(P>0.05)。本研究經醫院醫學倫理委員會審批。

1.2 納入與排除標準

(1)納入標準:西醫符合《慢性乙型肝炎防治指南(2019年版)》[5]診斷標準;中醫符合《病毒性肝炎中醫辨證標準》[6]診斷標準;血清乙型肝炎表面抗原陽性或既往乙型肝炎表面抗原陽性>6個月;經肝活檢病理確診存在肝硬化;處于代償期;無嚴重并發癥;患者及家屬對研究內容知情,簽署知情同意書。(2)排除標準:合并惡性腫瘤;酒精性或非酒精性肝炎、丙型肝炎、自身免疫性肝病、藥源性肝病等其他原因所致的肝硬化;有精神疾病;造血系統疾病;心、肝、腎功能障礙;近6個月內接受免疫調節劑。

1.3 治療方法

(1)對照組接受常規保肝、降酶、退黃等基礎治療。口服富馬酸替諾福韋二吡呋酯膠囊(福建廣生堂藥業,國藥準字H20170005),每次0.3 g,每日1次,晚餐后服用。(2)治療組在對照組的基礎上接受健脾化瘀湯治療。湯藥組成:生白芍、生牡蠣各30 g,生麥芽、丹參、黨參、鱉甲各15 g,柴胡、雞內金、枳殼、生白術、莪術、桃仁、土元各10 g,炙甘草6 g,水(1劑)煎煮為200 mL,分2次服用,每日1劑。治療6個月。

1.4 觀察指標

(1)臨床療效[7]。顯效為臨床體征和癥狀消失,肝功能基本恢復正常,肝纖維化改善>50%;有效為體征與癥狀改善明顯,肝功能、肝纖維化有改善;無效為未達到以上標準。(2)中醫證候積分。食欲不振、倦怠乏力、胃脘脹滿、脅肋疼痛,分別計3分(重)、2分(中)、1分(輕)、0分(無)。(3)肝功能指標。收集患者空腹靜脈血5 mL,使用全自動生化分析儀檢測白蛋白(albumin,ALB)、總膽紅素(total bilirubin,TBIL)、γ-谷氨酰基轉移酶(γ-glutamyltranspeptidase,GGT)、谷丙轉氨酶(glutamic-pyruvic transaminase,GPT)。(4)肝纖維化指標。兩組空腹靜脈血經離心后,采用放射免疫法檢測Ⅲ型前膠原(procollagen type Ⅲ,PCⅢ)、Ⅳ膠原蛋白(Ⅳ type collagen,Ⅳ-C)、透明質酸(hyaluronic acid,HA)。(5)肝硬度。采用肝臟瞬時彈性檢測儀檢測。(6)TGF-β1/Smad信號通路相關mRNA。采用實時熒光定量PCR檢測,使用TRIzo試劑盒提取各組血清總RNA,逆轉錄合成cDNA,使用SYBR Green PCR Master Mix試劑盒進行擴增反應,以2-△△Ct法計算TGF-β1、Smad3、Smad5 mRNA水平。

1.5 統計學方法

2 結果

2.1 臨床療效

治療組臨床總有效率高于對照組(P<0.05)。見表1。

表1 兩組臨床療效比較(n,%)

2.2 中醫證候積分

兩組治療前中醫證候積分差異無統計學意義(P>0.05);治療后,兩組治療食欲不振、胃脘脹滿、倦怠乏力、脅肋疼痛評分降低,治療組低于對照組(P<0.05)。見表2。

表2 兩組中醫證候積分比較分)

2.3 肝功能指標

兩組治療前ALB、TBIL、GGT、GPT差異無統計學意義(P>0.05);兩組治療3、6個月TBIL、GGT、GPT降低,治療組低于對照組(P<0.05);兩組治療3、6個月ALB升高,治療組高于對照組(P<0.05)。見表3。

表3 兩組肝功能ALB、TBIL、GGT、GPT比較

2.4 肝纖維化指標

兩組治療前PCⅢ、Ⅳ-C、HA差異無統計學意義(P>0.05);兩組治療3、6個月Ⅳ-C、PCⅢ、HA降低,治療組低于對照組(P<0.05)。見表4。

表4 兩組肝纖維化指標PCⅢ、Ⅳ-C、HA比較

2.5 肝硬度

兩組治療前肝硬度值差異無統計學意義(P>0.05);兩組治療3、6個月肝硬降低,治療組低于對照組(P<0.05)。見表5。

表5 兩組肝硬度值比較

2.6 TGF-β1/Smad信號通路相關mRNA水平

兩組治療前TGF-β1、Smad3、Smad5 mRNA差異無統計學意義(P>0.05);與治療前比較,兩組治療3、6個月TGF-β1、Smad3、Smad5 mRNA降低,治療組低于對照組(P<0.05)。見表6。

表6 兩組TGF-β1/Smad信號通路相關mRNA水平比較

3 討論

HBV持續侵襲肝細胞造成組織變性壞死或微循環障礙,誘導炎癥反應,最終刺激肝纖維化進展加劇[8-9]。富馬酸替諾福韋二吡呋酯膠囊可抑制HBV逆轉錄合成cDNA,達到治療目的[10],但單獨用藥療效有限,長期用藥也可能出現副作用[11]。

中醫將肝硬化歸為“積聚”“脅痛”“癥瘕”范疇[12]。臨床上研究證實,健脾化瘀湯可有效改善患者肝功能[13]。本研究結果顯示,治療組臨床總有效率高于對照組,中醫證候積分改善優于對照組。分析原因:健脾化瘀湯方中柴胡可疏肝解郁、肝氣調達,為君藥;白芍酸苦微寒,可養血調經、平肝止痛,為臣藥;生白術、黨參健脾,可氣血有源、運化有權;枳殼健脾理氣、行滯消脹;莪術、鱉甲、桃仁、丹參、生牡蠣可活血化瘀、軟堅散結、消積止痛,為佐藥;配合健胃消食雞內金、生麥芽,可保肝益氣、健脾和胃,炙甘草可益氣補中、緩急止痛,全方共奏具有疏肝健脾、化瘀散結之效。

本研究結果顯示,治療組TBIL、GGT、GPT、PCⅢ、Ⅳ-C、HA低于對照組,ALB高于對照組,這與李紅閣等[14]研究結果一致。柴胡、黨參、丹參、莪術等具有抗病毒、抗炎、保肝、減輕肝損傷和肝纖維化等藥理活性[15]。動物實驗研究顯示,健脾化瘀湯可有效減少肝硬化大鼠肝纖維化組織形成,減輕肝組織氧化損傷[13]。此外,治療后兩組肝硬度降低,且治療組低于對照組,可能是因為健脾化瘀湯方中鱉甲可有效抑制結締組織異常增生,降低肝硬度,聯合富馬酸替諾福韋二吡呋酯膠囊治療可協同改善患者肝功能。

本研究結果顯示,治療組TGF-β1、Smad3、Smad5 mRNA低于對照組。TGF-β1通過調控相關受體激活下游Smad蛋白因子,介導參與多種生物學效應[16],抑制TGF-β1/Smad信號通路激活可有效減輕肝組織纖維化。

4 結論

健脾化瘀湯可改善乙肝肝硬化患者肝功能及肝硬度,作用機制可能與抑制TGF-β1/Smad信號通路激活有關。但具體作用機制尚不清楚,下一步本研究通過建立肝硬化大鼠模型,以探究健脾化瘀湯可能通過調控TGF-β1/Smad信號通路對大鼠模型肝纖維化、肝功能的機制研究。