柴芍乳增膠囊抗炎鎮(zhèn)痛作用研究

楊銘 肖丹丹 于德偉 赫慧 楊明

【摘 要】目的：觀察柴芍乳增膠囊抗炎、鎮(zhèn)痛作用。方法：灌胃給予大鼠或小鼠柴芍乳增膠囊高、中、低劑量（1.2 g/kg、0.6 g/kg、0.3 g/kg），采用大鼠肉芽腫實驗、小鼠熱板實驗和醋酸扭體實驗，觀察其抗炎、鎮(zhèn)痛作用及對肉芽腫實驗大鼠血清中前列腺素E2（PGE2）、腫瘤壞死因子（TNF-α）、一氧化氮（NO）、超氧化物歧化酶（SOD）含量的影響。結(jié)果：與模型對照組比較，高、中、低劑量組肉芽腫重量明顯降低（P<0.05或P<0.01），高、中劑量組PGE2、TNF-α含量降低（P<0.05或P<0.01），高、中、低劑量組NO含量降低、SOD活性增加（P<0.05或P<0.01）；與溶劑對照組比較，高、中、低劑量組小鼠熱板痛閾值明顯提高（P<0.05或P<0.01），高、中、低劑量組小鼠扭體次數(shù)減少，高劑量組扭體出現(xiàn)時間延長（P<0.05或P<0.01）。結(jié)論：柴芍乳增膠囊具有明顯的抗炎鎮(zhèn)痛作用，其作用與降低血清中PGE2、TNF-α、NO含量，提高SOD活性有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】柴芍乳增膠囊；抗炎；鎮(zhèn)痛；肉芽腫

【中圖分類號】R285.5 【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2023）17-0028-04

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2023.17.zgmzmjyyzz202317007

Study on Anti - inflammatory and Analgesia Effects of Chaishao Ruzeng Capsule

YANG Ming1 XIAO Dandan2 YU Dewei1 HE Hui1 YANG Ming1*

1.Jilin Academy of Traditional Chinese Medicine，Changchun 130012，China；2.School of Pharmacy， Changchun University of Chinese Medicine， Changchun 130117， China

Abstract：Objective To observe the anti-inflammatory and analgesia effects of Chaishao Ruzeng capsule. Methods Rats or mice were given high， medium and low doses （1.2 g/kg， 0.6 g/kg， 0.3 g/kg） of Chaishao Ruzeng Capsule by intragastric administration. To observe its anti-inflammatory and analgesia effects and effects on the contents of PGE2， TNF-α，NO and SOD in serum of granuloma experimental rats. Results Compared with model control group， the granuloma weight in high， medium and low dose groups was significantly decreased （P<0.05 or P<0.01）， the contents of PGE2 and TNF-αin high and medium dose groups were decreased （P<0.05 or P<0.01）， the content of NO in high， medium and low dose groups was decreased and the activity of SOD was increased （P<0.05 or P<0.01）. Compared with the solvent control group， the hot plate pain threshold of mice in high-dose， medium-dose and low-dose groups was significantly increased （P<0.05 or P<0.01）， the writhing times of mice in high-dose， medium-dose and low-dose groups were decreased， and the writhing time of mice in high-dose group was prolonged （P<0.05 or P<0.01）. Conclusions Chaishao Ruzeng capsule has obvious anti-inflammatory and analgesia effects， which are related to decreasing the contents of PGE2， TNF-αand NO in serum and increasing the activity of SOD.

Key words：Chaishao Ruzeng Capsule; Anti-inflammatory; Analgesia; Granulomatous

乳腺增生病，又稱乳腺小葉增生病，屬中醫(yī)乳癖范疇。是臨床上最常見的乳房疾病。其發(fā)病率占乳房疾病的首位［1］。中醫(yī)認為本病是由于情志不遂憂郁不解，久郁傷肝，導(dǎo)致肝氣郁結(jié)，氣機瘀滯，蘊結(jié)于乳房胃絡(luò)，乳絡(luò)經(jīng)脈阻塞不通，不通則痛而引起乳房疼痛；肝氣郁久化熱，熱灼津液為痰，氣滯痰凝，即可形成乳房腫塊。乳痛和乳房腫塊等兩大主癥為主要臨床表現(xiàn)。柴芍乳增膠囊處方是本課題組根據(jù)我院臨床應(yīng)用多年的內(nèi)部制劑處方，經(jīng)對各方藥配伍臨床觀察，結(jié)合臨床辨病與辨證，確立的治療乳腺增生病的處方，具有疏肝理氣、調(diào)沖和血，化痰散結(jié)之功效。本研究通過大鼠肉芽腫實驗、小鼠熱板實驗和醋酸扭體實驗，觀察其抗炎、鎮(zhèn)痛作用及其機制，為其臨床應(yīng)用提供藥理學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動物 Wistar大鼠SPF級，雄性，體重180～200 g；KM小鼠，SPF級，雌雄兼用，19～21 g。購自遼寧長生生物技術(shù)有限公司，生產(chǎn)許可證號：SCXK（遼）2020-0001。飼料：大小鼠維持飼料均購自北京（天津）科奧協(xié)力飼料有限公司，許可證號：津飼證（2020）01005。動物適應(yīng)性飼養(yǎng)4 d，正常飲食。飼養(yǎng)環(huán)境：屏障環(huán)境動物觀察室，溫度：20～24 ℃，相對濕度：40%～70%，換氣次數(shù) 10～15次/h，照明時間每日12/12 h交替照明。

1.2 藥物 柴芍乳增膠囊，規(guī)格：0.4 g/粒（3.875生藥/g），批號：200601，由吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院提供。阿司匹林，規(guī)格：100 mg/片，批號：BJ54292，由拜耳醫(yī)藥保健有限公司生產(chǎn)。

1.3 試劑 前列腺素E2（PGE2）、腫瘤壞死因子（TNF-α）、ELISA 試劑盒，長春晶美生物科技有限公司產(chǎn)品；一氧化氮（NO）、超氧化物歧化酶（SOD）測定試劑盒，南京建成生物工程研究所生產(chǎn)。

1.4 儀器 電子天平（d=0.1 mg），上海精密科學(xué)儀器有限公司；GJ-8402型熱板測痛儀，浙江寧海白石電子醫(yī)療儀器廠產(chǎn)品；酶標儀ST-360，上海科華實驗系統(tǒng)有限公司；T6紫外可見分光光度計，北京普利生有限公司；TGL-16B高速離心機，上海安亭科學(xué)儀器廠。

1.5 方法

1.5.1 對大鼠棉球肉芽腫及血清中PGE2、TNF-α、NO、SOD含量的影響 取大鼠50只，腹腔注射戊巴比妥鈉30 mg/kg，麻醉，消毒，于腋下左右兩側(cè)埋入重量20 mg的無菌棉球（青霉素0.2 mg/0.2 mL，浸泡，烘干）各一個。于術(shù)后2 h分隨機分為5組，分別為柴芍乳增膠囊（膠囊粉）高、中、低（1.2 g/kg、0.6 g/kg、0.3 g/kg）三個劑量組、陽性藥組（乳康片1.0 g/kg）及模型對照組（蒸餾水），每日灌胃給藥一次（10 mL/kg）。連續(xù)給藥7 d后，戊巴比妥鈉30 mg/kg麻醉，使用眼科剪剪開腹腔，腹主動脈取血3 mL，室溫放置20 min，離心20 min（速度3000 r/min，半徑10 cm）分離血清。取血清按照試劑盒說明書方法操作，檢測PGE2、TNF-α、NO、SOD含量。處死動物，將兩側(cè)腋下棉球連同周圍結(jié)締組織一起取出，剔除脂肪組織，在60 ℃烘箱中放置12 h后稱重。將稱得的重量減去棉球的重量即得肉芽腫重量。

1.5.2 對小鼠熱板的影響 取預(yù)先篩選合格（凡舔足時間小于5 s或大于30 s或跳躍者棄之不用）雌性小鼠50只，隨機分為5組，分別為柴芍乳增膠囊高、中、低（1.2 g/kg、0.6 g/kg、0.3 g/kg）三個劑量組、陽性藥組（阿司匹林20 mg/kg）及溶劑對照組（蒸餾水），灌胃給藥一次（20 mL/kg）。于給藥后2 h，將小鼠分別置于熱板上［溫度控制在（55±0.5） ℃］，記錄小鼠自放在熱板上出現(xiàn)舔足所需時間（秒）作為該鼠的痛閾值。如痛閾值超過60 s，即停止測試而按60 s計。觀察小鼠60 s內(nèi)痛閾值。

1.5.3 對醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的影響 取雌性小鼠50只，按體重隨機分為5組，分別為柴芍乳增膠囊高、中、低（1.2、0.6、0.3 g/kg）三個劑量組、陽性藥組（阿司匹林20 mg/kg）及溶劑對照組（蒸餾水），灌胃給藥一次（20 mL/kg）。于給藥后2 h，腹腔注射0.8%醋酸溶液0.1 mL/10 g，觀察小鼠15 min內(nèi)出現(xiàn)扭體反應(yīng)的時間及扭體反應(yīng)次數(shù)。

1.6 統(tǒng)計方法 采用SPSS 18.0軟件進行統(tǒng)計分析，數(shù)據(jù)用均數(shù)加減標準差（x±s）表示，組間比較采用t檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對大鼠棉球肉芽腫的的影響 柴芍乳增膠囊高、中、低劑量組及陽性藥組肉芽腫重量明顯低于模型對照組，有顯著性差異（P<0.05或P<0.01）。表明柴芍乳增膠囊能夠明顯抑制棉球肉芽腫重量。結(jié)果見表1。

2.2 對棉球肉芽腫大鼠血清中PGE2、TNF-α、NO、SOD含量的影響柴芍乳增膠囊高、中劑量組及陽性藥組能明降低PGE2、TNF-α含量，高、中、低劑量組及陽性藥組能明顯降低NO含量，增加SOD活性，與模型對照組比較有顯著性差異（P<0.05或P<0.01）。結(jié)果見表2。

2.3 對小鼠熱板的影響 柴芍乳增膠囊高、中、低劑量組及陽性藥組能明顯延長小鼠舔足出現(xiàn)時間提高痛閾值，與溶劑對照組比較有顯著性差異（P<0.05或P<0.01）。結(jié)果見表3。

2.4 對醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的影響 柴芍乳增膠囊高、中、低劑量組和陽性藥組能減少化學(xué)刺激所引起的小鼠扭體次數(shù)，高劑量組和陽性藥組能延長小鼠出現(xiàn)扭體時間，與溶劑對照組比較有顯著性差異（P<0.05或P<0.01）。結(jié)果見表4。

3 討論

柴芍乳增膠囊由柴胡、郁金、赤芍、夏枯草、香附、鹿角膠、橘核、玄參、浙貝母、海藻組成。疏肝理氣，調(diào)沖和血，化痰散結(jié)。用于肝郁氣滯，沖任失調(diào)，痰凝血瘀所致的乳房腫塊、乳房脹痛、煩躁易怒，西醫(yī)之乳腺小葉增生見上述證候者。方中柴胡具有和解少陽、疏肝解郁、升陽舉陷的功效， 柴胡皂苷具有良好的抗炎、抗病毒作用［2］；郁金具有行氣化瘀止痛、清心解郁、利膽退黃涼血之功，能通過促炎性細胞因子的釋放發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用［3］；赤芍清熱涼血，散瘀止痛，有抗炎和解痙鎮(zhèn)痛的作用［4-5］；夏枯草清肝瀉火、明目、散結(jié)消腫，對乳腺炎及乳腺增生癥有治療作用［6］；香附具有行氣解郁、調(diào)經(jīng)止痛的功效，具有明顯的抗炎鎮(zhèn)痛作用［7］；鹿角膠具有溫補肝腎、益精血、止血的功效，有明顯的抗炎、鎮(zhèn)痛作用［8］；橘核具有理氣、散結(jié)、止痛的功效，有較好的鎮(zhèn)痛抗炎作用［9］；玄參清熱涼血，滋陰降火，解毒散結(jié)，對炎癥因子的釋放具有抑制作用［10］；浙貝母具有鎮(zhèn)痛止咳、抗炎抑菌和抗癌抗腫瘤等功效［11］，海藻軟堅、消痰、利水、退腫。研究結(jié)果表明，柴芍乳增膠囊能明顯減輕大鼠棉球肉芽腫的重量，顯示對炎癥有明顯的抑制作用；能明顯提高小鼠熱板痛閾值，減少醋酸所致的小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)，顯示有明顯的鎮(zhèn)痛作用。

炎癥是在致炎因素的作用下，由炎癥細胞及其釋放的炎癥介質(zhì)參與引起的一系列病理生理過程。炎癥介質(zhì)中PGE2能增強血管通透性，從而吸引中性粒細胞引起發(fā)熱，誘導(dǎo)疼痛引發(fā)炎癥損傷。TNF-α能介導(dǎo)炎性細胞向炎癥局部聚集，最終造成組織損傷、炎癥等病理變化。NO可導(dǎo)致發(fā)生炎癥部位的滲出和水腫［12-14］。研究發(fā)現(xiàn)，柴芍乳增膠囊能降低棉球肉芽腫大鼠血清中PGE2、TNF-α、NO含量，同時能刺激機體產(chǎn)生大量的SOD，減輕氧自由基的損害。提示，其通過抑制炎癥介質(zhì)PGE2、TNF-α、NO釋放及增高SOD活性發(fā)揮抗炎鎮(zhèn)痛作用。上述抗炎鎮(zhèn)痛實驗研究為柴芍乳增膠囊臨床治療乳腺增生病提供了藥理學(xué)依據(jù)。

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