藥品企業微生物實驗室質量管理探究

胡 林

（華潤江中藥業股份有限公司，江西 南昌 330041）

近年來，人們對藥品安全問題越來越關注，為保障藥品質量安全，企業越來越注重產品質量檢查，因此，對藥品檢驗實驗室的能力也就有更高要求。藥品檢驗實驗室通常包括理化實驗室和微生物實驗室兩部分。經過多年的發展，理化實驗室具備較高水平，已經逐步形成現代化理化檢驗分析能力，擁有現代化檢驗分析儀器，同時，理化檢驗員具備高學歷及專業技能，基本能滿足高質量發展要求。而微生物實驗室沒能得到很好的發展。直到現在微生物檢測設備儀器發展緩慢，檢驗員大都是其他崗位調配，缺乏微生物專業知識，實驗室標準化程度不高，質量管理體系文件落后。隨著藥品行業的發展，生產部門要求微生物檢驗能夠及時有效地提供準確產品數據，為中間體的后續生產和成品的及時放行提供質量依據，因此，提高微生物實驗室質量管理水平勢在必行。

1 微生物的特點

微生物是一大類個體微小的生物群體，其生物特性就決定其檢驗的特殊性。首先，樣品中微生物污染程度。在檢驗前，對所檢樣品的微生物污染程度是未知，因此，所選取的方法和稀釋梯度都只能在檢測結果中進行推斷。其次，樣品中微生物污染種類。微生物種類繁多，且同一種微生物的生理結構和形態也隨時間不同而不同，樣品受污染的影響就復雜。受時間及空間的影響，同一批次產品可能被不同特性的微生物污染，需要采取不同的檢測方法才能更好地檢測出樣品微生物的污染情況。再次，樣品中微生物污染分布。由于樣品受微生物污染的不確定性，因此，在分布中呈現不均勻。不同部位的微生物檢測結果完全不同，即使同一部位多次取樣，最后的結果也不會相同。不同于化學物質，微生物生長和分布具有復雜和多樣的特點。因此，在判斷微生物檢驗結果的時候，檢驗員的微生物專業知識水平就尤為重要。除此之外，檢驗過程中，任何一個步驟過程都有可能出現微生物污染，這都直接影響檢驗結果，所以對微生物檢驗整體控制的必要性也尤為突出。

2 微生物檢驗的特點

《中華人民共和國藥典》（簡稱《中國藥典》）是國家監督管理藥品的法定標準，制藥企業在進行微生物檢驗的時候，均參照《中國藥典》里的微生物限度法進行檢驗。微生物限度檢查法系檢查非規定滅菌制劑及其原料、輔料受微生物污染程度的方法，檢查項目包括需氧菌數、霉菌數、酵母菌數總數及控制菌檢查。與理化檢驗具有明確的檢驗方法不同，微生物檢驗只有指導原則，針對不同產品并無檢驗方法，需要根據實驗室的實際情況進行各自的方法學，因此可能出現同樣的樣品，在不同的實驗室會有不同的微生物檢驗方法。根據樣品的理化特性與生物學特性，采取適宜的方法制備供試液，這就需要檢驗員具有足夠的檢驗經驗和微生物知識，才能對樣品采取合理的處理方法。雖然，藥典有供試液的制備方法，但很多情況下企業的樣品依然需要根據自己的實際情況進行供試液的制備。

2.1 計數適用性檢查

計數適用性檢查需要使用到大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉這五種菌株進行檢驗。其中大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌為細菌，白色念珠菌為真菌，黑曲霉為霉菌，他們代表不同類型的微生物，在做方法學的時候能夠具有代表性。微生物檢驗方法學的需求在于試驗條件的影響，特別是樣品中的物質對微生物生長是否具有抑制或者促進作用。每個實驗室就需要根據自身的情況設計方法學，就會出現同樣的樣品可采取不同的檢驗方法。計數方法主要包括平皿法和薄膜過濾法。中成藥和中藥提取物，由于含有大量不溶性物質，不能完全通過薄膜過濾，會有沉淀在薄膜上，因此大部分會采用平皿法對樣品進行微生物方法學驗證。固體制劑的樣品進行處理的時候，都需要加入緩沖液制備成液體供試品，然后根據樣品的污染情況稀釋成一定比例，再加入菌種進行方法學驗證。然而，部分中藥具有抑菌效果，可采取加抑菌劑或者增加稀釋劑的方法來處理樣品。非無菌藥品的微生物限度標準表明，需氧菌總數與霉菌和酵母菌總數的限度是不一致的，那在供試品稀釋的時候就會出現，稀釋程度越高有利于微生物的生長并且方便計數，能夠得到較好的檢驗數據。可是最后的結論，就會出現在限度范圍內需氧菌總數能夠進行檢測，而霉菌和酵母菌總數的檢驗數據就不靈敏，不能有效對樣品的進行監控。因此，在選擇適宜稀釋級進行微生物檢驗方法學的時候，需要根據樣品的微生物限度標準來制定方案，才能保證計數方法學通過后的順利實行。

2.2 控制菌適用性檢查

控制菌檢查是依據《中國藥典》的要求，基于藥品的給藥途徑和對患者健康潛在的危害以及中藥的特殊性而制訂的。因此不同的樣品其控制菌檢查項目是不同的。相比于計數方法學，控制菌檢查具有明確的檢驗方法，各企業可依據法規要求進行樣品的方法學驗證。控制菌是確定菌種，在判斷的時候，都在相應鑒定培養基上出現陽性生化反應作為判斷依據。如果在相應培養基上有類似的微生物生長，并且想繼續驗證該微生物是否是相應種屬的控制菌，那就要開展各類生化鑒別實驗，包括：細菌生化試驗、糖發酵試驗、賴氨酸脫酶試驗等等，同時還可以開展基因方面的分子鑒別，通過特定基因序列的比對來確定試驗中出現微生物的種屬。因此控制菌試驗對檢驗員的生物學水平具有較高的要求，這樣檢驗員才能順利開展相應試驗。

3 微生物實驗室的管理

3.1 人員

微生物實驗室的人員，需要具備非常強的微生物專業知識，熟悉相關法律法規及綜合素質較高的人員。目前，微生物實驗室人員大都由理化檢驗及其他部門調崗而來，所以工作人員也就缺乏微生物相關專業知識及工作經驗。微生物檢驗方法不同于其他檢驗，樣品的檢驗結果，要檢驗員憑自身的專業水平進行統計和分析，具有非常強的主觀性。因此，對于微生物檢驗人員需制定相應的管理措施，保證檢驗員具有相應的專業知識。首先，優化微生物實驗室人員架構，實驗室必須至少有一名具有微生物專業背景的人員。實驗室的培訓工作和文件起草等工作，由具有微生物專業知識的人完成。并且，開展理論知識的培訓，讓崗位上的每個檢驗員都具備一定的專業知識，能隨時開展微生物檢驗。其次，完善考核制度，定期對檢驗員進行微生物實驗各項操作考核，增強檢驗員對微生物生長特性的敏感性，進而保證檢驗結果的準確性。再次，對員工的培訓效果進行評估和總結，可通過內外部能力比對的方式，考察其是否達到相應的效果。每年都對檢驗人員的微生物知識和操作技能進行培訓和考核，才能保障其微生物專業知識及高水平的檢驗能力，進而對微生物檢驗結果準確性達到有效保障。

3.2 設備

微生物檢驗是無菌操作，要達到這條件，就需要穩定的實驗設備。微生物檢驗最重要的設備是滅菌器，其性能效果直接決定檢驗結果，因此滅菌設備的管理就是重中之重。滅菌設備作為特種設備，其操作人員必須具備上崗資格，還要有輪換人員，保障每次使用的安全性。操作滅菌器的時候，要進行滅菌溫度曲線的日常管理，對每次滅菌過程中溫度的上升、保溫的時間、腔體內的壓力等都應進行監控。而且，設備每年都要進行滅菌運行和性能確認，確保設備的各項數據指標都達到規范需求，滅菌程序符合設計及認證標準，進而保證滅菌的有效性。微生物檢驗的環境也必須得到有效保障，潔凈區每年都應進行過濾效果及風速等檢定，并對效果進行評估，形成靜態和動態的空氣環境檢測流程，進而控制微生物操作中的微生物污染。生物安全柜和超凈工作臺是兩種不同類型的設備，在使用過程中，需要根據設備的特定進行日常維護，并制定性能驗證方案。同時，其他檢驗相關設備包括：細菌培養箱、霉菌培養箱、電子天平等都需要進行日常監控，完善設備使用日志，這樣就可追溯影響微生物檢測結果的因素。

3.3 培養基

培養基，是供給微生物生長繁殖的，由不同營養物質組合配制而成的營養基質。現在技術水平的發展，都使用商業化培養基，使用方便，種類繁多。但不同公司之間的產品存在差異，需要制定完善的驗收制度。首先，確認廠家資質，并要求提供生產培養基的質量證書和報告單。其次，接收到的培養基按照規定進行適應性實驗，檢定是否滿足本實驗室的檢驗要求。再次，對不同廠家培養基之間的性能差異進行登記，以便選擇更適用于本實驗室培養基。培養基的使用和存放，可根據培養基使用說明書的要求來進行。由于培養基非常容易吸潮，因此使用和存放的濕度也是考慮的因素。培養基由于富含營養物質，非常適合微生物生長，在使用后，無法判斷是否有微生物在培養基中進行生長繁殖。因為，平皿上是否有菌是通過肉眼可見菌落進行判斷，但經過培養后的培養基，可能存在肉眼不可見的微生物。因此，使用后的培養基必須經過滅菌處理，這不僅可以殺死里面可能存在的微生物，而且破壞培養基的營養，減少培養基的效果。建立健全培養基的整個使用流程體系，從購買到配制再到銷毀，完善培養基管理體系，這樣就能有效保障微生物實驗室的順利運行。

3.4 菌種

實驗室的菌種均是從官方菌種保藏機構獲得的標準菌株，轉接一代后開始在本實驗室進行保藏。按照管理文件的要求，建立完善的管理記錄及保藏條件。菌種必須具有詳實的標識，含各項信息，包括：菌種名稱、來源、編號、特征、傳代時間、培養基名稱、培養條件、保藏方法、保藏位置等，并采用雙人復核的方法。菌種從領取到使用，再到銷毀應建立全監控臺賬，由實驗室負責人對過程進行監督。同時，微生物檢驗員應輪換進行菌種的傳代及活化，并開展相應的鑒別工作，其包括：形態鑒別、生化反應等，如有條件還可進行基因鑒別。這樣使得檢驗員能夠熟悉各菌種的特性特點，也可提高檢驗結果的準確性。

3.5 生物安全

微生物實驗室的生物安全是保障實驗室安全的重要工作。環境中存在各式各樣的微生物，特別是耐受性強的芽孢菌，很容易引起培養物的污染，進而影響檢驗結果的判斷。此外，外來檢品中還可能存在各種病原性微生物，這就需要微生物檢驗人員具有敏銳的生物安全防護意識，做好自身及周邊的保護。因此，實驗室制定各項生物安全制度，就是為了保障檢驗的準確性和實驗室人員的安全。微生物實驗室應建立廢棄物與泄漏物的應急處理方案，并將方案以圖片的形式貼在顯眼處，保證任何人在遇到緊急情況的時候，能夠按照方案進行緊急處理。定期開展全面的消毒效果驗證，包括：紫外燈、臭氧發生器、消毒液等嚴格控制消毒過程，確保消毒的有效性。針對實驗室可能出現的微生物污染源，包括：外來樣品攜帶的微生物、人員進入實驗室攜帶的微生物、空氣流動帶來的微生物等，建立可追溯文件，即可以找到檢驗過程中，可能出現的偏差，也可以有效加強實驗室的風險控制。對于可能出現的污染微生物，檢驗員必須具備較強的專業能力，能夠區分污染對微生物檢驗結果的影響，并熟練使用專業技術手段來進行生物安全方面的控制。同時，防止交叉污染也是生物安全防護的重點之一。為防止交叉污染，微生物檢驗室區域應該獨立于其他實驗室區域，嚴格控制檢驗人員數量。

4 實驗室體系文件的管理

文件體系是微生物實驗室管理的重要環節。實驗室需要根據實際情況制定質量管理體系文件。體系文件要能反映實驗室的檢測能力和范圍，保證檢驗結果的公正性，充分體現影響質量活動的各種要素，并且人員能夠按照體系文件將實際工作落到實處，進而有效控制質量活動的開展。實驗室嚴格按照各項條款編寫文件，明確分工并責任到人，確保質量管理體系有效運行。質量管理體系文件建立后，各種質量活動都如實進行填寫，真實地反映實驗室的運行情況。實驗室還配備監督員，在負責人的指導下，監督各項質量活動，使所有工作都在體系受控中運行。實驗室人員是文件系統的重要因素，其對管理體系的理解和執行等都直接影響各項質量活動的正常運行。由于微生物檢驗的特殊性，檢驗員的專業水平直接影響檢驗結果的準確性，所以更需要運用質量體系來管理微生物檢驗員。比如：開展經常性的培訓與監督，并將結果形成考核機制，提升員工的技能水平，不斷完善其微生物檢驗能力。

5 總結

藥品企業微生物實驗室管理是一項特殊且系統的工作，直接影響到企業的發展，尤其是現在制藥企業對于產品質量的關注程度越來越高，產品的好壞直接影響客戶對企業的滿意度。隨著大眾對生物風險管理意識的增強，監管部門對環境監控的力度增大，提高藥品微生物控制水平也是現代質量管理理念的要求。只有不斷提升微生物檢驗能力，完善實驗室管理能力，嚴格做到質量控制，藥品企業微生物檢驗行業就會有很好的發展。