早期肺腺癌組織中人天冬氨酸β-羥化酶、CD44V6的表達水平及臨床意義

卜小琨, 李京有, 程志華, 張鎖連

(煙臺業達醫院, 1. 心胸外科, 2. 病理科, 山東 煙臺, 264004)

肺腺癌是最常見的肺癌類型,占肺癌總數的40%～50%, 其多數起源于支氣管黏膜上皮,少數起源于大支氣管的黏液腺[1-2]。肺腺癌早期缺乏特異性表現,部分患者可出現咳嗽、痰中帶血、喘鳴、咯血等癥狀,而部分患者可無明顯癥狀,從而延誤診治,嚴重影響預后[3]。因此,尋找與早期肺腺癌發生、發展有關的指標,對早期肺腺癌病情及預后判斷具有重大意義,或可為臨床治療提供新靶點。人天冬氨酸β-羥化酶(ASPH)是一種廣泛表達的Ⅱ型膜蛋白,研究[4]顯示ASPH可在腫瘤組織中呈陽性表達。CD44V6是CD44跨膜蛋白分子的變異體,屬于細胞黏附分子,可影響癌細胞的黏附能力,從而調控癌細胞的侵襲與轉移[5]。本研究觀察早期肺腺癌組織中ASPH、CD44V6的表達情況,分析其與患者臨床病理特征的關系,現將結果報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取煙臺業達醫院2016年10月—2022年6月收治的肺癌患者為研究對象,本研究方案經醫院醫學倫理委員會批準。納入標準: ① 符合《中國原發性肺癌診療規范(2015年版)》[6]中相關診斷標準者; ② 經病理學檢查確定病理類型為腺癌者; ③ 根據第8版美國癌癥聯合委員會(AJCC)癌癥分期手冊pTNM分期為ⅠA期、ⅠB期且具備手術指征的肺腺癌患者(ⅠA期: 腫瘤最大徑≤3 cm, 無區域淋巴結及遠處轉移; ⅠB期: 腫瘤最大徑>3～5 cm,無區域淋巴結及遠處轉移); ④ 初診初治者; ⑤ 患者及家屬均知情本研究內容; ⑥ 有完整臨床資料和隨訪資料者。排除標準: ① 合并其他惡性腫瘤者; ② 合并血液系統疾病者; ③ 非原發性肺癌者; ④ 術前曾行新輔助化療、放療或靶向藥物治療者; ⑤ 合并肝腎功能不全者; ⑥ 合并嚴重感染者。本研究共納入120例早期肺腺癌患者,其中男50例,女70例; 年齡48～80歲,平均(62.11±8.32)歲; 臨床分期為ⅠA期59例, ⅠB期61例。根據組織分化程度另配對30例患者,男14例,女16例; 年齡49～75歲,平均(60.53±5.61)歲。

1.2 方法

1.2.1 基線資料收集方法: 設計基線資料調查表,對所有早期肺腺癌患者基線資料進行詳細調查并統計,包括性別(男、女),年齡(<60歲、≥60歲),臨床分期(ⅠA期、ⅠB期),分化程度(中高分化、低分化),既往吸煙史(有、無),腫瘤家族病史(有、無),體質量指數(<24 kg/m2、≥24 kg/m2), 腫瘤部位(左葉、右葉),疾病類型(浸潤性、微浸潤性、原位)。

1.2.2 ASPH、CD44V6檢測方法: 所有組織標本均使用全自動免疫組織化學染色系統(Roche Benchmark GX)進行檢測,采用Multimer Detection法進行免疫組織化學染色。所有標本均使用福爾馬林液進行固定,石蠟包埋,將4 μm厚石蠟切片脫蠟; 使用EDTA進行抗原修復,高溫5 min, 低溫15 min; 使用阻斷劑(Dako公司)孵育10 min; ASPH兔抗人單克隆抗體(工作液濃度1∶500, Abcam公司), CD44V6即用型鼠抗人單克隆抗體(Abcam公司),滴加二抗孵育30 min; 現用現配免疫顯色試劑(Dako公司)進行顯色; 復染判讀結果。

1.2.3 免疫組織化學結果判定: 由2名經驗超過5年的病理科醫師采用雙盲法對全部病理切片進行閱片,在顯微鏡下觀察組織染色情況。判定ASPH陽性表達為定位于細胞質,顏色為棕黃色; 判定CD44V6陽性表達為定位于細胞膜,部分在細胞質,顏色為棕黃色。見圖1。

A: ASPH陽性表達; B: CD44V6陽性表達。圖1 肺腺癌組織中ASPH、CD44V6陽性表達(放大400倍)

1.2.4 隨訪: 所有患者于出院后完成3年隨訪,隨訪方式為電話或門診復查,每3個月1次。監測并統計隨訪期間120例早期肺腺癌患者復發、轉移及病死情況,出現上述情況為預后不良,未出現則為預后良好。

1.3 統計學分析

2 結 果

2.1 癌組織與癌旁組織中ASPH、CD44V6表達情況

癌組織中ASPH、CD44V6陽性率均高于癌旁組織,差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 癌組織與癌旁組織中ASPH、CD44V6表達情況[n(%)]

2.2 癌組織中ASPH表達與臨床特征關系

臨床分期為ⅠB期、分化程度為低分化的患者的癌組織中ASPH陽性表達率高于臨床分期為ⅠA期、分化程度為中高分化的患者的癌組織,差異有統計學意義(P<0.05); 不同性別、年齡、既往吸煙史、腫瘤家族史、體質量指數、腫瘤部位、疾病類型的患者的癌組織中ASPH陽性表達率比較,差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 早期肺腺癌患者癌組織中ASPH表達與臨床特征關系[n(%)]

2.3 癌組織中CD44V6表達與臨床特征關系

年齡≥60歲、臨床分期為ⅠB期、分化程度為低分化的早期肺腺癌患者的癌組織中CD44V6陽性表達率高于年齡<60歲、臨床分期為ⅠA期、分化程度為中高分化的患者的癌組織,差異有統計學意義(P<0.05); 不同性別、既往吸煙史、腫瘤家族史、體質量指數、腫瘤部位、疾病類型的患者的組織中CD44V6陽性表達率比較,差異無統計學意義(P>0.05)。見表3。

表3 早期肺腺癌患者組織中CD44V6表達與臨床特征關系[n(%)]

2.4 臨床分期、分化程度與ASPH表達的相關性

經Somers′d檢驗結果顯示,臨床分期、分化程度與ASPH表達呈正相關(d=0.281、0.194,P=0.002、0.037)。

2.5 年齡、臨床分期、分化程度與CD44V6表達的相關性

經Somers′d檢驗結果顯示,年齡、臨床分期、分化程度與CD44V6表達呈正相關(d=0.207、0.211、0.263,P=0.036、0.022、0.004)。

2.6 ASPH與CD44V6表達在早期肺腺癌中的相關性

經卡方檢驗Phi系數顯示, ASPH與CD44V6表達在早期肺腺癌中呈正相關(Phi=0.906,P<0.05)。

2.7 癌組織中ASPH、CD44V6表達情況與早期肺腺癌患者預后的關系

120例早期肺腺癌患者3年內預后不良25例,占比20.83%。將ASPH與CD44V6表達情況作為自變量(ASPH表達: 1=陽性, 0=陰性; CD44V6表達: 1=陽性, 0=陰性),將早期肺腺癌患者預后情況作為因變量(1=預后不良, 0=預后良好)。Logistic回歸分析結果顯示, ASPH與CD44V6陽性表達是早期肺腺癌患者預后不良的危險因素(OR>1,P<0.05)。見表4。

表4 Logistic回歸分析結果

2.8 癌組織中ASPH、CD44V6表達情況對早期肺腺癌患者預后的預測價值

將早期肺腺癌患者預后情況作為狀態變量(1=預后不良, 0=預后良好),將ASPH、CD44V6表達情況作為檢驗變量; 繪制ROC曲線,結果顯示, ASPH、CD44V6表達預測早期肺腺癌患者預后的敏感度分別為0.960、0.920, 特異度分別為0.284、0.242。見圖2。

圖2 ASPH、CD44V6表達預測早期肺腺癌患者預后的ROC曲線圖

3 討 論

近年來,肺腺癌的發病年齡有年輕化的趨勢,提高診療效果、延長患者生命及提高生活質量一直是臨床治療肺癌的目標[7]。然而,多數患者確診時已處于中晚期,給臨床治療增加難度,且影響患者預后情況[8-9]。因此,尋找與早期肺腺癌發生、發展有關的指標意義重大。張繼宗等[10]研究發現, ASPH的表達與腫瘤組織密切相關,且可影響患者預后情況。CD44V6是機體組織中的一種分化抗原誘導因子,是含變異性外顯子v6編碼序列的CD44分子。張中超等[11]研究指出,組織中CD44V6的表達與癌癥患者臨床病理特征有關。由此推測ASPH、CD44V6表達可能與早期肺腺癌有關,或可作為臨床評估患者預后及指導治療方案的有效腫瘤標志物。

本研究結果顯示,癌組織中ASPH陽性率高于癌旁組織,且與早期肺腺癌患者臨床分期及組織分化程度有關,表明ASPH與早期肺腺癌的發生和發展具有關系。分析原因為: ASPH是一種高度保守的脫氧酶,其依賴于三羧酸循環的產物α-酮戊二酸,可在二價鐵存在的條件下羥化多種蛋白質,也可使表皮細胞生長因子上的天冬氨酸或天冬酰胺殘基發生羥基化。表皮細胞生長因子與細胞表面的表皮生長因子受體結合,可啟動細胞核內的有關基因,從而促進細胞分裂增殖,在腫瘤細胞生長、分化及運動中發揮重要作用。朱良炎等[12]研究結果顯示, ASPH在非小細胞肺癌組織中的陽性表達率為68.90%, 癌旁組織陽性表達率為20.00%, 本研究結果與其結果一致,進一步證實了ASPH表達與早期肺腺癌的關系。有研究[13]表明, ASPH表達水平與Notch信號通路的激活密切相關, ⅠB期及低分化肺腺癌患者惡性程度更高,體內Notch受體和配體表達水平更高,高度表達的Notch受體和配體刺激Notch信號傳導通路,從而促使ASPH大量表達。

目前已有研究[14-15]報道, CD44與腫瘤浸潤轉移關系,陽性表達者較易發生脈管浸潤和遠處轉移,且生存率低,預后較差。本研究結果顯示,癌組織中CD44V6陽性率均高于癌旁組織,且與早期肺腺癌患者年齡、臨床分期及組織分化程度有關,這表明CD44V6的表達與早期肺腺癌的發生有關,且在臨床進展及癌細胞增殖分化中起到重要作用。分析原因為: CD44V6是CD44的一種變異體,在多種細胞和組織表面廣泛表達,可參與腫瘤細胞與宿主細胞和宿主基質的黏附,可通過與細胞外基質中的透明質酸、膠原蛋白、血管內皮細胞等的黏附作用,賦予腫瘤細胞很強的生長及轉移能力,從而促進腫瘤細胞的侵襲與轉移[16]。因此, CD44V6可參與早期肺腺癌的發生。此外, CD44V6的上調可增強透明質酸合成酶基因的表達,從而促進透明質酸的合成,與透明質酸結合的CD44V6可促進PI3K/Akt信號通路,增加細胞凋亡,進而調控腫瘤的發生和發展[17]。由此可見, CD44V6對疾病進展及癌細胞的分化能力具有調控作用,且CD44V6的表達情況可能與患者病情有關。老年人群因為體內T淋巴細胞減少,機體免疫力下降,對于癌細胞的清除能力大大降低,更應該密切關注CD44V6表達情況。

本研究通過相關性分析發現, ASPH與CD44V6表達具有相關性,表明ASPH與CD44V6在早期肺腺癌中起到了協同作用。分析原因為: ASPH可對細胞外黏附分子進行羥基化修飾,促使CD44V6的黏附作用增強,從而共同促進腫瘤的發生、發展。本研究還發現ASPH與CD44V6陽性表達是早期肺腺癌患者預后不良的危險因素,具有一定的預測價值,提示早期肺腺癌組織中ASPH與CD44V6陽性表達可能對預后評估具有一定的意義。本研究不足之處為: 研究檢測的是癌組織中ASPH和CD44V6的表達情況,并未驗證其是否與患者血液中ASPH和CD44V6的表達有關,后續會擴大樣本量,增加血液中ASPH和CD44V6的檢測以進行深入研究,以驗證聯合檢測對于疾病評估和預后判斷的價值。

綜上所述,早期肺腺癌組織中ASPH和CD44V6陽性表達率較高,且年齡、臨床分期、分化程度與CD44V6陽性表達有關,臨床分期、分化程度與ASPH陽性表達有關。ASPH和CD44V6或可作為判斷早期肺腺癌病情發展的潛在標志物。