通竅活血湯對(duì)血管性癡呆大鼠海馬組織miR-9、miR-124表達(dá)水平的影響

鄒莉芳,盧昌均,魏曉玲,楊 茜,頓玲露,王少洲

(1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)研究生院,廣西 南寧 530004;2.柳州市中醫(yī)醫(yī)院 柳州市壯醫(yī)醫(yī)院,廣西 柳州 545001)

血管性癡呆(Vascular dementia,VD)是一種常見(jiàn)的癡呆類(lèi)型,由各種腦血管疾病導(dǎo)致腦損傷而致獲得性智力損害,其臨床表現(xiàn)以記憶能力的減退及認(rèn)知功能的下降為主。通竅活血湯源自清代醫(yī)家王清任編著《醫(yī)林改錯(cuò)》,是活血化瘀類(lèi)的代表方劑,也是治療頭竅部疾病的經(jīng)典名方,書(shū)中述“治頭面,四肢,周身血管血瘀之證”,說(shuō)明該方有活血化瘀通絡(luò)、開(kāi)竅醒神的作用。現(xiàn)代藥理學(xué)表明通竅活血湯可提高血腦屏障通透性、擴(kuò)張腦血流量,促進(jìn)血液循環(huán)、改善血流動(dòng)力、減輕腦水腫,并通過(guò)增強(qiáng)腦細(xì)胞缺氧的耐受性、促進(jìn)血管生成[1-2]來(lái)改善腦損害癥狀。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立VD模型大鼠,干預(yù)4周,通過(guò)卒中指數(shù)、神經(jīng)病學(xué)癥狀評(píng)分進(jìn)行評(píng)分,使用Morris水迷宮檢測(cè)觀察大鼠行為學(xué)改變,RT-qPCR法檢測(cè)大鼠海馬組織miR-9、miR-124含量,HE染色觀察大鼠海馬病理學(xué)結(jié)構(gòu)情況。探討通竅活血湯治療VD的作用機(jī)制及影響,為通竅活血湯治療血管性癡呆提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選用SPF級(jí)SD健康大鼠,購(gòu)自長(zhǎng)沙市天勤生物技術(shù)有限公司,生產(chǎn)許可號(hào):SCXK (湘) 2019-0013,體重約(200±20)g,予自由進(jìn)食、進(jìn)水喂養(yǎng),動(dòng)物房條件控制在溫度(23±2)℃、濕度(60±3)%,12 h光照/12 h黑暗適應(yīng)性喂養(yǎng)1周,環(huán)境安靜、清潔。每日均探視觀察,保證動(dòng)物房的溫度、濕度、光線,大鼠墊料保持干燥、食物及飲用水無(wú)菌且充足,本研究實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遵循ARRIVE指南和巴塞爾宣言有關(guān)規(guī)定[3]。

1.2 藥物與試劑 通竅活血湯根據(jù)《醫(yī)林改錯(cuò)》原方組成為:麝香(人工麝香)0.15 g(絹包、后下),桃仁、紅花、生姜各9 g,赤芍、川芎各3 g,老蔥3根,大棗7枚,黃酒250 ml。中藥飲片由國(guó)藥控股廣西中藥飲片有限公司提供,均委托柳州市中醫(yī)醫(yī)院中藥制劑室加工而成。按人與動(dòng)物藥物劑量換算公式得出大鼠所需藥物濃度為6 g/kg,并進(jìn)行定容,每只大鼠每天灌胃容量為含生藥2 g/ml的中藥溶液[4],于4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

所需試劑如下:miRcute miRNA提取分離試劑盒、miRcute增強(qiáng)型miRNA cDNA第一鏈合成試劑盒、miRcute增強(qiáng)型miRNA熒光定量檢測(cè)試劑盒(SYBR Green):天根生化科技(北京)有限公司;蘇木素-伊紅染料、4%多聚甲醛:索萊寶生物科技有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 全自動(dòng)雪花制冰機(jī):張家港伊威特電器有限公司;包埋機(jī)YB-6LF、石蠟切片機(jī)LEICA2235、組織攤烤片機(jī)YT-7FB:孝感市亞光醫(yī)用電子技術(shù)有限公司。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法、分組及給藥 假手術(shù)組大鼠僅分離出雙側(cè)頸總動(dòng)脈(CCA),剩余各組均采用缺血再灌注配合永久性結(jié)扎雙側(cè)CCA法[5]建立VD大鼠模型。術(shù)前禁食12 h,禁水4 h,用1.5%戊巴比妥鈉40 mg/kg腹腔注射麻醉。大鼠麻醉后,將其仰臥固定于操作臺(tái),充分暴露頸部并用碘伏消毒,頸部以下部位保暖,沿前正中線切開(kāi)頸部皮下組織,鈍性分離充分暴露雙側(cè)CCA,隨即使用無(wú)創(chuàng)動(dòng)脈夾夾閉CCA 10 min,再松開(kāi)無(wú)創(chuàng)動(dòng)脈夾灌注10 min,以上步驟重復(fù)3次,經(jīng)過(guò)3次缺血再灌注后使用4號(hào)手術(shù)縫線永久結(jié)扎雙側(cè)CCA,0.9%氯化鈉溶液清理傷口并縫合,術(shù)后連續(xù)3 d予慶大霉素注射液噴灑傷口預(yù)防感染。建模過(guò)程中應(yīng)密切觀測(cè)大鼠生命體征,注意保暖,肛溫維持在(37±0.5)℃,模型建立過(guò)程保持動(dòng)作輕柔,避免損傷神經(jīng)、血管等。造模后7 d內(nèi)傷口愈合即使用Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)確認(rèn)模型是否成功,評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)為:統(tǒng)計(jì)假手術(shù)組及模型組大鼠的逃避潛伏期,并以假手術(shù)組的作為參考值,計(jì)算出模型組的逃避潛伏期與參考值之差及占該鼠逃避潛伏期的比例>20%即為癡呆。造模失敗者剔除,最終共剔除15只大鼠,每組剩余12只。

傷口愈合后,所有大鼠均適應(yīng)性下水游泳2 min,排除不會(huì)游泳的大鼠,本實(shí)驗(yàn)12只假手術(shù)組大鼠均會(huì)游泳。造模成功大鼠的行為學(xué)表現(xiàn):①VD大鼠在定位航行實(shí)驗(yàn)的表現(xiàn)為繞水迷宮池壁游泳、空間探索能力差、潛伏期長(zhǎng)。若以上述計(jì)算VD大鼠逃避潛伏期時(shí)間來(lái)確定是否造模成功,那么本實(shí)驗(yàn)的造模成功率約為70%。②外形表現(xiàn):造模成功的大鼠可見(jiàn)毛發(fā)臟亂,缺少光澤,爪甲、口唇、耳朵顏色黯淡,眼瞼下垂,行動(dòng)緩慢,對(duì)新鮮事物探索度下降,觸之躲避反應(yīng)減弱,喜蜷聚,進(jìn)食及飲水減少;個(gè)別大鼠可見(jiàn)狂躁?duì)?與同籠中大鼠斗毆,甚至咬食同籠大鼠。將VD大鼠隨機(jī)分為三組,即模型組、中藥組、安慰劑組,每組12只。

中藥組大鼠服用通竅活血湯1 ml/100(g·d)灌胃,安慰劑組予中藥組等體積的0.9%氯化鈉溶液灌胃,假手術(shù)組及模型組不予干預(yù),共持續(xù)4周。

1.5 觀察指標(biāo)

1.5.1 卒中指數(shù)、神經(jīng)病學(xué)癥狀評(píng)分:造模第1天及干預(yù)第28天次日,進(jìn)行卒中指數(shù)評(píng)分。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)及分值如下:毛發(fā)臟亂或顫抖或發(fā)聲、運(yùn)動(dòng)遲鈍或減少、耳觸覺(jué)減退、上瞼下垂各1分;頭翹起、眼球固定狀睜開(kāi)、后肢外展成“八”字、轉(zhuǎn)圈、驚厥爆發(fā)樣運(yùn)動(dòng)各3分;極度衰竭為6分。神經(jīng)病學(xué)癥狀評(píng)分,標(biāo)準(zhǔn)及分值如下。運(yùn)動(dòng):自發(fā)性探究為0分,刺激時(shí)走動(dòng)為1分,正常步態(tài)為0分;步態(tài):共濟(jì)失調(diào)為1分,爬行為2分,無(wú)步態(tài)為3分;進(jìn)食:能為0分,不能為1分;飲水:能為0分,不能為1分;疼痛刺激反應(yīng):疼痛刺激時(shí)可移動(dòng)為0分,僅頭或軀干活動(dòng)為1分,肢體回縮或無(wú)反應(yīng)為2分。其中卒中指數(shù)為0～3分為癥狀組,3～9分為可能有損害,10分以上為有損傷;神經(jīng)病學(xué)癥狀為0分正常,1～3分輕度損傷,4～6分中度損傷,7～10分嚴(yán)重?fù)p傷。

1.5.2 行為學(xué)檢測(cè):干預(yù)結(jié)束后在Morris水迷宮進(jìn)行檢測(cè),水迷宮直徑160 cm、高50 cm,共分為4個(gè)象限,每個(gè)象限均做不同的標(biāo)記為便大鼠識(shí)別記憶,水迷宮固定象限內(nèi)放置一個(gè)直徑12 cm,高30 cm的黑色平臺(tái),水迷宮四周為黑色帷幕且分別有不同標(biāo)記便于大鼠識(shí)記,保持光線暗且穩(wěn)定,便于攝像頭捕捉記錄,水溫維持在(25±1)℃,了解各組大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。水迷宮實(shí)驗(yàn)內(nèi)容分為定向航行實(shí)驗(yàn)和空間探索實(shí)驗(yàn)兩個(gè)部分。

1.5.2.1 定向航行實(shí)驗(yàn):實(shí)驗(yàn)共進(jìn)行5 d,第1天水迷宮內(nèi)不設(shè)置平臺(tái),以熟悉水迷宮環(huán)境為主,讓大鼠自由游泳120 s。第2天起正式實(shí)驗(yàn),每只鼠每天進(jìn)行8次,持續(xù)至第5天,每天均在固定時(shí)段,以減少不同時(shí)段大鼠狀態(tài)差別導(dǎo)致結(jié)果有差別。訓(xùn)練時(shí),將大鼠分別從不同象限邊緣的中點(diǎn)將大鼠面向池壁放入水迷宮中,若大鼠在120 s內(nèi)找到平臺(tái),允許其在平面上休息10 s,若大鼠未在120 s內(nèi)找到平臺(tái),則引導(dǎo)大鼠找到平臺(tái),讓其在平臺(tái)上休息10 s,再次進(jìn)行下一象限入水實(shí)驗(yàn),每個(gè)象限依次進(jìn)行。使用自由錄像記錄系統(tǒng)記錄大鼠逃避潛伏時(shí)間、游泳路線及速度等。

1.5.2.2 空間探索實(shí)驗(yàn):定位航行實(shí)驗(yàn)結(jié)束次日,測(cè)量大鼠保持對(duì)平臺(tái)空間位置的記憶能力。實(shí)驗(yàn)第6天,撤除水迷宮逃生平臺(tái),并任意選個(gè)象限中點(diǎn)作為落水點(diǎn)將大鼠放入水迷宮中,所有大鼠都應(yīng)從同一落水點(diǎn)入水,記錄并比較各組大鼠在120 s內(nèi)穿越原目標(biāo)區(qū)域平臺(tái)的次數(shù)。

1.5.3 RT-qPCR法檢測(cè)大鼠海馬miR-9、miR-124含量:每組隨機(jī)取部分大鼠麻醉后斷頸處死,在冰浴中快速剝離海馬,將海馬組織放入標(biāo)記好的EP管后至-80 ℃冰箱凍存留作備用。按照RT-qPCR說(shuō)明書(shū)進(jìn)行海馬組織的RNA提取并測(cè)定濃度,對(duì)提取的RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,最后使用PCR儀器進(jìn)行測(cè)定,并用2-ΔΔCt法計(jì)算出各目的基因的表達(dá)含量。

1.5.4 HE染色觀察海馬組織形態(tài):每組隨機(jī)取部分大鼠深度麻醉,快速謹(jǐn)慎剖開(kāi)胸腔充分暴露心臟,止血鉗夾持心尖并固定,注射針頭從心尖刺入,進(jìn)入主動(dòng)脈后剪開(kāi)右心耳,快速注入0.9%氯化鈉溶液,置換出血液,可見(jiàn)大鼠肝臟變白、流出的血液轉(zhuǎn)為無(wú)色液體時(shí)即轉(zhuǎn)為4%多聚甲醛持續(xù)灌注,可見(jiàn)大鼠四肢及尾部抽動(dòng),待大鼠全身僵硬后停止灌注。灌注完成后快速斷頸取腦,將大腦置于4%多聚甲醛內(nèi)過(guò)夜,次日脫水、包埋并切片,切片厚度2.5 μm,切片后進(jìn)行烤片、脫蠟、染色、脫水、中性樹(shù)脂封膜,顯微鏡下觀察海馬組織形態(tài)。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 26.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析。本實(shí)驗(yàn)計(jì)量資料均呈正態(tài)分布,以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,采用t檢驗(yàn),多組間比較采用單因素方差分析;P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠卒中指數(shù)、神經(jīng)病學(xué)癥狀評(píng)分比較 見(jiàn)表1。造模第1天,與安慰劑組比較,假手術(shù)組大鼠卒中指數(shù)及神經(jīng)病學(xué)癥狀評(píng)分均降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),模型組及中藥組大鼠的卒中指數(shù)及神經(jīng)病學(xué)癥狀評(píng)分比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);干預(yù)第28天,各組大鼠評(píng)分均下降,與安慰劑組相比,假手術(shù)組及中藥組大鼠的卒中指數(shù)及神經(jīng)病學(xué)癥狀評(píng)分均明顯下降(P<0.05),模型組大鼠的卒中指數(shù)及神經(jīng)病學(xué)癥狀評(píng)分比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表1 各組大鼠卒中指數(shù)評(píng)分和神經(jīng)病學(xué)癥狀評(píng)分比較(分)

2.2 各組大鼠逃避潛伏期及穿越平臺(tái)次數(shù)比較 見(jiàn)表2。與安慰劑組相比,假手術(shù)組及中藥組逃避潛伏期耗時(shí)縮短,穿越平臺(tái)次數(shù)增多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),模型組逃避潛伏期耗時(shí)及穿越平臺(tái)次數(shù)相當(dāng),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表2 各組大鼠逃避潛伏期及穿越平臺(tái)次數(shù)比較

2.3 各組大鼠海馬組織miR-9、miR-124表達(dá)水平比較 見(jiàn)表3。與安慰劑組比較,假手術(shù)組及中藥組大鼠海馬組織miR-9、miR-124表達(dá)水平降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),模型組大鼠海馬組織miR-9、miR-124表達(dá)水平稍降低,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表3 各組大鼠海馬組織miR-9、miR-124表達(dá)水平比較

2.4 各組大鼠HE染色結(jié)果 假手術(shù)組大鼠海馬組織神經(jīng)元結(jié)構(gòu)完整,無(wú)明顯丟失現(xiàn)象,細(xì)胞排列整齊、分布密集有序,形態(tài)良好,細(xì)胞核染色均勻;模型組及安慰劑組大鼠海馬組織神經(jīng)元結(jié)構(gòu)殘缺,神經(jīng)元丟失現(xiàn)象明顯,細(xì)胞排列凌亂,數(shù)量減少,分布疏散雜亂,形態(tài)不規(guī)則,細(xì)胞外觀腫脹,與周?chē)M織間隙增大,細(xì)胞核染色不均勻,細(xì)胞核形態(tài)固縮;中藥組大鼠海馬組織神經(jīng)元結(jié)構(gòu)相對(duì)完整,神經(jīng)元有少量丟失,細(xì)胞排列相對(duì)有序,分布較安慰劑組大鼠的密集,形態(tài)欠規(guī)則,細(xì)胞水腫減輕,與周?chē)M織間隙縮小,細(xì)胞核染色程度減低,細(xì)胞核固縮形態(tài)相對(duì)減少(圖1)。

··A:假手術(shù)組;B:模型組;C:中藥組;D:安慰劑組

3 討 論

VD是目前世界上公認(rèn)的唯一可防治的癡呆類(lèi)型,及早治療甚至有可逆性可能。VD在中醫(yī)中雖無(wú)對(duì)應(yīng)病名,亦未與其他呆病相互區(qū)分,但據(jù)其臨床癥狀,屬于中醫(yī)“癡呆”“健忘”“呆病”“癡呆”等范疇。中醫(yī)認(rèn)為癡呆病位在腦,與五臟關(guān)系密切。古代醫(yī)家認(rèn)為癡呆可能是由于腎虛、肝郁、痰濁、血虛或瘀血所致,治療上往往從補(bǔ)腎補(bǔ)精、健脾益氣、化痰開(kāi)竅、活血化瘀、安肝養(yǎng)陽(yáng)、安神養(yǎng)心等方面入手,中藥多選用補(bǔ)虛藥、活血化瘀藥、開(kāi)竅藥等。鄢海良等[6]通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究顯示,通竅活血湯中各藥有效成分可通過(guò)血腦屏障,提高腦代謝率、增加腦血流量、改善神經(jīng)功能缺損癥狀等,通過(guò)抑制自由基氧化反應(yīng)、保護(hù)血腦屏障、調(diào)節(jié)腦血流、加強(qiáng)血管再生能力、促進(jìn)神經(jīng)元再生,遏抑或促使神經(jīng)傳遞介質(zhì)的釋放等作用機(jī)制治療VD。

通竅活血湯出自清代名醫(yī)王清任所著《醫(yī)林改錯(cuò)》,其為頭竅部瘀血要方,方由麝香、桃仁、紅花、赤芍、川芎、大棗、鮮姜、老蔥、黃酒等組成,方中桃仁、紅花為對(duì)藥,兩藥互相配伍善于活血散瘀通經(jīng);川芎素有“血中氣藥”之稱(chēng),專(zhuān)于活血行氣;赤芍可清熱涼血散瘀;麝香更擅開(kāi)竅醒神,加之活血通絡(luò),配合姜、棗、老蔥、黃酒更能通絡(luò)開(kāi)竅,通達(dá)氣運(yùn)血行之道路,使得全方共奏活血化瘀、開(kāi)竅通絡(luò)之效。王清任立該方以“治頭面四肢、周身血管血瘀之癥”,現(xiàn)代臨床仍有延續(xù)使用該方治療血管性癡呆之頭竅部血瘀證,其取得的臨床療效獲得肯定。孫曉麗等[7]發(fā)現(xiàn),通竅活血湯改善VD大鼠癥狀是通過(guò)改善維生素B6及脂肪酸代謝、促進(jìn)類(lèi)固醇激素生物合成等代謝通路實(shí)現(xiàn)的。劉江華等[8]表明通竅活血湯改善VD癥狀可能是通過(guò)調(diào)節(jié)血管新生因子,即抑制血管因子ET-1、促進(jìn)生成VEGF發(fā)揮作用。張立娟等[9]證明通竅活血湯可通過(guò)降低Glu的神經(jīng)興奮毒性來(lái)改善腦缺血再灌注損傷大鼠的神經(jīng)功能。本研究選取miR-9、miR-124作為研究?jī)?nèi)容,探討二者與VD的關(guān)系,闡明通竅活血湯治療VD的可能作用機(jī)制。但是,由于中草藥及復(fù)方含有的化學(xué)成分多樣復(fù)雜,難以捕捉到究竟是哪種化學(xué)成分對(duì)VD的發(fā)病機(jī)制起治療作用,還需進(jìn)一步研究探索。

海馬體位于內(nèi)側(cè)顳葉部,海馬區(qū)是與學(xué)習(xí)和記憶有關(guān)的最關(guān)鍵的大腦區(qū)域之一,當(dāng)大腦發(fā)生缺血性損傷時(shí),以海馬CA1區(qū)最為敏感的區(qū)域非常容易受到損傷,海馬區(qū)神經(jīng)元的數(shù)量及其結(jié)構(gòu)的完整性和突觸傳遞的有效性均可直接影響認(rèn)知功能,海馬的功能和形態(tài)紊亂是導(dǎo)致認(rèn)知功能障礙的重要因素[10]。林聰?shù)萚11]使用活血化痰膠囊治療VD大鼠可促進(jìn)其海馬區(qū)Bcl-2的表達(dá)以緩解氧化應(yīng)激反應(yīng),促進(jìn)大鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力恢復(fù)。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),假手術(shù)組大鼠的海馬組織神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài)無(wú)明顯破壞,大鼠學(xué)習(xí)記憶能力無(wú)明顯下降,而模型組大鼠海馬組織神經(jīng)元形態(tài)破壞明顯,其學(xué)習(xí)記憶能力均有不同程度下降,使用通竅活血湯治療后的大鼠海馬組織神經(jīng)元形態(tài)相對(duì)恢復(fù),其學(xué)習(xí)記憶能力得到改善,說(shuō)明通竅活血湯可影響海馬組織神經(jīng)元形態(tài),促進(jìn)神經(jīng)元細(xì)胞修復(fù),進(jìn)而改善VD大鼠的認(rèn)知能力障礙。通竅活血湯促進(jìn)海馬神經(jīng)細(xì)胞修復(fù)是通過(guò)何種機(jī)制實(shí)現(xiàn)的,目前尚未闡明,近年來(lái)不斷有新的研究表明miR-9、miR-124在大腦發(fā)育特別是認(rèn)知功能方面起重要作用,我們猜測(cè)通竅活血湯可能是通過(guò)調(diào)控miR-9、miR-124的表達(dá)促進(jìn)海馬區(qū)病理形態(tài)恢復(fù)而起到改善認(rèn)知障礙的作用。但通竅活血湯究竟是通過(guò)何種途徑調(diào)節(jié)miR-9、miR-124的表達(dá)水平尚鮮有研究,同時(shí)這也是本研究的不足之處,在后續(xù)的研究中可進(jìn)一步探討。

微小核糖核酸(miRNA)是一種小的非編碼RNA,結(jié)合在mRNA的特定位點(diǎn),轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)基因表達(dá)[12],在許多神經(jīng)系統(tǒng)疾病的中發(fā)揮重要調(diào)控作用。有研究顯示,VD患者大腦中的mRNA會(huì)出現(xiàn)異常調(diào)控的情況[13]。miR-9和miR-124均是miRNAs家族中的成員之一,二者在大腦中表達(dá)含量豐富,特別是在發(fā)育過(guò)程中尤為突出[14-16]。與健康成人相比[17-18],AD患者大腦中顳葉新皮層、海馬區(qū)等與記憶功能相關(guān)的區(qū)域miR-9表達(dá)水平顯著升高,結(jié)合本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,VD 模型大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力出現(xiàn)障礙可能與過(guò)度表達(dá)的miR-9相關(guān),VD大鼠海馬組織中miR-9的表達(dá)含量明顯升高。由于miR-9可促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞VEGF表達(dá),故對(duì)血管生成具有促進(jìn)作用[19]。此外,miR-9的表達(dá)受到抑制時(shí),慢性腦灌注不足模型大鼠的學(xué)習(xí)和記憶能力可得到一定程度的改善,并能夠通過(guò)調(diào)節(jié)神經(jīng)元、增強(qiáng)突觸可塑性、減少神經(jīng)元丟失等途徑而發(fā)揮腦保護(hù)作用[14,20]。經(jīng)通竅活血湯治療后大鼠海馬組織的miR-9、miR-124表達(dá)水平下降,綜上,推測(cè)通竅活血湯治療VD的途徑可能是通過(guò)其改善局部腦灌注及代謝、調(diào)節(jié)突觸可塑性、調(diào)節(jié)神經(jīng)元等途徑,促進(jìn)miR-9及miR-124在病理狀態(tài)下改善內(nèi)環(huán)境,起到改善認(rèn)知障礙的作用。

綜上所述,通竅活血湯可有效改善VD大鼠的空間學(xué)習(xí)記憶障礙程度,VD大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能與海馬神經(jīng)元結(jié)構(gòu)破壞程度具有一定相關(guān)性,miR-9、miR-124的異常表達(dá)可能是VD的發(fā)病機(jī)制之一,通竅活血湯治療VD可能是通過(guò)抑制miR-9、miR-124的過(guò)度表達(dá)發(fā)揮治療作用。