下肢缺血再灌注損傷患者檢測(cè)8-異前列腺素F2α和血栓烷B2的臨床意義

梁祥森，楊勝壯，黃高昇

（廣西醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院胸心血管外科，廣西 南寧 530000）

缺血再灌注損傷（IRI）是指正常組織器官的細(xì)胞發(fā)生缺血后，血流再次恢復(fù)，從而引起細(xì)胞功能代謝障礙、結(jié)構(gòu)破壞持續(xù)加重等損傷[1]。下肢I(xiàn)RI 可引起患肢壞死，毒素經(jīng)吸收可影響全身多器官功能，嚴(yán)重時(shí)可引起多器官功能衰竭，危及生命[2]。近年來(lái)有研究指出，8- 異前列腺素F2ɑ（8-iso-PGF2ɑ）與機(jī)體過(guò)氧化損傷關(guān)系密切，能夠反映氧化應(yīng)激后的脂質(zhì)過(guò)氧化，是最理想的評(píng)價(jià)氧化應(yīng)激程度的生化指標(biāo)[3]。血栓烷是血小板微粒體合成并釋放的生物活性物質(zhì)，具有促進(jìn)血管收縮和血小板聚集的作用。其代謝產(chǎn)物血栓烷B2（TXB2）可間接反映組織器官的血供情況[4]。本文對(duì)廣西醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院心血管外科收治的40 例經(jīng)介入治療重新開(kāi)通動(dòng)脈恢復(fù)血供后出現(xiàn)IRI 的下肢動(dòng)脈硬化閉塞患者進(jìn)行研究，旨在探討下肢I(xiàn)RI 患者檢測(cè)8-iso-PGF2ɑ 和TXB2的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取廣西醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院心血管外科收治的40 例經(jīng)介入治療重新開(kāi)通動(dòng)脈恢復(fù)血供后出現(xiàn)IRI的下肢動(dòng)脈硬化閉塞患者為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）臨床確診為IRI[5]；（2）年齡55 ～75 歲；（3）接受手術(shù)治療（介入手術(shù)）。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）存在靜脈栓塞性疾病；（2）存在血液系統(tǒng)疾病；（3）存在抗凝藥物使用禁忌者；（4）存在高危致死性疾病，如心肺肝腎功能衰竭等[6]。本研究獲得醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，研究對(duì)象已簽署知情同意書(shū)。

1.2 試劑與器材

ELISA 試劑盒、抗原、抗體、酶標(biāo)記抗體、陽(yáng)性對(duì)照血清由美國(guó)Cayman Chemical 公司提供。聚苯乙烯塑料板( 酶標(biāo)板) 為96 孔，ELISA 檢測(cè)儀由美國(guó)Cayman Chemical 公司生產(chǎn)。

1.3 方法

1.3.1 血液標(biāo)本收集

分別于術(shù)前、術(shù)后1 天、術(shù)后3 天抽取患者的靜脈血5 mL。血液標(biāo)本立即放入無(wú)菌的乙二胺四乙酸試管中，并在4℃下以3500 r/min 的速度離心15 min,收集血清儲(chǔ)存于-80℃的冰箱中。

1.3.2 檢測(cè)方法

1.3.2.1 酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA) 檢測(cè)8-iso-PGF2ɑ嚴(yán)格按照試劑盒提供的檢測(cè)方法及步驟進(jìn)行檢測(cè)，其中標(biāo)準(zhǔn)品的配置按標(biāo)準(zhǔn)品: 稀釋液=1:1 進(jìn)行稀釋?zhuān)来芜M(jìn)行5 次；標(biāo)準(zhǔn)品和樣品均做3 孔，每孔加量為50 μL；所有反應(yīng)孔均加入鏈霉親和素-HRP 50 μL；用蒸餾水30 倍稀釋原液配制洗滌液進(jìn)行洗滌；洗滌后先后加入顯色劑A、顯色劑B 各50 μL進(jìn)行顯色；終止效果確認(rèn)：藍(lán)色轉(zhuǎn)為黃色。以450 nm波長(zhǎng)依次測(cè)量各孔的吸光度，數(shù)據(jù)分類(lèi)保存，最后收集整理數(shù)據(jù)，統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果。

1.3.2.2 TXB2測(cè)定 采用放射免疫分析法(RAI)進(jìn)行測(cè)定（按試劑盒標(biāo)準(zhǔn)流程進(jìn)行測(cè)定）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

用統(tǒng)計(jì)軟件 SPSS 22.0 對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)± 標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩兩比較采用兩獨(dú)立樣本均數(shù)t檢驗(yàn)或配對(duì)t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)；結(jié)果相關(guān)性分析采用 Pearson 相關(guān)性分析和多元逐步回歸分析，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同時(shí)間血清8-iso-PGF2ɑ 樣本、TXB2 樣本相關(guān)性的分析

術(shù)前- 術(shù)后1 天和術(shù)前- 術(shù)后3 天的8-iso-PGF2ɑ 相關(guān)性分別為0.024、-0.048，相關(guān)性均不強(qiáng)；術(shù)前- 術(shù)后1 天和術(shù)前- 術(shù)后3 天的TXB2相關(guān)性分別為0.031、-0.050，相關(guān)性均不強(qiáng)。術(shù)后1 天- 術(shù)后3 天的8-iso-PGF2ɑ 相關(guān)性為0.634，相關(guān)性較強(qiáng)；術(shù)后1 天- 術(shù)后3 天的TXB2相關(guān)性為0.715，相關(guān)性較強(qiáng)。詳見(jiàn)表1、2。

表1 不同時(shí)間血清8-iso-PGF2ɑ 樣本相關(guān)性的分析

表2 不同時(shí)間血清TXB2 樣本相關(guān)性的分析

2.2 不同時(shí)間血清8-iso-PGF2ɑ 和TXB2 水平相關(guān)性的分析

術(shù)前- 術(shù)后1 天、術(shù)前- 術(shù)后3 天、術(shù)后1 天-術(shù)后3 天血清8-iso-PGF2ɑ 和TXB2水平均呈正相關(guān)，P＜0.05，詳見(jiàn)表3。

表3 不同時(shí)間血清8-iso-PGF2ɑ 和TXB2 水平相關(guān)性的分析

2.3 不同時(shí)間血清8-iso-PGF2ɑ 和TXB2 平均水平的比較

與術(shù)前相比， 術(shù)后1 天和術(shù)后3 天的血清8-iso-PGF2ɑ、TXB2水平均較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與術(shù)后1 天相比，術(shù)后3 天的血清8-iso-PGF2ɑ、TXB2水平均較低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。詳見(jiàn)表4、5、6。

表4 不同時(shí)間血清8-iso-PGF2ɑ 和TXB2 平均水平的比較（ng/L，± s）

表4 不同時(shí)間血清8-iso-PGF2ɑ 和TXB2 平均水平的比較（ng/L，± s）

項(xiàng)目（n=40） 術(shù)前 術(shù)后1 天 術(shù)后3 天8-iso-PGF2ɑ TXB2 49.17±5.73 19.81±18.34 31.31±2.92 11.25±1.22 57.73±4.81 24.25±2.40

表5 血清中8-iso-PGF2ɑ 兩樣本比較t 檢驗(yàn)

表6 血清中TXB2 兩樣本比較t 檢驗(yàn)

3 討論

下肢I(xiàn)RI 分為缺血期、再灌注期兩個(gè)周期，隨著患者機(jī)體缺血導(dǎo)致組織缺血時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，受損組織內(nèi)三磷酸腺苷被消耗殆盡，并產(chǎn)生大量氧自由基及脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物，機(jī)體所產(chǎn)生的大量氧自由基不能被靜脈回流作用清除，微血管內(nèi)皮細(xì)胞被破壞，不但可引起局部肢體骨骼肌缺血、腫脹和壞死，而且還可影響機(jī)體各大系統(tǒng)，嚴(yán)重者甚至?xí)l(fā)生多器官功能衰竭，危及生命[7]。通過(guò)介入治療讓患者進(jìn)入再灌注期，產(chǎn)生的細(xì)胞激肽會(huì)促使血管內(nèi)皮產(chǎn)生氧自由基，氧自由基則會(huì)通過(guò)脂質(zhì)過(guò)氧化酶的序貫反應(yīng)損傷細(xì)胞膜，致鈉泵功能不全，加重肢體腫脹和缺血，氧自由基介導(dǎo)的細(xì)胞膜脂質(zhì)分子過(guò)氧化是IRI 的重要原因之一。研究[8]證實(shí)，在心肌缺血再灌注過(guò)程中, 氧化應(yīng)激可通過(guò)相關(guān)途徑生成大量血栓烷。血栓烷是血小板微粒體合成并釋放的生物活性物質(zhì), 具有促進(jìn)血管收縮和血小板聚集的作用。其代謝產(chǎn)物TXB2可間接反映組織器官的血供情況。血管內(nèi)皮損傷可導(dǎo)致前列環(huán)素合成酶生成減少,活性下降,此時(shí)TXB2增多可造成血小板聚集、血管收縮和血栓形成，從而導(dǎo)致組織器官缺血缺氧，造成損傷。8-iso-PGF2α 是細(xì)胞生物膜上花生四烯酸經(jīng)體內(nèi)自由基超氧化作用、非酶途徑經(jīng)β 裂解重組產(chǎn)生的前列腺素的衍生物，其從生成到代謝的整個(gè)過(guò)程不易受到藥物或其他因素的影響[9]。有研究指出，8-iso-PGF2α 作為脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物異前列腺素F2α的一種亞型，其水平反映了肢體IRI 脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的嚴(yán)重程度，能準(zhǔn)確地反映機(jī)體脂質(zhì)過(guò)氧化的狀態(tài)，可以作為判斷下肢I(xiàn)RI 的指標(biāo)，并可用于推測(cè)損傷程度。肢體出現(xiàn)血液再灌注后，導(dǎo)致氧自由基被大量釋放進(jìn)入血液，可能會(huì)引起8-iso-PGF2α 水平的改變。有研究[10]指出8-iso-PGF2α 的水平與血液高凝狀態(tài)有關(guān)。大量的研究證實(shí)，血清8-iso-PGF2α 水平可作為IRI 發(fā)生、發(fā)展及相關(guān)靶器官損傷的評(píng)價(jià)指標(biāo)，檢測(cè)8-iso-PGF2α 水平對(duì)IRI 的預(yù)防、診斷、治療、預(yù)后及病情評(píng)估有重要意義[10]。有研究指出，8-iso-PGF2α 是最理想的評(píng)價(jià)氧化應(yīng)激程度的生化指標(biāo)之一。自由基介導(dǎo)的細(xì)胞膜脂質(zhì)大分子過(guò)氧化是IRI 的重要原因之一。大量的研究[8-12]證實(shí)，血清中8-iso-PGF2α 的水平可作為IRI 相關(guān)靶器官損傷程度的評(píng)價(jià)指標(biāo)。因此，聯(lián)合檢測(cè)血清中IRI8-iso-PGF2ɑ 和TXB2的水平對(duì)IRI 的診治和預(yù)防具有重要的臨床意義。麻京豫等[8]對(duì)急性冠脈綜合征相關(guān)IRI 患者進(jìn)行了8-iso-PGF2ɑ 和TXB2檢測(cè)，結(jié)果顯示與正常對(duì)照組相比，患者組8-iso-PGF2ɑ 和TXB2的水平均較高，且其8-iso-PGF2ɑ 和TXB2的水平與病情嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，這與本研究的結(jié)論一致。本研究的結(jié)果顯示，與術(shù)前相比，術(shù)后1 天和術(shù)后3 天的血清8-iso-PGF2ɑ、TXB2水平均較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與術(shù)后1 天相比，術(shù)后3 天的血清8-iso-PGF2ɑ、TXB2水平均較低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。術(shù)后出現(xiàn)IRI 時(shí)（術(shù)后1 天）患者的血清8-iso-PGF2ɑ 和TXB2水平明顯升高，隨后（術(shù)后3 天）患者的血清8-iso-PGF2ɑ 和TXB2水平又有所下降，提示血清8-iso-PGF2ɑ 和TXB2水平可能與IRI 的嚴(yán)重程度有關(guān)。

綜上所述，血清8-iso-PGF2ɑ 和TXB2水平呈正相關(guān)，二者均為評(píng)估IRI 的潛在生物學(xué)指標(biāo)。從IRI 患者術(shù)后血清8-iso-PGF2ɑ 和TXB2水平的變化情況來(lái)看，其血清8-iso-PGF2ɑ 和TXB2水平可能與IRI 的嚴(yán)重程度有關(guān)。需要注意的是，本研究的樣本數(shù)量不夠大、樣本代表性欠佳，且未設(shè)置正常對(duì)照組，故血清8-iso-PGF2ɑ 和TXB2水平與下肢I(xiàn)RI 的具體關(guān)系還有待進(jìn)一步研究。