基于BDNF/TrkB/p-CREB信號通路探討血府逐瘀膠囊促進神經再生防治卒中后抑郁的作用及機制

樊薛津，金博文，楊秋怡，葛士寧，宋 紋，張 營，王躍飛，莊朋偉，張艷軍，尹清晟*，張密霞*

基于BDNF/TrkB/p-CREB信號通路探討血府逐瘀膠囊促進神經再生防治卒中后抑郁的作用及機制

樊薛津1，金博文1，楊秋怡1，葛士寧1，宋 紋2，張 營2，王躍飛1，莊朋偉1，張艷軍3, 4，尹清晟1*，張密霞1*

1. 天津中醫藥大學，天津 301617 2. 天津宏仁堂藥業有限公司，天津 301617 3. 天津中醫藥大學第一附屬醫院，天津 300381 4. 國家中醫針灸臨床醫學研究中心，天津 300381

探討血府逐瘀膠囊對卒中后抑郁（post-stroke depression，PSD）大鼠抑郁癥狀的改善作用，并基于神經再生關鍵通路腦源性神經營養因子（brain derived neurotrophic factor，BDNF）/酪氨酸激酶受體B（tyrosine kinase receptor，TrkB）/ 磷酸化環腺苷酸應答元件結合蛋白（phosphorylated cAMP response element-binding protein，p-CREB）探討其機制。采用短暫大腦中動脈梗塞（transient middle cerebral artery occlusion，tMCAO）復合慢性不可預知應激（chronic unpredictable mild stimulation，CUMS）方法復制PSD大鼠模型。大鼠隨機分為假手術組、模型組及血府逐瘀低、高劑量（0.43、0.86 g/kg）組和氟西汀（1.8 mg/kg）組，每組18只。連續給予藥物干預28 d，利用神經功能評分、糖水偏好實驗、曠場實驗、強迫游泳實驗考察血府逐瘀膠囊對PSD大鼠神經功能損傷以及抑郁癥狀的改善作用；高效液相色譜-電化學檢測法檢測額葉皮質及海馬神經遞質多巴胺（dopamine，DA）和5-羥色胺（5-hydroxytryptamine，5-HT）含量；免疫熒光染色檢測海馬5-溴脫氧尿嘧啶核苷（5-bromo-2-deoxyuridine，BrdU）、雙皮質素（doublecortin，DCX）和巢蛋白（neuroepithelial stem cell protein，Nestin）表達評價神經再生情況；Western blotting檢測海馬BDNF/TrkB/p-CREB蛋白表達。與假手術組比較，模型組大鼠神經功能評分顯著提高（＜0.001），糖水偏好率顯著下降（＜0.05），強迫游泳不動時間顯著增長（＜0.05）；前額葉皮質、海馬組織DA以及海馬組織5-TH含量明顯減少（＜0.05）；BrdU、DCX陽性細胞數量明顯降低（＜0.05、0.01），Nestin陽性細胞數量減少；海馬BDNF、TrkB、p-CREB表達顯著降低（＜0.05、0.01）。與模型組比較，血府逐瘀膠囊組神經功能評分顯著降低（＜0.01），糖水偏好率明顯升高（＜0.05），強迫游泳的不動時間明顯減少（＜0.05、0.01）；前額葉皮質和海馬DA、5-TH含量均顯著增加（＜0.05、0.01）；BrdU、Nestin、DCX陽性細胞數量明顯增加（＜0.05、0.01）；海馬BDNF表達有增加的趨勢，TrkB、p-CREB表達均明顯增加（＜0.05）。血府逐瘀膠囊可通過BDNF/TrkB/p-CREB通路促進神經再生進而發揮治療PSD作用。

血府逐瘀膠囊；卒中后抑郁；神經遞質；神經再生；BDNF/TrkB/p-CREB信號通路

卒中后抑郁（post-stroke depression，PSD）是腦血管疾病發生后較常見的精神障礙類并發癥。研究表明有近30%的患者會在卒中后5年內出現抑郁癥癥狀[1]，嚴重影響患者生活質量且給社會帶來了沉重經濟負擔。目前基于單胺遞質學說的抗抑郁藥是PSD一線治療藥物，但長期服用會誘發較為嚴重的安全性問題[2]。中醫認為PSD屬“郁證”范疇，病機為素體不足、氣滯血瘀，治法以活血化瘀、行氣止痛為主。血府逐瘀緣起于王清任的《醫林改錯》，具有活血化瘀、行氣止痛之功效。大量臨床研究表明血府逐瘀膠囊具有緩解PSD患者臨床抑郁癥狀、改善患者生活質量的作用[3-4]，但具體機制仍需探索。

神經再生障礙是抑郁癥的重要病理特征，促神經再生可減輕焦慮和抑郁樣行為。腦源性神經營養因子（brain derived neurotrophic factor，BDNF）是一類重要的神經營養因子，在調控神經元增殖、分化、成熟及促神經元再生方面發揮重要作用，是目前抑郁癥研究的核心因子[5]。BDNF表達受到包括環磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate，cAMP）反應元件結合蛋白（cAMP response element binding protein，CREB）在內的多種信號調控，且其活性需與酪氨酸激酶受體B（tyrosine kinase receptor，TrkB）受體結合[6-7]，BDNF/TrkB信號傳導的激活導致CREB的磷酸化。因此，本研究重點基于BDNF/TrkB/p-CREB信號介導的神經再生考察血府逐瘀膠囊改善PSD作用機制，以期為血府逐瘀方臨床應用提供實驗依據。

1 材料

1.1 動物

SPF級雄性Wistar大鼠90只，體質量270～300 g，購自北京維通利華生物科技有限公司，許可證號SCXK（京）2016-0006。動物飼養室調節燈光12 h晝夜交替，溫度（24±2）℃，相對濕度（35±5）%，自由進食飲水。動物實驗經天津中醫藥大學實驗動物倫理委員會批準（批準號TCM-LAEC2021271）。

1.2 藥品與試劑

血府逐瘀膠囊（0.4 g/粒，批號BL03223）由天津宏仁堂藥業有限公司提供；氟西汀（批號H20073985）購自山西仟源醫藥集團股份有限公司；多巴胺（dopamine，DA，批號D9520）、5-羥色胺（5-hydroxytryptamine，5-HT，批號SA5230）、尼氏染色試劑盒（甲基紫法，批號G1432）、DAPI（批號C0065）、抗熒光淬滅封片劑（批號S2110）、蘇木素-伊紅（HE）染色試劑盒（批號G1120）、驢血清（批號SL050）均購自北京Solarbio公司；巢蛋白（neuroepithelial stem cell protein，Nestin）抗體（批號bs-8203R）、雙皮質素（doublecortin，DCX）抗體（批號bs-20797R）購自北京博奧森生物技術有限公司；5-溴脫氧尿嘧啶核苷（5-bromo-2-deoxyuridine，BrdU）抗體（批號AB6326）、Alexa Fluor 488標記驢抗小鼠二抗（批號ab150105）、Alexa Fluor 647標記驢抗兔二抗（批號ab150075）購自英國Abcam公司；β-actin抗體（批號AP0060）購自Bioworld公司；BDNF抗體（批號PB9075）、TrkB抗體（批號PB0475）均購自武漢博士德生物有限公司；p-CREB抗體（批號AP0019）購自武漢愛博泰克生物科技有限公司；羊抗兔二抗（批號A0208）購自上海碧云天生物技術有限公司。

1.3 儀器

R500型通用型小動物麻醉機（深圳市瑞沃德生命科技有限公司）；Agilent 1260 Infinity II型高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；DM750型倒置熒光顯微鏡（德國Leica公司）；Spark酶標儀（瑞士Tecan公司）。

2 方法

2.1 PSD模型的復制

采用短暫大腦中動脈梗塞（transient middle cerebral artery occlusion，tMCAO）聯合慢性不可預見溫和應激法（chronic unpredictable mild stimulation，CUMS）進行造模[8-13]。大鼠經異氟烷麻醉后，分離頸部肌肉，暴露血管，分離右側頸總動脈、頸內動脈和頸外動脈。從右側頸內動脈插入線栓向前推進至大腦中動脈，插入線栓60 min后，緩慢拔除線栓，恢復供血。假手術組僅做頸外動脈結扎處理。術后第8天應激開始，28 d內隨機接受7種不同的應激方式：①24 h內大鼠禁食；②24 h內大鼠禁水；③晝夜顛倒；④潮濕墊料；⑤水平搖晃；⑥45°斜籠24 h；⑦4 ℃冰水游泳。每日1種，每1種出現4次且每種刺激不重復出現[14]。

2.2 動物分組和給藥

將大鼠隨機分為假手術組、模型組及血府逐瘀低、高劑量（0.43、0.86 g/kg，分別相當于1、2倍臨床等效劑量）組和氟西汀（1.8 mg/kg）組，每組18只。術后第8天開始應激并ig藥物，假手術組和模型組ig等體積蒸餾水，1次/d，連續28 d。術后經神經功能缺損評分進行重新分組，最后選取每組15只進行后續的實驗驗證。在tMCAO復合CUMS造模以及藥物治療過程中，共有9只大鼠死亡。

2.3 神經功能評分

于大鼠應激第28天，采用Longa神經功能評分[15]評定大鼠神經功能缺損。

2.4 行為學檢測

于大鼠開始應激后第29天，進行糖水偏好實驗、曠場實驗、強迫游泳實驗。

2.4.1 糖水偏好實驗 各組大鼠在應激后第29天進行糖水偏好實驗[16]，并計算糖水偏好率。

糖水偏好率＝糖水消耗量/(純水消耗量＋糖水消耗量)

2.4.2 曠場實驗 曠場實驗采用開口的觀察盒（100 cm×100 cm×40 cm）并用與大鼠毛色相反的顏色覆蓋滿內壁，將底部分為25等份的方塊。把大鼠置于觀察盒底的中央部分（50 cm×50 cm）適應1 min，然后開始測試，用攝像機記錄5 min內總距離和直立次數[17]。

2.4.3 強迫游泳實驗 強迫游泳實驗通過圓柱形透明Pyrex游泳筒完成，筒高40 cm，筒底部直徑20 cm，水深30 cm，水溫23～25 ℃，記錄6 min內大鼠靜止不動行為的時間評價大鼠的絕望行為[16,18]。

2.5 HPLC檢測大鼠前額葉皮質及海馬DA和5-HT含量

2.5.1 樣品制備 將各組大鼠麻醉，心臟灌流后，迅速斷頭取腦，放置在冰盒上，迅速剝離出腦組織，剝離出前額葉皮層、海馬。組織稱定質量后，以10 μL/mg比例加入0.1 mol/L高氯酸溶液，4 ℃、14 000 r/min離心20 min，取上清液，置于冰上備用。

2.5.2 對照品溶液的制備 精密稱取10 mg DA和10 mg 5-HT，分別添加高氯酸定容至10 mL，過0.22 μm微孔濾膜，取濾液備用。

2.5.3 色譜條件 Waters 反相C18色譜柱（150 mm×4.5 mm，5 μm）；流動相為10%乙腈-90%緩沖鹽溶液（含醋酸鈉0.041 mol/L、檸檬酸0.025 mol/L、辛烷磺酸鈉0.92 mmol/L、EDTA-2Na 0.001 2 mmol/L）；柱溫35 ℃；體積流量1 mL/min；進樣體積10 μL。

2.5.4 DA和5-HT含量測定 采用標準曲線回歸方程及相關系數進行含量計算。

2.6 血府逐瘀膠囊對PSD模型大鼠神經再生的影響

2.6.1 免疫熒光檢測新生神經元數量 行為學實驗結束后，各組大鼠麻醉后心臟灌流，迅速剝離大腦，4%多聚甲醛室溫固定24 h。將標本轉入10倍體積的30%蔗糖溶液，4 ℃脫水至組織沉底，OCT包埋，冷凍至OCT完全凝固，使用冷凍切片機切片。取冰凍切片室溫放置30 min，檸檬酸鹽緩沖液熱修復10 min，0.25% Triton X-100通透10 min，10%驢血清孵育30 min，分別滴加一抗BrdU（1∶200）、Nestin（1∶200）、DCX（1∶200），4 ℃孵育過夜，37 ℃復溫后，滴加熒光二抗（1∶1000），避光孵育2 h，DAPI孵育5 min，滴加抗熒光淬滅封片劑，蓋玻片封片，顯微鏡下觀察，采集圖像進行分析。

2.6.2 Western blotting檢測海馬BDNF、TrkB和p-CREB蛋白表達 取海馬組織30 mg，按20∶1的比例加入含有蛋白酶抑制劑的裂解液600 μL，振蕩研磨，冰上裂解30 min后，4 ℃、14 000 r/min離心10 min，取上清，BCA法測定樣品蛋白濃度。蛋白樣品經十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳，轉至PVDF膜，5%脫脂牛奶封閉2 h，分別加入兔源β-actin（1∶500）、BDNF（1∶1000）、TrkB（1∶1000）以及p-CREB（1∶1000）抗體，4 ℃孵育過夜，加入羊抗兔二抗（1∶1000）室溫孵育2 h，TBST洗膜5次，5 min/次。加入ECL化學發光顯影液顯影后，Image J軟件進行結果分析。

2.7 統計學分析

3 結果

3.1 血府逐瘀膠囊對PSD模型大鼠神經功能的影響

如圖1所示，在應激28 d后，與假手術組比較，模型組大鼠神經功能評分顯著升高（＜0.001），提示造模后大鼠存在神經功能損傷；與模型組比較，各給藥組大鼠神經功能評分均顯著降低（＜0.01），表明血府逐瘀膠囊具有改善PSD大鼠神經功能損傷的作用。

3.2 血府逐瘀膠囊對PSD模型大鼠抑郁樣癥狀的影響

為考察血府逐瘀膠囊對PSD大鼠抑郁樣癥狀的改善作用，采用糖水偏好、強迫游泳實驗、曠場實驗來考察PSD模型大鼠的抑郁狀態，糖水偏好率越高，游泳不動時間越短、直立次數越多、總距離越遠，則說明大鼠抑郁癥狀改善。如圖2所示，與假手術組比較，模型組大鼠糖水偏好率顯著下降（＜0.05），游泳不動時間顯著增長（＜0.05），活動總距離和直立次數有減少趨勢，表明動物出現明顯抑郁樣癥狀，PSD造模成功；與模型組比較，各給藥組大鼠糖水偏好率明顯升高（＜0.05），游泳不動時間均明顯減少（＜0.05、0.01），曠場運動總距離均有增加的趨勢，但無統計學差異。血府逐瘀膠囊低劑量組大鼠直立次數顯著增加（＜0.05），血府逐瘀膠囊高劑量組和氟西汀組大鼠直立次數有增加的趨勢，但無統計學差異。結果表明血府逐瘀膠囊具有改善PSD大鼠抑郁樣癥狀的作用。

與假手術組比較：*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001；與模型組比較：#P＜0.05 ##P＜0.01，下圖同

圖2 血府逐瘀膠囊對PSD模型大鼠行為學的影響(, n = 15)

3.3 血府逐瘀膠囊對PSD模型大鼠前額葉皮質及海馬神經遞質含量的影響

腦內單胺類神經遞質水平（如DA、5-HT）降低是抑郁癥主要病理特征，因此考察了血府逐瘀膠囊對PSD大鼠腦內神經遞質的影響。如圖3所示，與假手術組比較，模型組大鼠前額葉皮質DA含量和海馬DA、5-TH含量均明顯降低（＜0.05），前額葉皮質5-HT有降低趨勢；與模型組比較，血府逐瘀膠囊低劑量組和氟西汀組前額葉皮質DA、5-HT含量均顯著增加（＜0.05、0.01），血府逐瘀膠囊高劑量組和氟西汀組海馬DA含量均顯著增加（＜0.05），血府逐瘀膠囊低劑量組海馬5-HT含量顯著增加（＜0.05），表明血府逐瘀膠囊具有增加PSD大鼠腦內神經遞質含量的作用。

3.4 血府逐瘀膠囊對PSD模型大鼠神經再生的影響

神經再生障礙是抑郁癥的重要病理特征，促神經再生可減輕焦慮和抑郁樣行為。因此考察了血府逐瘀膠囊對PSD模型大鼠神經再生的影響。如圖4所示，與假手術組比較，模型組大鼠海馬中DCX、BrdU的陽性細胞數量顯著降低（＜0.05、0.01），Nestin的陽性細胞數量有減少趨勢；與模型組比較，血府逐瘀膠囊低劑量組BrdU、Nestin、DCX陽性細胞數量顯著增加（＜0.05、0.01），氟西汀組DCX陽性細胞數量顯著增加（＜0.05），Nestin和BrdU有所增加。結果表明血府逐瘀膠囊能夠促進PSD大鼠的海馬新生神經元數量增加。

圖3 血府逐瘀膠囊對PSD模型大鼠前額葉皮質(A) 及海馬(B) 中DA和5-HT含量的影響(, n = 10)

3.5 血府逐瘀膠囊對PSD模型大鼠海馬BDNF、TrkB和p-CREB蛋白表達的影響

BDNF的表達受到多種信號通路的調節，BDNF與TrkB受體結合后激活相關信號通路，使CREB磷酸化，從而調節BDNF的表達。如圖5所示，與假手術組比較，模型組大鼠海馬組織BDNF、TrkB和p-CREB蛋白表達水平均顯著降低（＜0.05、0.01）；與模型組比較，血府逐瘀膠囊低劑量組TrkB、p-CREB蛋白表達水平均顯著升高（＜0.05），BDNF表達有增加趨勢；氟西汀組p-CREB蛋白表達水平顯著升高（＜0.05），BDNF、TrkB表達有增加趨勢。結果表明血府逐瘀膠囊可通過BDNF/ TrkB/p-CREB通路對PSD大鼠起到治療作用。

圖5 血府逐瘀膠囊對PSD模型大鼠海馬組織BDNF、TrkB和p-CREB蛋白表達的影響(, n = 3)

4 討論

PSD是一種高發的卒中相關情緒障礙，癥狀包括情緒低落、快感缺乏、精力喪失、注意力下降、精神遲鈍、失眠或嗜睡和內疚等。這些情緒障礙對患者卒中后的預后產生負面影響，患者日常活動依賴性增加、認知較差、社交活動延遲、康復效率降低，降低患者生活質量，增加死亡率[19-21]。但抑郁癥狀在卒中幸存者中較為普遍，這與社會關系、健康程度和受教育程度具有一定相關性[22-23]。PSD對于中醫來說可稱之為“中風”和“郁癥”的合病。血府逐瘀湯方中君藥紅花善活血、散瘀以止痛，桃仁善破血、行滯而潤燥，紅花和桃仁相互配合，增強活血化瘀的力量。川芎善行氣活血、祛風止痛；赤芍善清熱涼血、散瘀止痛、活血化瘀止痛以助君藥；牛膝長于祛瘀通脈，引瘀血下行，3藥共為臣藥。生地黃涼血清熱，以除瘀熱；枳殼理氣寬中疏胸中氣滯；當歸養血活血潤燥，祛瘀生新不傷正；桔梗宣散肺氣，以利寬中理氣，并載藥上行，與枳殼配伍，升降相輔，開胸行氣；柴胡疏肝解郁、升舉清陽，共為佐藥。甘草調和諸藥又緩急止痛，其為使藥。本方活血行氣、祛瘀生新，既解血的瘀滯，又解氣的郁結，可作為通治一切血瘀氣滯的基礎方[24-26]，是活血理氣的代表方藥。血府逐瘀膠囊是經過現代制劑及加工工藝制成的中成藥，制劑工藝和藥效物質相對明確。

本課題組前期研究也發現血府逐瘀膠囊可以通過改善腸屏障功能而間接發揮腦保護防治PSD的藥效作用[27]，然而其腦內相關效應機制尚不清楚。本研究首先通過神經功能評分、行為學、神經遞質水平等確認了血府逐瘀膠囊防治PSD的藥效作用，發現血府逐瘀膠囊明顯改善了PSD大鼠的神經功能損傷，提高了PSD大鼠糖水偏好率，提升了其自主活動能力，明顯縮短了PSD大鼠的不動時間。“單胺假說”是抑郁癥的一個重要假說，它表明DA、5-HT和去甲腎上腺素在抑郁癥中起著關鍵作用[28]。本研究結果表明，PSD大鼠前額葉皮質以及海馬中DA和5-HT含量均降低，經過血府逐瘀膠囊治療后明顯地恢復，證明在血府逐瘀膠囊干預后可以增加PSD大鼠中神經遞質的含量。

BrdU在神經科學研究中經常被用作新分裂細胞的標志，被認為是鑒定神經再生的“金標準”方法[29]。Nestin是神經上皮干細胞蛋白，Nestin表達細胞經常出現在神經再生區域，并且在神經干細胞的自我更新和存活中具有重要作用[30-31]。DCX是遷移和分化神經元中包含的微管相關蛋白之一，在發育和成熟中樞神經系統的神經元前體中特異性表達，神經元前體細胞的遷移與DCX的表達有關，并且DCX在分化的神經元中表達，表明DCX在神經元可塑性、軸突生長或合成中都起到重要作用。因此，DCX經常被用作新生成神經元而非神經膠質細胞的標志[32-33]。為探究血府逐瘀膠囊在神經再生機制方向的治療作用，采用免疫熒光檢測BrdU、DCX和Nestin的表達，發現相較于PSD大鼠，血府逐瘀膠囊低劑量組以上蛋白表達均有增加，說明血府逐瘀膠囊干預后可增加PSD大鼠海馬新生神經元數量，為血府逐瘀膠囊治療PSD的神經再生機制探究奠定了基礎。

BDNF通過影響細胞分化、神經元發育、生長和存活、神經發生、突觸發生和突觸可塑性，在神經系統發育中起關鍵作用[34]。研究報道，BDNF水平降低與腦卒中后抑郁樣行為增加之間存在很強的相關性，腦卒中人類患者血清BDNF水平降低，因此，BDNF的表達變化在PSD的發生發展中可能起關鍵作用[35]。從樹突釋放的成熟BDNF可與特異性受體TrkB結合并激活TrkB受體，在神經元生長、成熟（分化）和維持中起到重要作用[36-37]。CREB是胚胎皮質神經元中BDNF誘導基因表達的重要調節因子，參與調節神經元生長發育、突觸可塑性和長期記憶形成，CREB磷酸化激活可抑制細胞凋亡并促進損傷后的細胞分化和修復[38]。CREB在BDNF/TrkB信號傳導被激活后被磷酸化，上調BDNF的表達[39]。這是一種目前廣泛認可與抑郁和抗抑郁樣反應有關的轉錄因子。BDNF/CREB信號被認為是細胞存活、突觸結構等許多神經元生物學過程中的關鍵信號[40]。本研究通過Western blotting檢測海馬BDNF、TrkB、p-CREB蛋白的表達，給予血府逐瘀膠囊干預后發現，海馬中BDNF、TrkB、p-CREB蛋白的表達相較于模型組大鼠明顯升高，表明血府逐瘀膠囊可通過BDNF/TrkB/p-CREB通路發揮對PSD的治療作用。

綜上，本研究證實了血府逐瘀膠囊對PSD的潛在治療作用。并且發現其可通過BDNF/TrkB/p-CREB通路促進神經再生，進而發揮防治PSD的作用。本研究對血府逐瘀膠囊的現代研究和臨床合理用藥具有一定參考價值，并為進一步深入探究血府逐瘀膠囊防治PSD的作用機制提供線索。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Effect and mechanism of Xuefu Zhuyu Capsule on promoting nerve regeneration and preventing post-stroke depression based on BDNF/TrkB/p-CREB signaling pathway

FAN Xue-jin1, JIN Bo-wen1, YANG Qiu-yi1, GE Shi-ning1, SONG Wen2, ZHANG Ying2, WANG Yue-fei1, ZHUANG Peng-wei1, ZHANG Yan-jun3, 4, YIN Qing-sheng1, ZHANG Mi-xia1

1. Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, Tianjin 301617, China 2. Tinjin Hong Ren Tang Pharmaceutical Co., Ltd., Tianjin 301617, China 3. First Teaching Hospital of Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, Tianjin 300381, China 4. National Clinical Research Center for Chinese Medicine Acupuncture and Moxibustion, Tianjin 300381, China

To explore the improvement effect of Xuefu Zhuyu Capsule (血府逐瘀膠囊) on depression symptoms in post-stroke depression (PSD) rats, and explore its mechanism based on the key pathway of neural regeneration [brain derived neurotrophic factor (BDNF)/tyrosine kinase receptor B (TrkB)/phosphorylated cAMP response element binding protein (p-CREB)].The rats model of PSD was established by transient middle cerebral artery occlusion (tMCAO) and chronic unpredictable mild stimulation (CUMS). Rats were randomly divided into sham group, model group, Xuefu Zhuyu Capsule low-and high-dose (0.43, 0.86 g/kg) groups and fluoxetine (1.8 mg/kg) group, with 18 rats in each group. Continuous medication intervention was given for 28 d, and the improvement effect of Xuefu Zhuyu Capsule on neurological function damage and depressive symptoms in PSD rats was investigated by neurological function scores, sugar preference experiments, open field experiments and forced swimming experiments; High performance liquid chromatography-electrochemical detection method was used to detect the contents of neurotransmitters dopamine (DA) and 5-hydroxytryptamine (5-HT) in frontal cortex and hippocampus; Immunofluorescence staining was used to detect the expressions of 5-bromo-2-deoxyuridine (BrdU), doublecortin (DCX) and neuroepithelial stem cell protein (Nestin) in hippocampus to evaluate nerve regeneration; Western blotting was used to detect the expressions of BDNF/TrkB/p-CREB protein.Compared with sham group, neurological deficit score of rats in model group was significantly increased (< 0.001), the sugar water preference rate was significantly decreased (< 0.05), and duration of forced swimming immobility was significantly increased (< 0.05). The levels of DA in prefrontal cortex and hippocampus and 5-TH in hippocampus were significantly reduced (< 0.05). The number of BrdU and DCX positive cells were significantly decreased (< 0.05, 0.01), while the number of Nestin positive cells was decreased. The expressions of BDNF, TrkB and p-CREB in hippocampus were significantly reduced (< 0.05, 0.01). Compared with model group, neurological deficit score in Xuefu Zhuyu Capsule group was significantly reduced (< 0.01), the sugar water preference rate was significantly increased (< 0.05), and the immobility time of forced swimming was significantly reduced (< 0.05, 0.01). The levels of DA and 5-HT in prefrontal cortex and hippocampus were significantly increased (< 0.05, 0.01). The number of BrdU, Nestin and DCX positive cells were significantly increased (< 0.05, 0.01). The expression of BDNF in hippocampus showed an increasing trend, and the expressions of TrkB and p-CREB were significantly increased (< 0.05).Xuefu Zhuyu Capsule can promote nerve regeneration through BDNF/TrkB/p-CREB pathway and thus exert therapeutic effects on PSD.

Xuefu Zhuyu Capsule; post-stroke depression; neurotransmitter; neuronal regeneration; BDNF/TrkB/p-CREB signaling pathway

R285.5

A

0253 - 2670(2023)20 - 6704 - 08

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.20.014

2023-06-19

國家自然科學基金資助項目（81873192）

樊薛津（2000—），女，漢族，碩士研究生，從事中藥藥理學研究。E-mail: 13302001628@163.com

通信作者：張密霞（1976—），女，漢族，高級實驗師，博士，主要從事中藥藥理學研究。Email: mimimixia@sina.com

尹清晟（1994—），男，漢族，助理研究員，博士，主要從事中藥藥理學研究。Email: carrysable@163.com

[責任編輯 李亞楠]