拉薩大黃中曲札茋苷的提取工藝研究

周劍 方芳 劉建文 付彬彬 龔云麒 劉軍鋒 （昆藥集團股份有限公司 昆明 650100）

拉薩大黃Rheum lhasaenseA. J. Li et P. K. Haiao屬于亞大黃，是傳統藏藥［1］。《新修晶珠本草》中記載：“亞大黃，苦、澀、銳、寒，清腑熱，瀉疫癘、消腫、愈瘡。”具有治療腑熱、膽熱、腹痛、便秘、傷口不愈等作用［2］。拉薩大黃主要分布在中國陜西、四川、湖北、貴州、云南、河南等地［3］。

白皮杉醇-3'-O-β-D- 吡喃葡萄糖苷（Piceatannol-3'-O-β-D-glucopyranoside，PG），又名曲札茋苷，是拉薩大黃主要有效成分，是植物體內產生的天然二苯乙烯類物質，具有抗炎［4］、抗腫瘤［5］、保護心血管［6］等作用。傳統提取方法有煎煮法、滲濾法、蒸餾法、回流法［7］。目前對曲札茋苷的提取工藝研究較少，本實驗采用單因素實驗與正交試驗相結合的方式，以曲札茋苷提取轉移率為考察指標，對曲札茋苷的提取工藝參數進行優化，為拉薩大黃的工業化提取提供參考，也為曲札茋苷的進一步研究提供基礎。

1 儀器與材料

1.1 儀器

高效液相色譜儀（島津LC-2030）；電子天平（梅特勒-托利多公司，XSE205DU）；電熱套、循環冷卻水真空泵(鞏義市予華儀器有限公司) ；旋轉蒸發器（瑞士Buchi，R-3）。

“老先生，我已經看了核磁共振結果了，您看這張圖，白色的是椎管，可以看到脊髓和馬尾神經都受到了壓迫，基本可以確診為腰椎管狹窄癥了。咱們啊，先保守治療三個月，看看效果如何，如果效果不佳，就得考慮手術治療了。當然，如果這期間出現了下肢肌肉力量的減退，也是手術治療的絕對適應癥。因為肌力下降以后如果不及時手術，神經長時間受壓迫，肌力恢復的可能性就比較小了。”

1.2 原料及對照品

拉薩大黃干燥根，產自西藏自治區，2～3 年生拉薩大黃的根部，經中科院昆明植物所鑒定為蓼科植物拉薩大黃Rheum lhasaenseA. J. Li et P. K. Haiao，批號20110505。曲札茋苷標準品（批號20140104，昆藥集團股份有限公司藥物研究院自制）。

2 方法

2.1 對照品溶液制備

精密稱取曲札茋苷對照品19.8 mg，用甲醇定容于100 mL容量瓶中，取對照品溶液0.25、0.5、1、2、2、1、2、5 mL 分別置100、100、100、50、25、10、10、10 mL 量瓶中，加甲醇稀釋成一系列濃度梯度的溶液，分別進行HPLC 檢測，以峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標繪制標準曲線。

2.2 色譜條件

提取溶劑、提取時間、料液比是影響曲札茋苷提取率的重要因素，不同因素對提取率的影響不同，通過單因素實驗考察每個因素的重要性，確定各因素水平的設定范圍。

清代的《紅樓夢》更是為后人所稱道，無論是藝術上，還是思想上都成為古典小說的經典之作，魯迅在《中國小說的歷史變遷》中就講：“自有《紅樓夢》出來以后，傳統的思想和寫法都打破了。”其中，涉及到愛情、婚姻方面，曹雪芹講述了寶、黛、釵的愛情婚姻故事，以寶玉、黛玉追求的“木石前盟”與賈薛兩家期望的“金玉良緣”相對抗，也演繹了寶玉、黛玉這一對才子佳人反對封建禮教，追求自由愛情的故事。

表1 洗脫梯度

2.3 提取轉移率計算

測定提取時間對曲札茋苷轉移率的影響，結果見圖3。結果顯示，在2 h 以內，曲札茋苷提取轉移率逐漸升高，2 h 時達到最大值，可以看出提取時間對曲札茋苷的提取影響較大，但在2 h 以后，轉移率變化差別不大。綜合考慮生產需求，確定提取2 h 為最佳提取時間。

式中：C 為提取液中曲札茋苷的濃度，V 為提取液的體積，M 為拉薩大黃藥材重量，N 為藥材中曲札茋苷含量

2.4.5 溶劑用量對曲札茋苷轉移率及含量的影響 精密稱取拉薩大黃藥材粉末50 g，分別以5、6、7、8 倍量藥材的95%乙醇回流提取3 次，每次提取2 h，合并提取液，減壓濃縮，定容至250 mL，測定曲札茋苷的含量，計算提取轉移率。

2.4 曲札茋苷提取工藝單因素實驗法考察

2.4.1 提取溶劑對曲札茋苷轉移率及含量的影響 精密稱取拉薩大黃藥材粉末50 g，分別加入6倍量藥材的水、50%乙醇、95%乙醇回流提取3 次，每次2 h，合并提取液，減壓濃縮，定容至250 mL，測定曲札茋苷的含量，計算提取轉移率。

2.4.2 提取方法對曲札茋苷轉移率及含量的影響 精密稱取拉薩大黃藥材粉末50 g，加入8 倍量藥材的95%乙醇，分別采用熱回流提取、超聲波提取、冷浸進行提取3 次，每次2 h。合并提取液，減壓濃縮，定容至250 mL，測定曲札茋苷的含量，計算提取轉移率。

2.4.3 提取時間對曲札茋苷轉移率及含量的影響 精密稱取拉薩大黃藥材粉末50 g，加入8 倍量藥材的95%乙醇回流提取3 次，每次提取時間分別為1、2、3、4 h，合并提取液，減壓濃縮，定容至250 mL，測定曲札茋苷的含量，計算提取轉移率。

2.4.4 提取次數對曲札茋苷轉移率及含量的影響 精密稱取拉薩大黃藥材粉末50 g，以8 倍量藥材的95%乙醇回流提取2 h，分別提取2、3、4、5 次，合并提取液，減壓濃縮，定容至250 mL，測定曲札茋苷的含量，計算提取轉移率。

解法4 直接求出三角形和梯形的面積，從而直接得出兩者的面積比.此種方法沒有用到問題1的結論，并且需要設出邊長，雖然計算過程較復雜，但是解題思路直接明了.

根據產權特性，王名（2002年）首次提出“公共財產”和“公益產權”的概念。其中，公益財產是有別于國有資產、集體資產的，基于公益捐贈而形成的社會公共財產；公益產權是公益財產的權屬關系，以基金會為例，捐贈行為一旦成立，就形成“三權分離”的特殊產權形式：委托人享有對捐贈財產的委托權；受托人承擔對受贈財產的受托責任；受益人享有對受贈財產的最終受益權。王名（2013）進一步闡釋了公益產權的本質特征在于“三權分離”以及由此帶來公益財產的所有者缺位、使用權受限、無自由轉讓權等特征。

2.5 曲札茋苷提取工藝正交試驗

以提取轉移率為指標，采用熱回流提取法，分別對溶劑用量（A）、提取時間（B）、提取次數（C）3 個因素進行考查，根據單因素實驗結果，每因素選取3 個水平，按L9（33）進行正交試驗，影響因素及水平見表2。

測定不同提取溶劑對曲札茋苷轉移率及含量的影響，結果見圖1。結果顯示，隨著乙醇濃度的增加，曲札茋苷提取轉移率逐漸升高，當采用95%乙醇提取時，曲札茋苷的轉移率基本達到了最高值，從經濟性方面考慮，采用95%乙醇是最合理的，既能達到最大的轉移率，也能解決溶劑回收的問題，從而降低生產的經濟成本。

表2 影響因素水平

3 結果

以十八烷基鍵合硅膠為填充劑，以水為流動相A，乙腈為流動相 B，按表1 中的梯度洗脫，流速為1 mL /min，柱溫為30℃，檢測波長為319 nm，進樣體積20 μL。理論塔板數按曲札茋苷峰計算應不低于2 000。

3.1 標準曲線

測定不同提取溶劑對曲札茋苷轉移率的影響，結果見圖2。結果顯示，熱回流提取法提取曲札茋苷轉移率達到了97.40%，效果最佳。此外，從實際生產條件來講，最終確定熱回流進行提取。

3.2 提取溶劑對曲札茋苷轉移率的影響

圖8的橫軸、縱軸分別代表訓練數據集中目標框的寬、高。從圖8中可以看出訓練集中車輛目標框的寬與高值近似,且小目標居多。

圖1 提取溶劑對曲札茋苷轉移率的影響

3.3 提取方法對曲札茋苷轉移率及含量的影響

以對照品的濃度（μg/mL）為橫坐標，以峰面積的平均值為縱坐標進行線性回歸計算，得到線性回歸方程：Y=43.164X+2.756 1，r=0.999 9（n=9），且曲札茋苷在0.495～198 μg/mL 線性關系良好。

圖2 提取方法對曲札茋苷轉移率的影響

3.4 提取時間對曲札茋苷轉移率及含量的影響

提取轉移率（%）=（C×V）/（M×N）×100%

圖3 提取時間對曲札茋苷轉移率的影響

3.5 提取次數對曲札茋苷轉移率及含量的影響

測定提取次數對曲札茋苷轉移率的影響，結果見圖4。結果顯示，隨著提取次數的增加，曲札茋苷提取轉移率逐漸升高，在提取5 次時轉移率最大，可以看出提取次數對曲札茋苷的提取影響較大。綜合考慮生產需求，提取3 次為最佳提取次數。

我們取{O;e1,e2,e3}為仿射坐標系的一組基.記c=e1×e2并設c=xe1+ye2+ze3,則

圖4 提取次數對曲札茋苷轉移率的影響

3.6 溶劑用量對曲札茋苷轉移率及含量的影響

測定溶劑用量對曲札茋苷轉移率的影響，結果見圖5。結果顯示，隨著溶劑用量的增加，曲札茋苷的轉移率逐漸增加，當溶劑用量為7 倍時，曲札茋苷轉移率基本達到了最大值，隨后增長緩慢，考慮使用7 倍溶劑作為最佳溶劑用量。

圖5 溶劑用量對曲札茋苷轉移率的影響

3.7 正交試驗結果與分析

以曲札茋苷轉移率為指標，通過極差R 和均值K 的比較，優化曲札茋苷的最佳提取工藝，結果見表3。結果顯示，以曲札茋苷轉移率為指標，極值最大的是5.913，可以看出提取工藝中主要的影響因素是溶劑用量（A），各因素影響順序是A＞C＞B，方差分析顯示無顯著性影響。經過正交試驗設計可知，最佳提取工藝A3B3C3。即溶劑用量為8 倍，提取時間為3 h，提取次數為4 次。

隨著數據科學的深入發展，歐美等眾多發達國家都意識到作為國家戰略資產的數據的重要性，分別發布了大數據發展戰略。美國于2012年頒布了《大數據研究和發展計劃》，包括約 150余個項目類別，計劃項目涵蓋國防、衛生、能源等諸多領域。我國也把大數據技術也提到了國家的戰略發展日程。2013年，國內多位院士聯合建議設立國家專項，開展大數據技術研究。事實上，大數據技術已經應用在互聯網、商業智能、金融業以及醫療、零售等行業，并對社會、經濟產生了巨大的影響[5]。

表3 正交實驗表

表4 方差分析表

3.8 驗證實驗

分別稱取3 份拉薩大黃粗粉2 kg，加入8 倍體積的95%乙醇，加熱回流提取4 次，每次3 h，合并濾液，減壓濃縮，測定曲札茋苷的含量，計算提取轉移率分別為97.12%，96.20%，97.54%，平均為96.95%，RSD值為0.71%，表明工藝具有良好的穩定性。

4 討論

本實驗以拉薩大黃為原料，研究了曲札茋苷的提取工藝。分析曲札茋苷轉移率的極差R 和均值K，提取次數、溶劑用量對曲札茋苷轉移率的影響較顯著。綜合考慮采用加8 倍量95%乙醇，提取4 次，每次3 h。驗證試驗結果可見小試最佳的工藝一定程度適合于生產工藝，為中試提供了相應的數據支持，該提取工藝為后續的生產及中藥材的開發利用提供了一定的借鑒意義。