甲狀腺腫瘤患者生化免疫檢驗中應用化學發光免疫檢驗法技術的診斷價值

吳茂春 劉 敏

（贛州市會昌縣人民醫院，江西 會昌 342600）

甲狀腺腫瘤發病率在世界范圍內居第9位，在中國腫瘤人群中發病率居第7位[1]。來自中國的腫瘤數據顯示，2015年全國范圍內新發惡性腫瘤392.9萬例，其中TC為20.1萬例，年齡標準化發病率為10.44/10萬，呈明顯上升趨勢[2]。在中國女性人群中，甲狀腺腫瘤的發病率在15～19歲時快速上升，并在45～54歲年齡階段達到高峰[3]。近年來，甲狀腺腫瘤在世界范圍內的發病率快速增長，其中惡性腫瘤中甲狀腺乳頭狀癌（papillary thyroid carcinoma，PTC）占比最大和增長最快，女性甲狀腺腫瘤發病率明顯高于男性，且發病年齡存在年輕化趨勢[4]。2018年，國家統計數據顯示全年新發甲狀腺癌（thyroid carcinoma，TC）為567 233例，約占新發癌癥的3.1%[5]。甲狀腺是人體內分泌器官之一，受多種因素影響，甲狀腺功能出現異常的概率較高，可引起甲狀腺炎、甲狀腺功能亢進、甲狀腺功能減退等[6]。當前臨床上可通過血清學檢測分析甲狀腺功能相關標志物水平，據此判斷檢測者甲狀腺功能狀態[7]。化學發光免疫檢驗法技術近年來得到發展，在諸多疾病診斷中發揮著重要的作用。本研究旨在探究該技術應用于甲狀腺功能生化檢驗中效果，拓展甲狀腺功能檢測方法。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2021年11月至2022年12月于我院就診的甲狀腺腫瘤患者94例為研究對象，所有患者均采用放射性免疫檢驗法技術檢驗、化學發光免疫檢驗法技術檢驗。患者分布情況，男患者11例，女患者83例，年齡23～61歲，平均年齡（38.69±2.78）歲?；疾r間最長5年，最短6個月，平均患病時間（2.56±1.42）年。本研究經本院倫理委員會批準。

1.2 納入與排除標準 納入標準：①所有患者自愿入組，對本研究知情同意。②年齡均在61歲以下。③臨床資料均完整。排除標準：①語言表達不清，且患有精神類疾病的患者。②對本次研究依從性不高的患者。③同時參與其余研究的患者。④妊娠期、哺乳期女性。⑤患有心腦腎等重大器官性疾病的患者。⑥患有惡性腫瘤性疾病的患者。

1.3 方法 ①采血：所有患者取晨起空腹靜脈血3 mL，采血后將血液標本放置在室溫（18～25 ℃）下，后進行離心處理（離心半徑7.95 cm，3 000 r/min，10 min），分離血清備檢。②放射性免疫檢驗法技術檢驗：選用GC-1200型智能放免γ測量儀，利用伯樂提供的質控品在檢測前進行質控，按照說明書進行血清標本測定。③化學發光免疫檢驗法技術檢驗：儀器選擇免疫分析儀及配套化學發光試劑盒（深圳新產業生物醫學工程股份有限公司，型號MAGLUMI-4000型），嚴格按照使用說明書完成檢驗，檢驗時間不低于4 h。

1.4 觀察指標 觀察放射性免疫檢驗法技術檢驗、化學發光免疫檢驗法技術檢驗甲狀腺功能檢查結果的差異，測定抗甲狀腺過氧化物酶抗體（anti thyroid peroxidase antibody，TPOAB）、抗甲狀腺球蛋白抗體（anti-thyroglobulin antibodies，TGAB）、甲狀腺激素（thyroid hormone，TSH）、游離三碘甲狀腺原氨酸（free triiodothyronine，FT3）、游離四碘甲狀腺原氨酸（free tetraiodothyronine，FT4）水平，統計兩種方式甲狀腺功能異常檢出率。以病理診斷結果為金標準分析兩種檢測方法的診斷效能?；瘜W發光免疫檢驗法檢測時甲狀腺球蛋白正常范圍為11.45～20.25 ng/mL；放射性免疫檢驗法檢測時甲狀腺球蛋白正常范圍為0.73～84 ng/mL。診斷準確度=真陽性與真陰性例數之和/總例數×100%；敏感度=真陽性例數/真陽性與假陰性例數之和×100%；特異度=真陰性例數/真陰性與假陽性例數之和×100%。

1.5 統計學方法 選擇SPSS 24.0軟件為統計工具。符合正態分布的TPOAB、FT4、TSH等計量資料以表示、組間對比行t檢驗。甲狀腺功能異常檢出率、診斷準確度、靈敏度及特異度等計數資料以n（%）表示、組間對比行χ2檢驗；P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩種測定方式甲狀腺功能檢查結果比較 放射性免疫檢驗法、化學發光免疫檢驗法兩種方式比較TPOAB、TGAB水平，組間數據差異無統計學意義（P＞0.05）；化學發光免疫檢驗法TSH、FT3、FT4水平高于放射性免疫檢驗法，組間差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩種測定方式甲狀腺功能檢查結果比較（）

表1 兩種測定方式甲狀腺功能檢查結果比較（）

2.2 兩種方法異常檢出率對比 化學發光免疫檢驗法甲狀腺功能異常檢出率98.94%（93/94），放射性免疫檢驗法甲狀腺功能異常檢出率91.49%（86/94），兩種方式比較，化學發光免疫檢驗法更高，差異有統計學意義（χ2=5.718，P=0.017）。

2.3 兩種診斷方式診斷效能 與金標準對比，放射性免疫檢驗法檢驗精準度為75.53%，檢驗靈敏度為70.83%，檢驗特異度為78.57%；化學發光免疫檢驗精準度為94.68%，檢驗靈敏度為91.67%，檢驗特異度為97.62%?；瘜W發光免疫檢驗法對于甲狀腺腫瘤的診斷準確度、靈敏度及特異度均較放射性免疫檢驗法高（P＜0.05）。

3 討論

甲狀腺疾病是內分泌科臨床常見病，臨床發病率較高，女性多于男性，在發病初期的臨床表現不明顯，極易被忽視，一旦確診，病情較重，嚴重影響患者正常生活與身體健康。因此，及早診斷與治療對甲狀腺疾病患者而言顯得尤為重要。甲狀腺作為分泌器官，在維持正常內分泌代謝功能、妊娠等方面發揮著積極的作用，當甲狀腺功能出現異常時，會增加對個體的損害，還可能引起其他器官病變。甲狀腺癌常見的癥狀是頸部有腫塊，且腫塊在頸部的生長速度比較快[8]。頸部包塊會隨著吞咽動作上下移動，頸部淋巴結也會腫大。部分患者會出現呼吸和吞咽比較困難或者持續喘息、聲音沙啞等癥狀，或出現頻繁咳嗽。也有部分患者沒有明顯癥狀，只有在常規檢查時會檢查出腫塊或結節。在發病中期出現的癥狀是進食有哽噎感、吞咽不適、胸口憋悶不適，主要是腫瘤壓迫所致。此外，還會發生腫瘤侵犯的改變，如聲音沙啞，音調也發生改變。某些特殊的患者會出現手腳麻木和抽搐的癥狀。部分患者會出現甲狀腺癌癥綜合征，癥狀表現在腹瀉、消瘦、心悸、面部潮紅等。在發病晚期的癥狀是頸部包塊較硬，聲嘶嗆咳，甚至呼吸窘迫、出血等威脅生命的癥狀，且癌細胞會轉移到身體其他器官，出現相應癥狀。甲狀腺癌癥是在生活常見的一種惡性腫瘤，但是惡性程度不高，治愈率比較高，患者的生存期相對其他惡性腫瘤較長。甲狀腺癌在發病早期進行確診，且早治療是可以治愈的。甲狀腺癌表現的形狀是很不規律的，邊界很模糊，結節的內部回聲沒有規律，不均勻，出現粗大或微型鈣化的情況。甲狀腺腫瘤發病原因[9]：①放射線照射頸部會引起甲狀腺癌的發生，特別是兒童、嬰兒對放射線尤為敏感。②碘的過量食用或缺乏，造成甲狀腺功能紊亂，分泌過多的甲狀腺素，從而引發甲狀腺癌變。③甲狀腺囊腫、腺瘤、良性腫瘤手術后，在做病理檢查時發現了一種隱性腫瘤，可能與甲狀腺癌有關，有待醫學進一步證實。④受遺傳基因的影響，患有甲狀腺癌家族的發病率明顯高于普通家族。該疾病為顯性的染色體遺傳疾病。⑤甲狀腺癌的發生很有可能與致癌基因的激活、抑癌基因的失活、突變有關系，一般會引發甲狀腺癌。

早期甲狀腺腫瘤一般不會有明顯的征兆，診斷較為困難。隨著近年來大規模健康體檢工作的開展，甲狀腺結節可通過頸部超聲檢測。目前，CT、MRI、超聲等診斷方法均能達到較好的診斷效果，而MRI、CT的診斷準確率較高，但由于成本較高且難以重復使用，因此不能被患者所接受[10]。近年的臨床研究發現，生化免疫檢驗應用在甲狀腺腫瘤診斷中有著較大優勢，化學發光免疫檢驗法技術為其中一種有效方法，該方法可以借助化學發光劑，給予抗原和抗體標記，并通過磁場分離法開展準確分析與沉淀，從而明確診斷結果[11]。該方法可以有效彌補放射免疫測量方法的不足，在腫瘤標志物以及病毒等監測方面有著較高準確度。通過分析血清中TPOAB、TGAB、TSH、FT3、FT4等水平，可幫助臨床醫師判斷患者的甲狀腺功能。以往測定甲狀腺功能采用放射性免疫技術，此種方法通過放射性核素標記抗體或抗原結合被測抗原或抗體形成抗原體復合物，測定抗原抗體復合物濃度，了解甲狀腺功能受損情況。化學發光是以發光物質代替放射性核素，在反應體系中發光物質在堿性介質中氧化時釋放大量自由能，產生激發態的中間體，該激發態的中間體由最低振動能級回到穩定的基態，各個振動能級時產生輻射，同時產生能量，多余的能量即為發射光子，從而產生發光現象。利用發光信號的測量儀器，分析接收光量子的產量，通過計算機系統轉換成被測甲狀腺物質的濃度單位?；瘜W發光免疫檢驗法技術較之放射性免疫檢驗法技術檢驗靈敏度高、線性范圍寬，無放射性污染，且能提高甲狀腺功能異常的檢出率。在自然環境下，化學發光原理進行檢驗，可靈敏檢驗出患者的病因。本研究發現，化學發光免疫方法的失誤率不高，遠低于放射免疫方法，靈敏度較高，不僅能夠較好地對甲狀腺腫瘤疾病進行檢測，還可以使用到其余生化科學醫療技術中，對提升醫療水平具有重要作用，對免疫學的發展前景，更是有著不可估量的意義?？傊?，化學發光免疫檢驗法方法，在生化檢驗中的使用，可明顯提升疾病診斷精確率，臨床使用比較廣泛，對更好滿足臨床疾病診斷，意義重大。

本研究結果表明，放射性免疫檢驗法技術檢驗、化學發光免疫檢驗法技術檢驗TPOAB、TGAB水平差異無統計學意義（P＞0.05）；化學發光免疫檢驗法TSH、FT3、FT4水平較放射性免疫檢驗法高（P＜0.05）；化學發光免疫檢驗法更高，98.94%（93/94）vs.91.49%（86/94），差異有統計學意義（P＜0.05）。與金標準對比，化學發光免疫檢驗法對于甲狀腺腫瘤的診斷準確度、靈敏度及特異度均較放射性免疫檢驗法高（94.68%、91.67%、97.62%vs.75.53%、70.83%、78.57%），P＜0.05。本次研究中使用化學免疫分析法進行檢測，化學免疫分析方法與其余方法相比，比較簡單、實用?；瘜W發光免疫檢驗法是根據抗原與抗體特異度結合的原理，使用特殊標記技術對組織或細胞中的特異度抗原或抗體進行定性檢測的一種檢測技術。化學發光免疫檢驗法具有特異度強、靈敏度高、操作步驟簡單的特點，在病理診斷工作中應用廣泛。采用該項檢查技術不僅提高了病理診斷的準確性，而且在分析腫瘤起源、確定腫瘤性質、指導后續治療等方面都發揮了重要作用。

化學發光免疫檢驗法具有以下價值[12]：①發現有利于確定病原體與腫瘤的關系。化學發光免疫檢驗法可以應用于研究病原體引起癌癥的機制，該檢測方法在發現癌癥發生原因工作中有著重要意義。如在對乙肝病毒進行化學發光免疫檢驗法時，通過使用HBsAg單克隆抗體與多克隆抗體，還有已經被生物素標記過的HBVDNA探針，可檢出標志物。②有利于確定腫瘤的發生起源。免疫組化檢查技術在研究腫瘤來源的過程中也起到了關鍵作用，通過開展化學發光免疫檢驗法，可以分析在各種腫瘤細胞中表達的特異度抗體，有助于人們更加明確地發現腫瘤的真正起源，如淋巴結組織內存在大量惡性腫瘤細胞，利用免疫組化就能夠有助于人們判斷腫瘤細胞起源。③有利于鑒別診斷腫瘤的發展位置。免疫組織化學檢驗還普遍應用于對腫瘤中的抗原進行檢查，如通過檢查甲胎蛋白來判別人體肝臟、卵巢、睪丸等部位是否出現腫瘤細胞。若消化道、卵巢、子宮、乳房和膀胱等部位出現惡性腫瘤，那么這些部位會廣泛分布有癌胚抗原，雖然該抗原不具備特異度，但是在一定的條件下依舊可以清晰識別出來，其表達情況可直接反映出腫瘤的惡化程度。除此之外，在前列腺腫瘤診斷過程中，已知前列腺酸性磷酸酶與前列腺腫瘤的分化程度呈現正相關，因此通過對其進行檢測對于研究前列腺腫瘤的發展情況具有重要意義。④有利于區分分化差的腫瘤。在對腫瘤疾病進行治療的過程中，其細胞分化程度往往不同，單靠光鏡無法具體判斷之間的差別，因此正確分別出腫瘤和肉瘤是臨床醫師亟待解決的問題。通過利用免疫組化的標記細胞角蛋白、波形蛋白、S-100蛋白、白細胞共同抗原（CD45RB）等就可以進行區分。對上皮組織細胞進行檢查后，若表現為細胞角蛋白陽性，則可以確定為惡性腫瘤，若檢測結果為波形蛋白陽性，則可以確定其為間葉組織腫瘤。若表現為S-100陽性，可判定其為神經組織腫瘤和黑色素瘤，檢驗結果表現為白細胞共同抗原（CD45RB）陽性，則可判定為淋巴瘤，而檢測結果為白細胞共同抗原（CD45RB）陰性，可以判斷為是其他類型的惡性腫瘤。通過進行化學發光免疫檢驗法，不僅可以協助醫師發現病變位置，還能夠進一步的確定腫瘤性質，有助于正確的診斷并為后續的治療進行指導。⑤有利于確定腫瘤性質。在對淋巴造血系統的疾病進行診斷時，免疫組化染色檢查幾乎已成為常規開展的檢查項目，不僅有助于鑒別反應性增生性疾病與淋巴瘤，也是各類淋巴瘤分型的重要依據。⑥有利于測定腫瘤的增殖活性。惡性腫瘤的生物學行為在很大程度上與惡性腫瘤細胞的生長活動密切相關，而化學發光免疫檢驗法則可以通過直接測定細胞核內的與細胞增殖行為有關的蛋白酶，從而間接地探討了惡性腫瘤細胞的生長增殖活動，對臨床估計腫瘤的惡性程度以及制訂治療方案等方面提供了重要的參考信息。增殖細胞核抗原是一種36kD的核孔基因，同時也是DNA聚合酶δ的一個重要輔助因子，由于DNA的結構與細胞發展的狀況有關，所以增殖細胞核抗原可以成為判斷腫瘤細胞生物學行為以及治療預后的關鍵。Ki-67是另一個與蛋白質增殖活動有關的核蛋白，由于Ki-67蛋白能夠與DNA融合，在調控蛋白質的增殖活動中具有主要功能，其水平隨細胞周期的變化而產生變化，所以Ki-67單克隆抗體被廣泛應用于測定腫瘤蛋白質水平和確定其增殖活動。⑦用于指導腫瘤的治療以及判斷預后。聯合化療是治療惡性腫瘤的最重要的方式之一，而在化療過程中的耐藥現象是醫師面臨的最大問題。胸苷酸合成酶（thymidylate synthetase，TS）是5-FU產生耐藥的一個重要酶，癌組織中TS的表達水平可以用于指導治療并與患者的預后相關，臨床可通過TS的表達情況來判斷結腸癌患者的預后效果，預后效果較好的患者，TS指標較低。TS高表達患者對5-FU的敏感性明顯高于低表達者，TS低意味著患者更容易對5-FU出現耐藥性，因此術后5-FU輔助化療對于TS指標較高的患者效果更加好，因此TS蛋白的表達情況對臨床結腸癌患者的后續治療方案的制訂具有指導意義，對患者的預后也有一定指導作用。

綜上所述，化學發光免疫檢驗法甲狀腺功能在生化檢驗中的應用效果較為理想，可以測定患者TPOAB、TGAB、TSH、FT3、FT4等情況，甲狀腺異常檢出率較之放射性免疫檢驗法技術檢驗更高廣。