煙臺市公共場所人工水環境中軍團菌污染情況調查及其病原型別鑒定

朱董楠 董兆靜 王松松 侯春梅 王彥青

1.山東省煙臺市疾病預防控制中心微生物檢驗科，山東煙臺 264000；2.山東省招遠市疾病預防控制中心檢驗科，山東招遠 265400

軍團菌感染在臨床多見，而軍團菌感染的防控是臨床研究重點之一。與軍團菌感染相關的研究顯示，本類病原菌可導致局部流行的情況的發生，而對于公共場所軍團菌的檢測是感染防控措施制訂的重要參考依據[1-2]。人工水環境作為軍團菌感染流行的重要相關問題，對其進行軍團菌污染情況的調查研究，有助于了解病原菌分布情況，對于疾病的防控意義較高。臨床中關于公共場所人工水環境中軍團菌污染情況的調查研究多見，但是眾多研究顯示，不同城市及地區的不同時間段的差異較大[3-5]。因此，對于公共場所軍團菌感染及病原型別的針對性研究極為必要。本研究現探討及分析某市公共場所人工水環境中軍團菌污染情況調查及其病原型別。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019 年1 月至12 月的150 份公共場所人工水環境標本為研究對象。其中，空調冷卻水58 份，淋浴水35 份，供水水箱32 份，噴泉水25 份；醫療單位66 份，賓館酒店30 份，商場超市28 份，娛樂場所26 份；菌落總數＜104cfu/ml 樣本70 份，≥104cfu/ml樣本80 份；春季36 份，夏季60 份，秋季38 份，冬季16 份；市區72 份，郊區78 份。所有標本采集均由經驗豐富者進行，且采集標本均符合相關標準。

1.2 檢驗方法

采集150 份公共場所人工水標本，遵照《水質采樣技術指導（HJ 494-2009）》[6]中的相關標準進行采樣，其中中央空調冷卻水為采集冷卻水的表層水，每次采集500 ml，其中醫療單位的水樣本也為采集候診室空調冷卻水；淋浴水為3 d 未用的淋浴頭，采集噴頭初次流出的水樣，采用滅菌玻璃瓶采集，每次采集500 ml；供水水箱為無菌采集的方式采集水箱內的水標本，每次采集500 ml；噴泉水為采集離池邊1 m 左右處，深50 cm 的水標本，每次采集500 ml。所有水標本均于采集2 d 內送檢，室溫下保存。

每份水標本進行檢測時，均先進行搖勻處理，然后取200 ml，采用0.45 μm 的濾膜進行抽濾處理，將所用濾紙剪碎后，將其在10.0 ml 無菌去離子水中進行洗脫處理，然后以1.0 ml 樣品進行酸處理。取0.1 ml 接種于軍團菌選擇性培養基上，置于5%CO2培養箱，37℃的溫度下孵育10 d，進行培養結果的判定。同時采用軍團菌乳膠凝集試劑盒（上海華微泰達生物科技有限公司，批號：OXOID DR0800M）進行血清型的鑒定，將使用特異性兔抗體敏化的藍色膠乳顆粒干燥結合于測試卡上。其與血清型抗原發生反應，并在檢測反應區內呈現凝集反應。上述操作均由兩名經驗豐富的專業人員進行操作，然后進行結果的統計。

1.3 觀察指標

統計150 份公共場所人工水環境標本的軍團菌檢出情況，統計軍團菌檢出率，對檢出軍團菌型別構成進行統計及比較，同時分析不同水樣（空調冷卻水、淋浴水、供水水箱及噴泉水）、場所（醫療單位、賓館酒店、商場超市及娛樂場所）、菌落總數（＜104cfu/ml及≥104cfu/ml）及季節（春季、夏季、秋季及冬季）的軍團菌檢出情況。

1.4 統計學方法

采用SPSS 21.0 統計學軟件進行數據分析。計數資料以例數或百分比表示，采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 150 份公共場所人工水環境標本軍團菌檢出情況比較

150 份公共場所人工水環境標本共有檢出43 份軍團菌，檢出率為28.67%，40 份檢出單一型別，3 份檢出混合型別，其中嗜血軍團菌的檢出率顯著高于非嗜血軍團菌，且Lp1 型占比高于其他型別，單一型別占比高于混合型別，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。混合檢出共3 份，分別為Lp1 型別與Lp7 型別、Lp1 型別與Lp5 型別及Lp1 型別與Lp6 型別混合。

表1 150 份公共場所人工水環境標本軍團菌檢出情況比較（n=150）

2.2 不同水樣的軍團菌檢出情況比較

空調冷卻水水樣本的軍團菌檢出率高于其他水樣的檢出率，差異有統計學意義（P＜0.017）；而淋浴水、供水水箱及噴泉水水樣本的軍團菌檢出率比較，差異無統計學意義（P＞0.017）。見表2。

表2 不同水樣的軍團菌檢出情況比較[例（%）]

2.3 不同場所水標本的軍團菌檢出情況比較

醫療單位水樣本的軍團菌檢出率高于其他場所的檢出率，差異有統計學意義（P＜0.017）；而賓館酒店、商場超市及娛樂場所水樣本的軍團菌檢出率比較，差異無統計學意義（P＞0.017）。見表3。

表3 不同場所水標本的軍團菌檢出情況比較[例（%）]

2.4 不同菌落總數水標本的軍團菌檢出情況比較

不同菌落總數樣本的軍團菌檢出率比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。見表4。

表4 不同菌落總數水標本的軍團菌檢出情況比較[例（%）]

2.5 不同季節水標本的軍團菌檢出情況比較

夏季水樣本的軍團菌檢出率高于其他季節的檢出率，差異有統計學意義（P＜0.017）；而春季、秋季及冬季水樣本的軍團菌檢出率比較，差異無統計學意義（P＞0.017）。見表5。

表5 不同季節水標本的軍團菌檢出情況比較[例（%）]

2.6 不同地點的軍團菌檢出情況比較

郊區水樣本的軍團菌檢出率高于市區的檢出率，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表6。

表6 不同地點的軍團菌檢出情況比較[例（%）]

3 討論

軍團菌感染致病的情況在臨床多見，其為革蘭陰性桿菌，主要為以氣溶膠為載體的形式感染致病，可導致肺損傷等情況的發生，其中又以嗜肺軍團菌致病情況相對更為多見，故其是臨床重點防控的致病菌群之一[7-8]。臨床中與軍團菌感染及防控相關的研究多見，而對于其早期的防控是感染發生的重要基礎與前提。因此，對于軍團菌污染情況的研究意義與需求較高。土壤與水源作為軍團菌存在與滋生的重要環境場所，其是研究的重點[9-11]，而人工水環境是重點監測且研究較多的方面。臨床中關于公共場所人工水環境中軍團菌污染情況的研究多見，而眾多相關研究顯示，不同時間及地點的公共場所人工水環境軍團菌感染情況存在一定差異[12-14]，因此對于特定地點不同時間的軍團菌污染情況的研究及監測意義較高。另外，不同型別軍團菌的檢出情況可受多方面因素影響，且不同型別軍團菌的傳播力及致病力存在一定差異[15-17]，因此對軍團菌型別的鑒別需求較高。

本研究探討山東省煙臺市公共場所人工水環境中軍團菌污染情況調查及其病原型別，結果顯示，150份公共場所人工水環境標本共有43 份檢出軍團菌，檢出率為28.67%，且主要為檢出單一型別，僅有3 份檢出混合型別，且嗜血軍團菌的檢出為主，且以Lp1 型占比高于其他型別（P＜0.05），同時不同菌落總數樣本的軍團菌檢出率比較，差異無統計學意義（P＞0.05），而空調冷卻水、醫療單位、夏季及郊區水樣本的軍團菌檢出率高于其他水樣、場所及季節的檢出率（P＜0.017）。因此認為人工水環境的軍團菌污染情況仍較為明顯，需進一步加強監測與防控。而本研究中的軍團菌仍以嗜血軍團菌Lp1 型為主，提示其是重點監測與防控的菌群；再者，空調冷卻水、醫療單位及夏季的檢出率較高，提示上述場所、季節及地點可能是軍團菌感染的危險因素，應重視上述因素的防控、監測與干預[18-20]；而不同菌落總數樣本的軍團菌檢出情況比較，差異無統計學意義（P＞0.05），則提示菌落總數對軍團菌污染的影響并不顯著，這與既往研究存在一定一致性[21-22]，因此應全面監測不同公共場所的軍團菌污染情況。鑒于上述情況的存在，對某市公共場所人工水環境軍團菌的進一步細致且全面的監測意義與需求加高[23-26]。另外，國內關于軍團菌的眾多防治與管理規定均顯示，公共場所的水系統是軍團菌滋生與繁殖的最為突出方面與問題，與軍團菌易于在淡水中存活等有關，同時其人工水環境中的水較多存在流動較差等情況，更易于軍團菌在此類水體中的生存，而軍團菌污染的水體形成的氣溶膠可導致吸入者感染，因此國內對于公共場所人工水環境的軍團菌監測的重視程度極高。萬博宇等[12]研究顯示，不同場所的水標本軍團菌檢出率比較，差異無統計學意義（P＞0.05），其中醫院的檢出率為33.3%，而本研究則顯示醫療單位的檢出率（43.94%）相對較高，提示不同地區的不同場所可能存在一定差異；而林錦忠等[4]研究顯示，不同月份的檢出率比較，差異無統計學意義（P＞0.05），而本研究中則顯示，夏季的檢出率（46.67%）高于其他季節，可能與夏季的水溫度（25～45℃）更適合軍團菌的生長有關，而不同地區的季節及水環境溫度存在一定差異，導致不同地區的季節影響作用存在差異，而這進一步提升了針對特定城市地區進行研究的意義與需求。

綜上所述，山東省煙臺市公共場所人工水環境中軍團菌污染情況較為突出，單一型別占比較高，且空調冷卻水、醫療單位、夏季及郊區水樣本的軍團菌檢出率相對更高，可作為干預與防控措施制訂的參考依據。