新型生物組織工程角膜移植治療犬貓角膜疾病的回顧性分析

胥輝豪,焦弋恩,鄭小波,張志鵬,楊麗輝,林金洲,王力波,唐 靜,李啟卷,劉江渝,陳子洋,胡小艷,樸雪玲,張 慧,甘 玲*

(1.西南大學動物醫學院,重慶 402460;2.西南大學發光分析與分子傳感教育部重點實驗室,重慶 400700;3.杭州瑞派虹泰寵物醫院,杭州 310004;4.維特(深圳)動物醫院,深圳 518000;5.廈門御寶貝寵物醫院,廈門 361001;6.寵頤生沈陽中心醫院,沈陽 110023)

角膜潰瘍與損傷是犬貓極為常見的眼部疾病,通常歸因于眼表疾病或感染。局部藥物治療對于單純性、淺表性潰瘍可起到積極的治療效果[1-4]。深度角膜潰瘍、損傷以及角膜穿孔等較為嚴重的情況則需盡快手術治療以挽救視力甚至眼球[5]。而壞死性角膜炎是貓(feline corneal sequestrum, FCS)的一種特有且常見的角膜疾病,多個品種貓均可患病,最常見于波斯貓,被認為與角膜慢性刺激和貓皰疹病毒1型感染等因素有關[6-9]。

多年來,各種眼表手術應用于犬貓角膜相關疾病的治療中,其中包括角膜移植術、結膜瓣移植術、角膜結膜移植、豬小腸黏膜下層或膀胱黏膜下層移植、羊膜移植、牛心包膜以及馬腎包膜移植等[7,10-21]。其中同種異體角膜移植術可提供最佳的光學以及解剖學治療效果,但供體匱乏以及儲存技術等因素使其無法在獸醫臨床中廣泛開展。而其他材料與技術均存在光學性差、獲取困難以及角膜形態改變等局限性。

角膜脫細胞生物組織工程材料是通過脫細胞、滅活病毒以及γ射線滅菌等方式獲得的豬角膜脫細胞支架。由于該類材料具有組織反應輕、匹配度高等特點,近年來已被廣泛研究并逐步應用于人、犬和貓的角膜移植中[22-24]。本研究是全球首次大型回顧性評估犬貓單獨使用新型生物組織工程角膜進行眼表修補與重建后的相關并發癥、角膜長期結構與光學效果,以期為該類材料廣泛、安全地用于獸醫臨床提供數據支撐,同時為比較眼科學提供較高參考價值。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

收集2018—2022年在西南大學教學動物醫院、新瑞鵬寵物醫療集團相關眼科診療機構和廈門御寶貝寵物醫院接受顯微眼科手術的139例犬、貓的病例記錄。所有動物均接受了全面的眼科檢查(包括威脅反射、瞳孔對光反射、角膜反射、淚液量測試、熒光素鈉染色、裂隙燈檢查、眼內壓測量和間接檢眼鏡檢查),其中49例貓病例進行了貓皰疹病毒-1型(feline herpesvirus-1,FHV-1)檢測;所有動物均進行常規體檢、血常規與血液生化檢查以及胸腔X線檢查。手術動物的醫療記錄信息包括:物種、品種、性別、年齡、眼別、眼部疾病、治療史、植片大小與厚度以及隨訪結果(限于篇幅未列出,可掃描OSID碼獲取)。所有手術均獲得動物主人知情同意。本研究僅納入至少隨訪3個月的患畜。

1.2 主要儀器與材料

裂隙燈生物顯微鏡(日本KOWA有限公司);回彈式眼壓計(芬蘭Icare公司);間接檢眼鏡(美國Keeler公司);光學相干斷層掃描儀(OCT,深圳市斯爾頓科技有限公司);手術顯微鏡(德國目樂,德國徠卡);呼吸麻醉機(首美達實業股份有限公司,邁瑞公司,美國Matrx);心電監護儀(美國Masimo公司);PCR儀(上海基靈生物科技有限公司,Bio-Rad公司);I/A系統(美國眼力健公司,瑞士傲帝儀器股份公司,博士倫公司)。

Schirmer淚液試驗(STT I)試紙條(天津晶明新技術開發有限公司);熒光素鈉試紙條(天津晶明新技術開發有限公司);新型生物組織工程角膜(三河寵明寵物食品用品銷售有限責任公司);10-0可吸收縫合線(威海威高富森醫用材料有限公司);10-0尼龍線(日本馬尼公司);角膜環鉆(蘇州明仁醫療器械有限公司);隧道刀(日本馬尼公司);角膜刀(日本馬尼公司);黏彈劑(華熙生物科技股份有限公司)。

1.3 術前治療以及新型生物組織工程角膜移植術

術前給藥包括:0.5%左氧氟沙星滴眼液(日本東亞制藥株式會社)4～6次·d-1;1%阿托品眼凝膠(沈陽興齊眼藥股份有限公司)2～4 d 1次;0.3%透明質酸滴眼液(I-DROP?VET GEL, I-MED ANIMAL HEALTH SANTé ANIMALE, Saint-Laurent, QC, Canada)3次·d-1;對于FHV-1 PCR檢測為陽性的患貓局部給予碘苷滴眼液(Meds for Vets,LLC,Sandy,UT,USA)8次·d-1;口服泛昔洛韋(中國臺灣諾華股份有限公司)90 mg·kg-1,BID。

術前通過OCT檢查進一步輔助確定某些病灶(例如FCS)深度。使用右美托咪定(碩騰公司)肌注(5 μg·kg-1)和丙泊酚(廣東嘉博制藥有限公司)靜脈推注(2 mg·kg-1)誘導麻醉,隨后使用異氟烷(江蘇中牧倍康藥業有限公司)維持麻醉。動物仰臥保定后,使用真空頭枕塑形頭部。使用1%聚維酮碘溶液對術眼進行消毒。對于存在眼瞼內翻的病例先進行眼瞼內翻矯正術,同時存在大皰性角膜病變或角膜糜爛者則使用角膜熱成形術與角膜清創術進行輔助治療(圖1A、B)。所有病例的角膜移植術均在手術顯微鏡下進行,徹底清創后首先使用眼科量規測量病灶直徑(完全覆蓋病灶),隨后使用環鉆與隧道刀制作植床,全層角膜移植病例在術中補充黏彈劑維持前房(圖1C、D)。根據角膜切割深度選擇不同型號的無菌生物組織工程角膜(本研究使用的型號包括200、300、400和450 μm)(圖1E)。使用無菌平衡鹽液對生物組織工程角膜復水5～10 s后再次使用環鉆制作植片,最后使用10-0縫線進行對稱性結節縫合(8、16或32針)(圖1F)。術中持續監測動物心率、心電圖、血氧飽和度、無創血壓以及體溫等生理指標。術后即刻再次進行OCT檢查以評估植片狀態。所有動物術后嚴格佩戴脖圈直至植片穩定。

A.對角膜進行熱成形術;B.對角膜進行清創術;C.使用環鉆制作植床,隧道刀板層切割病灶;D.穿透性移植手術,術中使用黏彈劑維持前房;E.選擇與準備合適的植片;F.結節縫合植片A. Thermoplasty of cornea; B. Debridement of cornea; C. Make the graft bed with trephine, and laminar cutting focus with crescent blade; D. maintain anterior chamber with viscoelastic agent during penetrating transplantation; E. Select and prepare appropriate graft; F. The graft was positioned by simple interrupted suture圖1 新型生物組織工程角膜眼表移植手術過程Fig.1 Surgical procedures of ocular surface transplantation with BEC

1.4 術后治療

所有病例術后當天即刻開始治療。局部使用0.5%左氧氟沙星滴眼液6～8次·d-1,持續4周;透明質酸納滴眼液6次·d-1,持續4～8周;1%阿托品眼凝膠1次·d-1,持續1～3周;表皮生長因子滴眼液(桂林華諾威基因藥業有限公司)6次·d-1,持續3周;0.03%他克莫司滴眼液(MEDS FOR VETS, Utah, USA)2次·d-1,直至角膜血管與肉芽增生基本消退;自體血清(對于存在角膜大皰或溶解的病例)8～12次·d-1直至角膜形態穩定;妥布霉素地塞米松滴眼液(愛爾康公司)3～6次·d-1(對于穿透性角膜移植和部分犬病例)直至角膜炎性情況與免疫反應得到控制;口服美洛昔康(上海漢威生物醫藥科技有限公司)0.1 mg·(kg·d)-1,持續5 d;對于穿透性角膜移植病例還包括全身靜脈給予抗生素、止血藥以及類固醇等藥物1周。

1.5 術后檢查與隨訪

所有病例在術后2個月內每周進行常規眼科檢查,隨后術后3、6和12個月進行隨訪。部分病例在術后第3、6和12月對角膜進行OCT檢查以評估其形態。對本研究中的所有動物進行最終角膜恢復情況與視力評估等級(本研究中所有動物術后觀察期至少不低于3個月),評估標準如表1、圖2所示。最終對所有動物主人進行問卷調查詢問其滿意度。

表1 角膜透明度與形態特征的分級標準及特點描述

1.6 數據統計分析

使用GraphPad Prism5.0或SPSS 18.0對數據進行統計分析。分類變量數據(例如動物品種、性別、角膜疾病類型、植片型號、角膜透明度等級以及并發癥等)以百分比表示;連續變量數據(例如術后隨訪時間、角膜上皮化時間等)以“平均值或平均值±標準差”表示。使用卡方檢驗分析物種、動物年齡、角膜再上皮化時間、植片大小及厚度、角膜修復時間、術后并發癥與角膜透明度的相關性。P<0.05表示差異顯著,P<0.01表示差異極顯著。

2 結 果

2.1 治療動物信息

本研究包括109只貓(112只眼)和27只犬(27只眼)。涉及品種、年齡范圍、性別、眼別、病灶位置等信息如表2所示。角膜疾病類型在貓中以FCS(94/112,83.93%)居多,而犬中則以角膜穿孔(17/27,62.96%)為主,共計板層移植103例(74.10%),全層移植36例(25.90%)。患眼基本均伴有角膜新生血管、角膜水腫、角膜上皮糜爛、大皰性角膜病變、虹膜嵌頓等并發癥。32例(32/49,65.31%)貓病例FHV-1為陽性。

2.2 手術與植片信息

在本研究中,除4例貓曾接受結膜瓣遮蓋術(病例21)、生物補片移植(病例78)、角膜結膜移植術(病例39)和角膜板層切除術(病例55)外,所有動物均為首次接受角膜手術(圖3A、3E、3I和3M)。角膜植片的直徑范圍為3～13 mm(中位數為7.50 mm)。植片厚度包括:200 μm(2例,1.44%)、300 μm(42例,30.22%)、400 μm(53例,38.13%)和450 μm(42例,30.22%)。所有病例均單獨采用生物組織工程角膜移植術進行手術治療,所有術眼均使用10/0或9/0可吸收帶針線進行縫合,對于術后植片出現明顯裂開的個別病例使用10/0尼龍線進行加強固定縫合。除了穿透性病例在處理脫垂虹膜時偶見虹膜粘連與出血外,未見其他明顯術中并發癥。

A、E.分別為貓板層與全層角膜移植術前;I、M.分別為犬板層與全層角膜移植術前;B、F、J、N.術后2～5周;C、G、K、O.術后4個月;D、H、L、P.術后6個月A, E. Preoperative presentation of lamellar and penetrating keratoplasty in feline, respectively; I, M. Preoperative presentation of lamellar and penetrating keratoplasty in canine, respectively; B, F, J, N. 2-5 weeks after operation; C, G, K, O. 4 months after operation; D, H, L, P. 6 months after operation圖3 新型生物組織工程角膜移植病例術前與術后外觀及特征Fig.3 Preoperative and postoperative appearance and characteristics of patients treated with BEC

2.3 術后隨訪、并發癥與手術結果

術后137例患眼最終完成角膜再次上皮化,時間范圍為5～21 d(中位數為8 d);2例最終未能完成上皮化(病例69和76)。最終139個植片均與受體角膜完全整合。在貓中,術后1周植片出現輕度水腫且略有增厚,持續2～3周。所有病例均可見角膜新生血管,從術后第2周或第3周開始出現,并逐漸向植片遷移(圖3B)。根據個體差異,7例植片顯示出不同程度的血管化和大量細胞浸潤,使得植片呈現顯著肉芽增生樣外觀,但在接下來的4～6周內無明顯感染跡象。局部使用他克莫司后,植片血管化及凸起現象在術后3～8周內逐漸改善。角膜的透明度通常在手術后的第2～4個月開始逐漸恢復(圖3C),術后第6個月時移植物幾乎完全透明,僅通過裂隙燈生物顯微鏡可見少許“幽靈血管”(圖3D)。全層移植病例愈合過程及特點與板層類似,最終根據植片大小而存在不同程度的瘢痕(圖3F～H)。

犬角膜術后的愈合模式與貓大體相似,但在術后特點以及預后方面仍存在一定差異。無論板層或全層移植手術,大多數病例在術后2～3周可觀察到植片存在較為明顯的血管化以及外周角膜水腫(圖3J)。植片經2～3周的融合期,其特征為角膜完全上皮化、明顯血管化以及顯著的突起和細胞浸潤。部分病例待角膜上皮化完成后局部給予妥布霉素-地塞米松滴眼液可逐步改善此情況,此時植片變得平坦、穩定且具有一定的透光性(圖3K)。板層移植病例基本在術后第4～6個月植片趨于透明,僅少量血管殘留時植片具有良好的光學性(圖3L),而全層移植病例術后角膜透光性相對較差(圖3M～P)。總體而言,犬角膜術后透明度較貓差。

盡管術后14例眼睛(10.07%)出現了一些并發癥:植片部分松脫與裂開(5例,3.60%,其中2例隨后進行補針縫合)(圖4A)、植片溶解或穿孔(8例,5.76%,隨后1例配合使用結膜瓣遮蓋術、1例配合瞬膜遮蓋術、1例配合角膜結膜移植術)(圖4B)、角膜植床出現壞死(1例,0.72%,隨后再次手術)和眼球萎縮(1例,0.72%)(圖4C、D),但在最后一次隨訪評估中,所有貓術眼(112/112,100%)均保持視力,且絕大部分患眼角膜具有良好的透明度與穩定的結構,其中角膜透明度評級結果為0級80例(80/112,71.43%)、1級23例(23/112,20.54%)、2級8例(8/112,7.14%)和3級1例(3/112,2.68%),未見任何壞死灶復發跡象。犬眼在最后一次隨訪評估時27只患眼均保持光滑的角膜結構,其中25例(25/27,92.59%)患眼具有視力,角膜透明度評級結果為0級2例(2/27,7.41%)、1級5例(5/27,18.52%)、2級15例(15/27,55.56%)、3級3例(3/27,11.11%)、4級1例(1/27,3.70%)以及5級1例(1/27,3.70%)。5級病例(病例114)由于術前眼內結構破壞較為嚴重,從而最終導致眼球萎縮,但角膜保持完整與光滑。

A.植片部分裂開;B.植片部分溶解;C.壞死灶未徹底切除;D.眼球萎縮A. Partial dehiscence of the graft; B. Partial melting of graft; C. Sequestrum was not completely removed; D. Atrophia bulbi圖4 相對明顯的術后潛在并發癥Fig.4 Relatively obvious potential postoperative complications

所有病例的術后隨訪時間范圍為3～50個月(中位數為18個月)。共有114例患眼(82.01%)隨訪時間不低于6個月,其中99例患眼(71.22%)隨訪時間≥12個月。參與問卷調查的畜主(135/139,97.12%)在最后一次隨訪時對手術結果(動物角膜外觀與視力效果)表示滿意(圖5)。

2.4 OCT掃描結果

本研究共有35只動物進行了OCT掃描(鑒于畜主接受度與依從性等因素)。術前評估貓壞死灶深度幾乎均超過角膜1/3厚度,穿透性病例可見角膜破損處無正常組織結構(圖6A、B)。術后即刻OCT檢查可見植片與植床緊密連接,連接處自然過渡且光滑,復水后的植片密度暫時高于植床角膜(圖6C、D)。術后第3個月,OCT顯示角膜上皮與前淚膜完整,植片和角膜穩定融合。在板層病例中,植片與受體角膜植床之間的連接線在大多數貓的病例中已不可見,但在犬中還相對常見。某些板層移植病例可見植片顯著變薄;而穿透性病例此時植片區域與臨近正常角膜之間已形成連接結構,但缺乏內皮細胞層。某些病例(植片直徑較大病例)可觀察到植片增厚(圖6E、F)。術后第6個月,板層移植病例的整體角膜保持高度均質的形態結構;全層移植病例上皮與淚膜完整,角膜厚度存在一定區別(圖6G、H)。術后1年再次進行OCT檢查時,板層移植病例的整個角膜的厚度和纖維走向趨勢保持高度一致;但部分全層移植病例(植片直徑較大病例)仍表現出植片區域厚于臨近的非手術角膜區域(圖6I、J)。

2.5 角膜透明度與手術及臨床特征相關性

本研究綜合患眼最終角膜透明度與形態特征,將等級為0～1級視為術后最佳恢復效果,根據等級結果與動物自身情況及手術等特征進行了相關性分析(表3)。結果顯示術后角膜透明度與動物年齡(P=0.021)、物種(P=0.000)、植片直徑(P=0.032)、是否全層移植(P=0.000)以及角膜再上皮時間(P=0.000)顯著正相關,與角膜修復時間(半年為界限)(P=0.196)和術后并發癥(P=0.356)無統計學差異。

3 討 論

在獸醫臨床中,角膜疾病是占比最高的眼科疾病類型,其中不乏一些特異性或代表性的角膜病,將嚴重影響動物視力與眼球完整性。FCS是一種貓高發的角膜疾病,在本研究中,FCS占據了貓病例的83.93%,且波斯貓所占比例高達70.64%(77/109),該趨勢與其他報道相似[18,25]。鑒于FCS病灶絕大多數均位于角膜視軸區或旁中央,因此該疾病的治療原則應包括盡可能保留視軸區透光性。就光學性效果而言,同種異體或自體角膜移植或許是最佳術式選擇,但供體來源匱乏以及自體角膜取材有限極大地制約了這些術式的廣泛開展[11,25]。因此,數年來有多種其他方法與材料嘗試應用于臨床中,但均存在瘢痕明顯以及一定復發率的弊端[13,20-21,26-31]。深度角膜潰瘍以及各種原因導致的角膜穿孔是獸醫臨床中常見的眼科急癥,在較短時間內可直接威脅動物視力以及眼球完整性。本研究中角膜潰瘍/穿孔為50例(50/139,35.97%),病因主要為外傷、繼發于FCS以及短頭顱犬綜合征等。類似于板層角膜損傷,多種技術與修補材料也曾用于深層角膜潰瘍、損傷以及角膜穿孔,其中包括深板層或穿透性角膜移植術、結膜瓣遮蓋術、角膜結膜移植術、生物材料修補術(豬小腸黏膜下層、膀胱黏膜、腎包膜、心包等)[13,20-21,26-31]。上述各種手術方法或移植材料的選擇取決于角膜缺損的程度、角膜并發癥情況、材料的適應癥以及操作者的技術與經驗,但仍存在各種較為明顯的短板,例如嚴重的角膜瘢痕、角膜表面不光滑、明顯角膜色素化等。

為尋找天然角膜的良好替代物,近年來,通過脫細胞技術獲得的生物組織工程角膜已廣泛用于實驗動物中,以評估其安全性與有效性[23,32-33]。在人與動物各種角膜疾病的前期臨床治療中,豬脫細胞角膜組織展現出了較好的組織相容性、低并發癥和免疫排斥反應,以及較好的光學性[24,34-36]。本研究所采用的新型生物組織工程角膜通過溫和洗滌的方法獲得無抗原、無病原體的脫細胞幼豬角膜支架。該無菌材料易于儲存(冷藏可保存18個月)與便攜,并且具有最大直徑12 mm以及不同厚度的特點,幾乎可覆蓋犬貓各種類型的角膜缺損。該材料具有良好的生物相容性和機械支撐作用,所有術眼在術后2～3個月后均表現出光滑的角膜表面,并且在板層移植病例中形成規律的基質纖維走向。

角膜再上皮化對于任何類型的角膜移植手術而言均至關重要,對移植物存活扮演著關鍵角色[37]。通過上皮化可穩定移植物狀態,防止基質感染或溶解。本研究結果顯示,除了2例上皮化失敗外,其余所有病例術后角膜完成再上皮時間為5～21 d(平均8.79 d),這與天然角膜植片趨勢大體一致,且犬貓之間未見明顯差異[11]。此外,本研究發現植片直徑與再上皮時間也并非完全正相關。植片與植床的匹配度、眼表是否存在感染、眼表物理性刺激等則可能是導致上皮化延遲甚至失敗的主要因素。出現類似情況須酌情對植片再次進行縫合或其他相應處理,以確保植片穩定與存活。根據作者的經驗,當植片厚度略低于植床時往往可獲得更快、更順利的角膜再上皮化過程,這可能與上皮細胞爬行過程中所需歷經的障礙程度相關。此外,角膜血管化是對炎癥的非特異性反應,在角膜疾病過程中非常普遍[38]。在本研究中,盡管作者觀察到幾乎所有植片均會出現不同程度的血管化,但與其他移植手術(如BIOSIS、結膜瓣、和其他類型的脫細胞材料)相比較少,且在術后2～3個月內逐漸消退。角膜細胞浸潤在基質重塑過程中至關重要,新型生物組織工程角膜的特點是細胞浸潤較為顯著,其中犬較貓更為明顯,17例術眼可見植片顯著凸出,通過局部配合使用他克莫司或地塞米松滴眼液使其逐漸消退。這可理解為角膜修復和重塑過程中細胞因子和受體介導的上皮細胞與基質細胞之間相互作用的結果[39]。白細胞介素-1、血小板衍生生長因子等細胞因子參與介導基質反應,并進一步激活角膜細胞的靜息狀態以分化,最終促進角膜基質重塑[40-42]。作者推測,新型生物組織工程角膜作為一種天然無細胞角膜支架,可與多種細胞因子和化學途徑結合,從而促進犬貓角膜細胞的內源性再生與填充。此外,對于角膜神經的內源性生長也具有明顯促進作用[43]。盡管無細胞特性的生物組織工程角膜術后抗原免疫反應極低,但為了緩解角膜炎性反應和降低植片瘢痕化,本研究在植片完成上皮化后局部使用了免疫抑制劑或類固醇滴眼液。未來可進一步開展相關臨床研究評估不給予免疫抑制劑情況下的愈合效果。

縫合技術在角膜移植術中具有重要意義。在本研究中,絕大多數病例采用與其他研究相同的結節縫合方法固定植片,盡管在個別病例中使用了額外的縫合線來加強某些象限的穩定性[11,16,18]。術后有5例術眼出現不同程度的植片裂開,但僅對2例進行了補針。移植物開裂的原因可能是由于植片直徑較大,在上皮未能充分覆蓋的情況下由于角膜自身張力、眼瞼摩擦甚至動物抓蹭等物理性刺激所造成。在本研究中,10-0可吸收聚乙醇酸和10-0不可吸收尼龍線用作縫合材料。尼龍或許可提供更少的刺激和更好的穩定性,但需要去除。

角膜病灶的直徑與深度極大地限制了傳統眼表移植手術和各種材料的應用,例如角膜結膜移植或自體板層角膜移植[28]。目前較深的角膜缺損甚至需要使用多層生物材料進行修補[16,44]。本研究中根據切割深度以及角膜厚度選擇不同型號的生物組織工程角膜(200、300、400和450 μm)。如前所述,除考慮上皮化因素外,結合移植后期的腫脹,選擇略薄于植床深度的植片,復水后的膨脹將彌補微小的差異。移植物厚度的減少可能與膠原蛋白的降解有關,降解區域最終由新形成的膠原蛋白補充[35]。新型生物組織工程角膜在復水后具有一定的彈性,直徑可拉伸至14 mm。本研究中使用的移植物直徑為3～13 mm,基本涵蓋了絕大多數臨床適應癥。有趣的是,臨床結果與統計學分析均并未發現植片直徑與預后存在顯著相關性,該特點完全不同于傳統移植材料,提示大直徑的角膜移植也可獲得理想的愈合效果。值得一提的是,該類產品在人醫領域僅用于板層角膜移植術,但本研究中有高達25.90%(36/139)的病例為角膜穿孔(植片范圍3～13 mm),術后長期效果觀察未見一例出現因內皮功能障礙而存在的持續角膜高度水腫,對于穿孔直徑較小或微穿孔的病例,術后整個移植區甚至可保持高度透明,這或許與該材料的天然無細胞支架屬性有關,內皮細胞可代償性遷移至植片內表面繼續發揮脫水作用。

嚴重并發癥將在一定程度上影響手術預后。本研究中術后較為明顯的并發癥包括角膜溶解、穿孔以及壞死灶復發。其中角膜溶解仍然與上皮化程度密切相關;部分穿孔病例在很大程度上與術后護理有關;而唯一的1例出現壞死灶復發與切割不徹底的病史有關,提示無論選擇何種移植材料,均應徹底移除壞死灶。但無論如何,新型生物組織工程角膜在術后并發癥方面仍優于目前其他常用的修補材料,并給予角膜極大的支撐作用,也有利于后期配合使用其他方式進一步處理[18]。

本研究在長達數年的隨訪中,觀察到該生物組織工程角膜在術后數月內逐漸透明,這吻合其細胞外基質的特性。隨著角膜基質細胞、膠原纖維以及神經等物質不斷填充該支架,使得角膜逐漸恢復其正常的生理結構與功能[45]。

4 結 論

本研究表明,新型生物組織工程角膜便于保存,對犬貓同種異體的板層或全層角膜移植手術而言均為極好的替代方法;其術后并發癥較少且角膜最終可保持良好的結構與光學功能;該材料與相關術式可廣泛應用于小動物臨床的治療中,對其他物種或許同樣具有較好的治療效果。