53種殺菌劑對家蠶的毒性與風險性評價

戴建忠，濮利罡，陳偉國，楊一平，孫海燕，戎鳳鳴

（1. 海寧市經濟作物技術服務站，浙江 嘉興 314400；2. 浙江雅云生態農業有限公司，浙江 嘉興 314407）

農用殺菌劑是一類重要的農藥，廣泛用于各種農作物的病害防治。近年來，隨著國內外對殺菌劑研發的加速，殺菌劑產品不斷創新。由于殺菌劑種類繁多、性質復雜、作用機制不同，雖然許多殺菌劑對家蠶的毒性較低［1］，但也有部分殺菌劑對家蠶具有一定的毒性風險［2-3］。為此，我們持續開展殺菌劑對家蠶的毒性試驗，本試驗測定了53種殺菌劑對家蠶的急性食下毒性，根據各種殺菌劑的推薦施用濃度，評價其對養蠶的安全性風險，并對急性毒性和風險性較高的殺菌劑，進行了田間殘毒期試驗，觀察了推薦濃度下對3 齡家蠶的中毒進程和癥狀表現，為蠶桑地區農作物合理使用殺菌劑和預防中毒提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 供試材料

1.1.1 供試家蠶

家蠶品種為‘白玉×秋豐’，蠶種由浙江省諸暨市健寶農業開發有限公司提供，按常規方法飼養至3齡起蠶供試。

1.1.2 供試桑園

浙江雅云生態農業有限公司桑園，4年生‘強桑1號’，中干偏低樹型養成，每667 m2桑園栽植750株。

1.1.3 供試藥劑

供試藥劑名稱及田間推薦施用濃度見表1，共有15類53種殺菌劑。

表1 供試藥劑Table 1 Test chemicals

表1 供試藥劑（續）Table 1 Test chemicals(Cont)

1.2 試驗方法

1.2.1 殺菌劑對家蠶的急性毒性測定

殺菌劑對家蠶的急性毒性試驗方法參考文獻［4］的浸葉法，并稍作改進（如供試家蠶由2 齡起蠶改為3 齡起蠶，浸漬桑葉10 s 改為1 min，整個試驗期間飼喂處理桑葉改為飼喂處理桑葉24 h 后更換成無毒桑葉）。經預試驗初步判定各供試農藥的毒性范圍后，設5～7 個等比級差濃度梯度，將適齡桑葉分別浸入不同濃度的藥液中1 min，取出后自然晾干，藥液處理后的桑葉置于保鮮盒內，選取發育一致的3 齡起蠶20 頭，在溫度26.5℃±1℃、相對濕度75%～85%的恒溫室內飼養，每個處理重復3 次，以清水處理為空白對照，24 h 后更換成無毒桑葉，繼續飼養到4 齡餉食。每天調查觀察家蠶幼蟲中毒和死亡數，采用DPS 統計軟件對藥液質量濃度對數與幼蟲死亡率概率值進行線性回歸分析［5］，求出各藥劑對家蠶的致死中濃度（LC50）和95%置信限。

1.2.2 殺菌劑對家蠶的毒性和風險性等級評價方法

參照《化學農藥環境安全評價試驗準則第11部分：家蠶急性毒性試驗》（GB/T 31270.11—2014）的方法，農藥對家蠶的急性毒性大小分為四級：LC50≤0.5 mg/L為劇毒，0.5 mg/L＜LC50≤20 mg/L為高毒，20 mg/L＜LC50≤200 mg/L為中毒，LC50＞200 mg/L為低毒［4］。

國家環境保護總局南京環境科學研究所提出根據農藥田間推薦濃度（mg/L）與LC50的比值劃分對家蠶的風險性（即毒性比），分為4個等級：毒性比＞10.0為極高風險性，毒性比在10.0～1.0為高風險性，毒性比在1.0～0.1為中等風險性，毒性比＜0.1為低風險性［6-7］。

1.2.3 殺菌劑在桑葉上的殘毒期試驗和中毒癥狀

根據急性毒性測定和毒性比評價結果，對家蠶毒性大、風險性高的5種殺菌劑，參考田間推薦施用濃度確定試驗濃度。5種殺菌劑稀釋藥液均勻噴灑于供試桑樹上，桑葉正反面噴濕。噴藥后間隔一定時間采葉養蠶，以新鮮無毒桑葉為對照，共6 個處理，每處理喂飼30 頭3 齡起蠶，重復3 次，供試蠶持續用各處理桑葉飼養至4 齡餉食，逐日調查記載各小區死亡幼蟲數量，至不再出現中毒癥狀或死亡蠶的間隔天數為殘毒期。

以上5 種殺菌劑處理后的桑葉，晾干后飼喂3齡起蠶，觀察記錄家蠶的中毒進程和癥狀。

2 結果與分析

2.1 53種殺菌劑對家蠶的急性毒性

采用浸葉法測定了53種殺菌劑對家蠶3齡起蠶的急性毒性，按LC50值大小排序，見表2。根據文獻［4］的農藥毒性分級標準，12.5%氟環唑懸浮劑、0.2%補骨脂種子提取物微乳劑和0.3%四霉素水劑等3種殺菌劑對家蠶的毒性等級為中毒（20 mg/L＜LC50≤200 mg/L），22.5%啶氧菌酯懸浮劑等47種殺菌劑對家蠶的毒性等級為低毒（LC50＞200 mg/L），2億孢子/g木霉菌可濕性粉劑、10億CFU/g多粘類芽孢桿菌可濕性粉劑、100億/g枯草芽孢桿菌可濕性粉劑等3種微生物殺菌劑以孢子或菌落數計量，不宜采用質量濃度的分級標準來劃分毒性等級。從表2 可見，大多數殺菌劑對家蠶的毒性等級為低毒，不同殺菌劑對家蠶的LC50值差異極大，毒性最低的68%精甲霜·錳鋅水分散粒劑＞27 200 mg/L，是毒性最高的12.5%氟環唑懸浮劑36.51 mg/L的745倍以上。由于0.2%補骨脂種子提取物微乳劑、0.3%四霉素水劑的有效含量很低，稀釋倍數低至25倍時，對3齡起蠶仍無中毒反應，因此，將其劃為對家蠶中毒農藥與實際不相符。

表2 53種殺菌劑對家蠶的急性毒性和風險性等級Table 2 Acute toxicity and risk levels of 53 fungicides on silkworms

2.2 53種殺菌劑對家蠶的風險性評價

采用毒性比分級法，即53 種殺菌劑田間推薦施用濃度（表1）與實驗室測定的LC50（表2）的比值。從表2 可見，12.5%氟環唑懸浮劑和72%霜脲·錳鋅可濕性粉劑的毒性比為4.28、1.01，對家蠶具有高風險性；22.5%啶氧菌酯懸浮劑等20 種殺菌劑的毒性比介于1 和0.1 之間，對家蠶具有中等風險性；0.2%補骨脂種子提取物微乳劑等31 種殺菌劑的毒性比＜0.1，對家蠶為低風險性。

2.3 5種殺菌劑在桑葉上的殘毒期

5 種殺菌劑稀釋藥液噴于桑樹后，間隔一定時間采葉飼喂3齡起蠶，測試對家蠶的殘毒期，結果見表3。12.5%氟環唑懸浮劑1 000 倍噴藥后3 d 對家蠶無中毒和死亡，66%代森錳鋅·纈菌胺水分散粒劑400 倍噴藥后5 d 對家蠶無中毒和死亡，72%霜脲·錳鋅可濕性粉劑250 倍噴藥后7 d 對家蠶無中毒和死亡，這3 種殺菌劑在桑葉上的殘留毒性均較短。60%唑醚·代森聯水分散粒劑1 000 倍噴藥后30 d采葉飼喂3齡起蠶仍出現中毒死亡，22.5%啶氧菌酯懸浮劑1 000 倍噴藥后40 d 采葉飼喂3 齡起蠶仍出現中毒死亡，這2種殺菌劑在桑葉上的殘留期較長。

表3 5種殺菌劑對家蠶的殘毒期Table 3 Residual toxicity period of five fungicides on silkworm

2.4 5種殺菌劑對家蠶的中毒癥狀

5 種殺菌劑處理的桑葉飼喂3 齡起蠶，多數在1～2 h后出現拒食或食桑減少，均有靜伏現象（表4）；22.5%啶氧菌酯懸浮劑約在12 h后食桑減少，中毒癥狀表現慢，24 h后少數側倒、頭胸伸出，約48 h后蠶體縮短，排連珠糞，部分個體吐液、蠶體明顯縮短，陸續死亡；60%唑醚·代森聯水分散粒劑也有排連珠糞和蠶體縮短癥狀，72 h后部分死亡；其余3種殺菌劑12～72 h停止食桑，靜伏呈假死狀，無其他明顯癥狀。

表4 5種殺菌劑對家蠶的中毒進程和癥狀Table 4 Poisoning process and symptoms of five fungicides on silkworm

3 討論與結論

本試驗測定了53種殺菌劑對3齡起蠶的急性食下毒性，12.5%氟環唑懸浮劑、0.2%補骨脂種子提取物微乳劑和0.3%四霉素水劑為中毒，22.5%啶氧菌酯懸浮劑等47種殺菌劑為低毒，2億孢子/g木霉菌可濕性粉劑、10 億CFU/g 多粘類芽孢桿菌可濕性粉劑、100億/g枯草芽孢桿菌可濕性粉劑等3種微生物殺菌劑未劃分毒性等級。采用毒性比評價風險性等級方法，12.5%氟環唑懸浮劑和72%霜脲·錳鋅可濕性粉劑對家蠶具有高風險性，22.5%啶氧菌酯懸浮劑等20種殺菌劑對家蠶具有中等風險性，0.2%補骨脂種子提取物微乳劑等31 種殺菌劑對家蠶為低風險性。12.5%氟環唑懸浮劑1 000倍、66%代森錳鋅·纈菌胺水分散粒劑400倍、72%霜脲·錳鋅可濕性粉劑250倍噴霧處理桑葉，對家蠶的殘毒期分別為3 d、5 d、7 d，60%唑醚·代森聯水分散粒劑1 000倍對家蠶的殘毒期超過30 d，22.5%啶氧菌酯懸浮劑1 000倍對家蠶的殘毒期超過40 d；其余48種殺菌劑對家蠶急性毒性低，推薦濃度下對家蠶風險性較小，未測定殘毒期。

試驗結果表明，評價農藥對養蠶生產的安全性，應全面分析每種農藥的急性毒性、毒性比、殘毒期各要素，如12.5%氟環唑懸浮劑對家蠶中毒，急性毒性是53 種殺菌劑中最高的，毒性比為高風險性，但在桑葉上的殘毒期僅3 d；而22.5%啶氧菌酯懸浮劑對家蠶低毒，毒性比為中等風險性，但在桑葉上的殘毒期＞40 d；顯然，12.5%氟環唑懸浮劑比22.5%啶氧菌酯懸浮劑對養蠶安全的可控性高。

因此，對桑園及附近農作物施用殺菌劑時，應選擇對家蠶毒性低、安全風險小、在桑葉上殘留時間短的品種，防止污染桑葉而導致養蠶中毒損失。