MACC1與c-Met基因在胰腺癌組織中的表達及預后意義＊

買二輝 徐 濤 張樹交 王 曉 李 冉 丁飛虎 雷 霆 李四橋

洛陽市中心醫院肝膽胰脾及疝外科一病區 (河南 洛陽 471000)

胰腺癌(Pancreatic Cancer，PC)屬于一種常見的消化道惡性腫瘤疾病，在癌癥死亡率中位居第四[1]。其確診后1年之內死亡率高達95%[2]。近年來，胰腺癌的發病率及死亡率逐年增加，且其手術后死亡率較高[3]。PC轉移率高是其治療效果差的重要原因[4]。在PC診斷時，約有50%左右的患者已發生轉移，平均生存期低于1年[5]。結腸癌轉移相關基因1(Metastasis-associated with colon cancer protein 1，MACC1)可預測早期癌癥階段的轉移風險，其表達水平與腫瘤進展呈正相關[6]。肝細胞生長因子受體(hepatocyte growth factor receptor，c-Met)癌蛋白通過其信號傳導途徑驅動多種腫瘤中的癌癥進展[7]。本研究將探究MACC1與c-Met基因在胰腺癌組織中的表達及預后意義，以期為臨床上胰腺癌的治療及預后判斷提供依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2019年1月至2023年1月我院收治的胰腺癌患者80例，所有病人均接受手術治療，術中取胰腺癌組織及癌旁組織。其中，男37例，女43例，年齡35～65歲，平均年齡(57.245.49)歲；腫瘤直徑1～7cm，平均直徑(4.210.59)cm。腫瘤分期：Ⅰ～Ⅱ期32例，Ⅲ期39例，Ⅳ期9例；淋巴結轉移54例。

納入標準：符合胰腺癌診斷標準[8]；能進行手術治療；臨床資料完整。排除標準：存在溝通、凝血功能障礙者；伴有精神疾病者；有生物免疫制劑治療史；有化療治療史[9]。選擇同期于本院接受治療的胰島細胞瘤等良性病變患者80例，取其胰腺組織，作為對照組。本研究在倫理委員會批準下進行。

1.2 方法

1.2.1組織學實驗 對胰腺癌組織、癌旁組織及健康對照組胰腺組織標本進行固定、石蠟包埋、切片。采用免疫組化SP法。隨機選擇10個高倍鏡視野觀察陽性細胞。每個視野計數100個腫瘤細胞，采用半定量積分法進行結果判定。并且將其與患者的臨床病理特征進行統計學分析。

1.2.2 MACC1與c-Met的表達水平 體外培養正常的胰腺導管上皮細胞株(HPDE6-C7)及胰腺癌細胞株Panc-1、BxPC-3、AsPC-1、MIA Paca-2，分別檢測各株細胞中MACC1與c-Met的表達水平。1.2.3 RT-PCR技術 選取高表達MACC1與c-Met的細胞株(假設A株、B株)，通過RNA干擾技術分別抑制兩組細胞MACC1表達，48H后采用RT-PCR技術檢測MACC1與c-Met，并設立相應的對照組。

1.2.4 細胞增殖及凋亡情況 采用流式細胞儀檢測干擾后A、B組細胞的細胞增殖及凋亡的變化。

1.2.5 遷移及侵襲能力 采用劃痕實驗及Transwell實驗分析抑制表達A、B組細胞的遷移及侵襲能力變化。

1.2.6 MACC1及c-Met可能的信號通路研究 免疫印跡法檢測干擾后A、B組細胞的MACC1與c-Met蛋白變化水平；進一步研究相關信號通路的變化。

1.3 統計分析采用SPSS 18.0統計軟件對數據進行分析，計量資料均以(±s)表示，組間、組內比較分別采用獨立樣本t和配對樣本t檢驗。分類計數資料均以%表示，組間比較采用χ2檢驗。P＜0.05，表明差異有顯著性。

2 結 果

2.1 MACC1、c-Met在各組織中的表達情況結果顯示，在胰腺癌組織中MACC1和c-Met蛋白的高表達率分別為83.75%、80.00%，明顯高于胰腺組織和癌旁組織，差異比較均具有統計學意義(P＜0.05)，見表1。

2.2 MACC1和c-Met蛋白表達與胰腺癌臨床病理特征的關系結果顯示，隨著腫瘤分期的增高及淋巴結的轉移，MACC1和c-Met蛋白的表達有所增加(P＜0.05)；MACC1和c-Met蛋白的表達與病人的年齡、性別、腫瘤直徑等無統計學意義相關性(P＞0.05)，見表2。

表2 MACC1和c-Met蛋白表達與胰腺癌臨床病理特征的關系[n(%)]

2.3 各細胞株中MACC1與c-Met基因水平的表達情況結果顯示，MACC1在BxPC-3中表達最多，c-Met在AsPC-1中表達最多，見表3。因此，選擇BxPC-3和AsPC-1細胞株繼續進行實驗。

表3 各細胞株中MACC1與c-Met基因水平的表達情況

2.4 RNA干擾后MACC1、c-Met的表達情況結果顯示，MACC1和c-Met蛋白表達水平在空白對照組和陰性對照組之間差異不顯著(P＞0.05)；而RNA干擾后的BxPC-3和AsPC-1細胞株中MACCI和c-Met蛋白表達水平較對照組均明顯降低(P＜0.05)，見表4。

表4 RNA干擾后MACC1、c-Met的表達情況

2.5 細胞增殖及凋亡情況結果顯示，相較于對照組，BxPC-3和AsPC-1細胞株中對MACC1進行抑制后，細胞增殖明顯變慢，而細胞凋亡率明顯增多，見表5。

表5 細胞增殖情況[A]

2.6 細胞遷移及侵襲能力結果顯示，相較于對照組，BxPC-3和AsPC-1細胞株中對MACC1進行抑制后，細胞遷移和侵襲能力均明顯降低，見表6。

表6 細胞遷移情況

2.7 下調MACC1表達對各信號通路的影響結果顯示，干擾后的胰腺癌細胞，MACC1與c-Met、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9表達水平均顯著下降；下調MACC1表達抑制了Notch1、Hey1、Hes1、Ras、p-ERK1/2等通路相關蛋白的表達，同時，p53、MDM2等p53信號通路相關蛋白表達也明顯改變。

3 討 論

胰腺癌是致死率較高的惡性腫瘤之一，目前尚無有效的早期診斷手段，且胰腺癌患者的預后極差[10]。MACC1在多種實體瘤中均呈現高表達狀態[11]。已有研究指出，MACC1在細胞培養物以及結腸癌患者中誘導腫瘤的增殖、侵襲和轉移[12]。近來有研究通過RNA-seq和微陣列數據集分析發現c-Met是胰腺癌的重要樞紐基因[13]。

在本研究中，MACC1和c-Met蛋白在胰腺癌組織中的高表達率明顯高于胰腺組織和癌旁組織(P＜0.05)。且隨著腫瘤分期的增高及淋巴結的轉移，MACC1和c-Met蛋白的表達有所增加(P＜0.05)；而MACC1和c-Met蛋白的表達與病人的年齡、性別、腫瘤直徑等無統計學意義相關性(P＞0.05)，表明MACC1和c-Met蛋白的表達量隨著胰腺癌的進一步惡化逐漸增加。與Zhang X[14]、Qin T[15]等人的研究結果一致。這是因為MACC1是一種重要的致癌基因，通過調控HGF-MET信號通路，促進腫瘤癌的發生發展以及轉移。MACC1含有多個基序，參與腫瘤細胞的多種生物學過程。其在多種腫瘤中具有致癌作用，主要表現為細胞增殖、上皮間質轉化、淋巴結轉移等。且c-Met屬于受體酪氨酸激酶家族，在上皮細胞中高表達。肝細胞生長因子(Hepatocyte growth factor，HGF)是c-Met的唯一配體，HGF與c-Met結合后，可導致c-Met磷酸化，從而激活MAPK、STAT3和PI3K/AKT等多種信號通路，這些信號通路調控腫瘤細胞的增殖、侵襲及遷移。

本研究結果還顯示，MACC1和c-Met蛋白表達水平在空白對照組和陰性對照組之間差異不顯著(P＞0.05)；而RNA干擾后的BxPC-3和AsPC-1細胞株中MACCI和c-Met蛋白表達水平較對照組均明顯降低(P＜0.05)。且相較于對照組，BxPC-3和AsPC-1細胞株中對MACC1進行抑制后，細胞增殖明顯變慢，細胞凋亡率明顯增多；同時，細胞遷移和侵襲能力均明顯降低。腫瘤最顯著的特點就是無限增殖和容易發生轉移，無限增殖不但會引起壓迫癥狀，還會引起明顯的惡病質。大部分的癌癥患者在晚期都會出現遠處轉移，這就會造成體內多發腫瘤，從而明顯縮短患者的生存期[16]。而對MACC1進行抑制后，MACCI和c-Met蛋白表達水平明顯降低，且可明顯抑制細胞增殖、遷移和侵襲，促進細胞凋亡，因此，MACCI和c-Met對胰腺癌的發生發展具有重要作用。最后，本研究還發現下調MACC1表達抑制了Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9等凋亡蛋白以及Notch1、Hey1、Hes1、Ras、p-ERK1/2等信號通路蛋白的表達，同時，p53、MDM2等p53信號通路相關蛋白表達也明顯改變。張德宇[17]的研究中也指出MACC1的表達情況與P53和Notch信號通路活性有關。Xu Z[18]等人認為即使是在胰腺癌的晚期階段，使用相關抑制劑靶向 HGF/c-MET通路，也能顯著抑制腫瘤轉移和生長，進一步表明MACCI和c-Met對胰腺癌發生發展及預后的重要性。

綜上所述，在胰腺癌中，MACC1和c-Met的異常高表達可能與腫瘤分期及淋巴結轉移密切相關。下調MACC1可以抑制凋亡蛋白的表達、胰腺癌細胞的增殖、遷移和侵襲，促進胰腺癌細胞的凋亡，還可抑制Ras/ERK、Notch以及p53信號通路。MACC1和c-Met與胰腺癌的發生發展密切相關，可作為判斷胰腺癌患者預后的重要指標，也是潛在的癌癥治療靶點。