精神分裂癥病人外周血長鏈非編碼RNA核富集轉錄本1表達與臨床癥狀相關性分析

史梁，常全文，朱瑋國，李娜，李麗娟，趙騰飛，李永

作者單位：1菏澤市第三人民醫院（菏澤市精神衛生中心）精神科，山東 菏澤274009；2河北醫科大學第一醫院精神衛生中心，河北 石家莊050000

精神分裂癥（schizophrenia，sch）是一種嚴重的精神障礙性疾病，常發生于青年或壯年時期，病情反復，具有較高的復發率及致殘率，常需要終身治療，目前對sch確切的發生機制尚不清楚，研究認為神經發育障礙是其病理機制之一［1-2］。長鏈非編碼RNA（long non-coding RNA，lncRNA）在參與調節神經發育、神經可塑性等中樞神經系統疾病中發揮重要作用［3］。長鏈非編碼RNA核富集轉錄本1（lncRNA NEAT1）是lncRNA之一，研究顯示lncRNA NEAT1可通過調控靶基因表達，參與阿爾茨海默病、帕金森病等中樞神經系統疾病的病理生理過程［4-5］。Katsel等［6］研究顯示，lncRNA NEAT1在sch病人多個皮質區低表達，其機制可能與NEAT1參與調節少突膠質細胞功能有關。目前lncRNA NEAT1在sch臨床中的研究較少，本研究探討sch病人外周血lncRNA NEAT1表達及與精神癥狀和認知功能的相關性，為sch的病理機制提供理論基礎。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2019年6月至2022年3月菏澤市第三人民醫院及河北醫科大學第一醫院精神科收治的sch病人73例作為觀察對象（sch組），其中男41例，女32例，年齡范圍23～58歲，年齡（46.60±10.30）歲。納入標準：①符合國際疾病分類第10版（ICD-10）中診斷標準［7］；②病人均為首次發病且未使用抗精神類疾病藥物；③病人或其監護人知情同意。排除標準：①患有強迫癥、抑郁癥、人格障礙等其他精神疾?。虎谀X外傷、腦血管疾病、精神疾病或嚴重軀體疾??；③有自殺或自殘傾向；④乙醇或藥物成癮者；⑤妊娠期或哺乳期婦女。另選取同期在這兩家醫院體檢人員（無精神病障礙史及無精神疾病家族史）68例作為對照組，其中男38例，女30例，年齡范圍24～60歲，年齡（45.10±9.70）歲。本研究經菏澤市第三人民醫院及河北醫科大學第一醫院醫學倫理委員會批準（批號201952604）。

1.2 研究方法

1.2.1 lncRNA NEAT1水平檢測 采集病人空腹靜脈血5 mL，采用密度梯度離心法分離外周血單核細胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC），Trizol試劑（MT0011，百奧萊博）提取PBMC中總RNA，取1μg RNA按照TaqMan mocrroRNA反轉錄試劑盒（MT0006，百奧萊博）說明反轉錄為互補DNA，采用實時熒光定量逆轉錄聚合酶鏈反應（qRT-PCR）法檢測lncRNA NEAT1表達，按照TaqMan探針熒光定量PCR試劑盒（WK063，百奧萊博）說明書在PCR儀（ABI7900，Applied Biosystems）上進行擴增，總反應體系25 μL，共40個循環，lncRNA NEAT1及內參甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）的引物購自上海生工生物工程有限公司，其中lncRNA NEAT1正向引物序列5'-GGCAGGTCTAGTTTGGGCAT-3'，反向引物序列5'-CCTCATCCCTCCCAGTACCA-3'；GAPDH正向引物序列5'-CCAGGTGGTCTCCTCTGA-3'，反向引物序列5'-GCTGTAGCCAAATCGTTGT-3'。反應結束后，以GAPDH為內參，采用2-ΔΔCt法計算lncRNA NEAT1表達水平。

1.2.2 精神癥狀與認知功能評估 采用陽性與陰性癥狀量表（positive and negative symptom scale，PANSS）對病人精神狀態進行評估，PANSS包含陽性癥狀、陰性癥狀和一般精神病理3個分量表，評分越高，癥狀越重。采用蒙特利爾認知評估量表（montreal cognitive assessment，MoCA）對病人認知功能進行評分，共包含7個評分項目，MoCA≥26分表示認知功能正常，MoCA＜26分表示認知功能障礙。

1.3 統計學方法 采用SPSS 22.0進行統計學分析，計量資料符合正態分布用表示，兩組間比較采用t檢驗；計數資料采用例表示，組間比較采用χ2檢驗；Spearman法分析sch病人外周血lncRNA NEAT1表達與PANSS評分、MoCA評分的相關性，采用受試者操作特征（ROC）曲線分析外周血lncRNA NEAT1水平對sch的診斷價值。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組一般資料比較 sch組與對照組性別、年齡、身體質量指數（BMI）、受教育年限及居住地等一般資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1 精神分裂癥（sch）73例與體檢人員（無精神病障礙史及無精神疾病家族史）68例一般資料比較

2.2 sch病人外周血lncRNA NEAT1表達水平及診斷價值 對照組、sch組病人外周血lncRNA NEAT1表達水平分別為1.05±0.21、0.73±0.15，兩組比較差異有統計學意義（t=10.47，P＜0.001），lncRNA NEAT1診斷sch的ROC曲線下面積為0.82，截斷值為0.89，靈敏度為79.45%，特異度為73.93%，見圖1。

圖1 長鏈非編碼RNA核富集轉錄本1（lncRNA NEAT1）對精神分裂癥（sch）的診斷價值

2.3 sch病人PANSS量表評分及認知功能 sch病人PANSS量表總評分為（79.10±8.70）分，其中陽性癥狀、陰性癥狀、精神病理癥狀分別為（25.30±3.20）分、（23.10±3.50）分、（30.70±6.50）分；sch病人MoCA評分為（20.60±6.32）分，較對照組（28.10±1.60）分顯著降低（t=9.50，P＜0.001）。

2.4 lncRNA NEAT1與sch病人臨床癥狀相關性分析顯示，lncRNA NEAT1與PANSS量表陰性癥狀評分和總分呈負相關（P＜0.05），lncRNA NEAT1與MoCA評分的執行能力、注意力、延遲記憶和總分呈負相關（P＜0.05），見表2。

表2 lncRNA NEAT1與sch病人臨床癥狀相關性

3 討論

sch常伴有感知、思維、情感、行為異常以及精神活動的不協調，還伴有明顯的認知功能受損，嚴重影響病人正常生活［8］。目前對sch的診斷主要以精神癥狀作為判定，存在主觀性，因此研究sch發病機制，尋找診斷標志物，對sch的診療具有重要意義［9］。

lncRNA多位于細胞核內，在腦組織中表達廣泛，報道顯示，sch病人腦組織與外周血中lncRNA異常表達，與sch病人的精神癥狀有關，如NONHSAT021545、NONHSAT041499在sch病人PBMC中表達水平升高，與sch的陰性癥狀、陽性癥狀評分有關［10］。lncRNA NEAT1是lncRNA之一，參與調節神經發生、腦發育、神經可塑性等許多神經特異性過程，在癲癇、多發性硬化癥、帕金森病等疾病的發生發展中發揮重要作用［11-12］。研究顯示，lncRNA NEAT1可靶向抑制微RNA-29b-3p的表達，抑制Toll樣受體4/核因子κB信號通路，降低癲癇模型海馬神經元的凋亡［13］。另有研究顯示，lncRNA NEAT1在未治療的sch病人外周血中表達水平顯著降低，在經過治療的sch病人外周血中表達水平顯著升高，且與對照組差異無統計學意義［14］。本研究結果顯示，lncRNA NEAT1在sch病人外周血中表達水平降低，與先前報道一致，提示lncRNA NEAT1可能與sch發病有關，ROC曲線分析顯示，lncRNA NEAT1對sch有一定診斷價值，但lncRNA NEAT1在sch中的作用機制尚不清楚，lncRNA NEAT1診斷sch的實用性與有效性仍需更深入地研究。

lncRNA可通過對基因的選擇性剪接，調節神經系統功能，lncRNA可通過調控細胞凋亡與自噬、氧化應激、炎癥反應等過程影響腦神經功能，參與重度抑郁癥、阿爾茨海默病等精神疾病的發展［15-16］。在sch中，lncRNA可調控與sch相關的基因表達、介導免疫炎癥反應與影響大腦結構和神經突觸可塑性［17-18］。研究顯示，LncRNA-AC006129.1通過DNA甲基化介導的轉錄因子Capicua下調在精神分裂癥中重新激活細胞因子信號轉導抑制因子3表達，增強炎癥反應［19］。lncRNA NEAT1可競爭性結合微RNA-339-5p并上調同源框A1表達，抑制缺氧缺血條件下神經元細胞凋亡，在保護腦損傷方面發揮一定作用［20］。此外，lncRNA NEAT1還可促進Toll樣受體2通路激活，促進白細胞介素6、趨化因子CC基序配體2等炎性因子釋放，參與免疫調節，促進炎癥性疾病的發展［21］。以上研究表明lncRNA NEAT1對神經免疫炎癥反應起著重要作用，且大量研究也表明，免疫炎癥反應參與sch的發生發展，因此，本研究推測lncRNA NEAT1可能通過免疫炎癥反應影響sch的臨床癥狀。相關研究表明：免疫炎性反應與sch的陰性癥狀和認知功能密切相關［22］。本研究結果顯示：lncRNA NEAT1與PANSS量表陰性癥狀評分和總分呈負相關，與MoCA評分的執行能力、注意力、延遲記憶和總分呈負相關，提示lncRNA NEAT1表達水平與sch病人的疾病嚴重程度與認知功能損傷相關，證實lncRNA NEAT1可能通過調節免疫炎性反應參與sch的發生發展。但本研究臨床樣本量較少，后期將擴大樣本量進一步觀察lncRNA NEAT1表達變化與臨床癥狀之間的相關性。

綜上所述，lncRNA NEAT1在sch病人外周血中表達水平降低，與sch病人精神癥狀和認知功能有關，可能參與sch的發生發展。由于研究臨床資料少，lncRNA NEAT1與sch發生發展的具體作用機制尚未明確，需結合動物模型做進一步研究。