冠心病病人外周血sema4D、CD72表達水平與冠狀動脈側支循環形成的相關性

楊祖芳,涂祎敏,羅 智

冠心病的主要病理學變化即為冠狀動脈硬化,目前主要以血管造影診斷為主,但是其具有侵入性,且對操作者的技術水平較為依賴[1-2]。因此,急需尋找標志物篩查冠狀動脈病變,以便早期確診冠心病并采取及時有效的干預方案。可溶性信號素4D(semaphorin 4D,sema4D)主要表達于T細胞,為150 kDa的1型整合膜糖蛋白,可與CD72結合抑制CD72表達,進而促進B細胞發育,同時也能參與腫瘤進展、血管形成及軸突導向,能夠通過增強血小板活化促進體內血管的形成[3-4]。目前,已有研究證實sema4D可能可預測冠心病的發生,且與冠狀動脈狹窄程度具有相關性[5];CD72表達水平在急性心肌梗死病人外周血單個核細胞中降低,但是其具體價值不明確[6],冠狀動脈側支循環的形成利于改善冠心病病人臨床癥狀,降低心肌缺氧、缺血。本研究分析冠心病病人外周血sema4D、CD72表達水平及其與冠狀動脈側支循環形成的相關性,以為臨床干預冠狀動脈側支循環形成提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

入選2019年8月—2021年8月北京老年醫院收治的78例冠心病病人作為冠心病組,另入選同期北京老年醫院體檢健康者78人為對照組。冠心病組納入標準:1)經影像學及血清學檢查均符合冠心病相關診斷標準病人;2)自愿簽署知情同意書病人;3)為首次診斷為冠心病且接受治療病人。冠心病組排除標準:1)合并心律失常、器質性心臟病病人;2)合并免疫疾病、嚴重傳染病及腎功能不全病人;3)為心肌病、瓣膜性心臟病病人。對照組,年齡45～78(63.42±5.43)歲;男43人,女35人。冠心病組,年齡49～75(62.78±5.36)歲;男46例,女32例。兩組觀察對象一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05)。本研究經倫理委員會批準。

1.2 側支循環評估

以Rentrop分級法[7]評估冠心病病人側支循環,對病變遠端血管進行造影檢查可見大部分完全顯影為3級(16例),大分支顯影為2級(21例),小邊支顯影為1級(31例),未觀察到側支血管為0級(10例)。0級或1級為側支循環良好組,2級或3級為側支循環不良組。

1.3 方法

病人入院24 h內抽取空腹靜脈血,以酶聯免疫吸附法檢測血清sema4D、超敏C反應蛋白(hypersensitive C-reactive protein,hs-CRP)、血脂[高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein,HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein,LDL-C)、總膽固醇(total cholesterol,TC)、三酰甘油(triglyceride,TG)]水平,試劑盒購自南京森貝伽生物科技有限公司。以Focoll分層法分層液體,得到單個核細胞。提取總蛋白并進行定量,電泳、轉膜、封閉后先后用兔抗CD72一抗、羊抗兔二抗孵育,發光顯影后掃描條帶灰度,以甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)為內參計算蛋白表達量。以免疫熒光法檢測病人N末端腦鈉肽前體(N-terminal probrain natriuretic peptide,NT-proBNP)水平。收集病人年齡、性別、血壓、吸煙史、飲酒史、心率、糖尿病史、體質指數等資料。

1.4 統計學處理

2 結 果

2.1 冠心病組與對照組外周血sema4D、CD72表達水平比較

冠心病病人外周血sema4D、CD72水平高于對照組(P<0.05),CD72水平低于對照組(P<0.05)。詳見表1。

表1 冠心病組與對照組外周血sema4D、CD72表達水平比較

2.2 側支循環良好組及不良組臨床資料比較

兩組病人血清TG、TC、HDL-C水平比較差異有統計學意義(P<0.05),年齡、血壓、吸煙史、飲酒史、性別、體質指數、心率、LDL-C、hs-CRP、NT-proBNP水平比較差異無統計學意義(P>0.05)。詳見表2。

表2 側支循環良好組及不良組臨床資料比較

2.3 側支循環良好組及不良組病人外周血sema4D、CD72表達

側支循環不良組病人外周血sema4D水平低于側支循環良好組(P<0.05),CD72水平低于側支循環良好組(P<0.05)。詳見表3。

表3 側支循環良好組及不良組病人外周血sema4D、CD72表達

2.4 外周血sema4D與CD72表達的相關性

繪制散點圖評估外周血sema4D、CD72表達在冠心病冠狀動脈側支循環形成良好病人中的相關性,結果顯示,兩者呈負相關(r=-0.664,P<0.05)。詳見圖1。

圖1 外周血sema4D與CD72表達的相關性

2.5 多因素Logistic回歸分析影響冠心病病人冠狀動脈側支循環形成的因素

多因素Logistic回歸分析顯示,高表達的sema4D、高水平的TC為影響冠心病病人冠狀動脈側支循環形成不良的危險因素(P<0.05),高表達的CD72為冠心病病人冠狀動脈側支循環形成不良的保護因素(P<0.05)。詳見表4。

表4 多因素Logistic回歸分析影響冠心病病人發生冠狀動脈側支循環形成的因素

3 討 論

目前,冠心病嚴重威脅我國民眾身體健康,為臨床常見的一種心血管疾病,且發病率逐年上升[8-9]。側支循環形成能夠在一定程度上避免冠心病病人心肌梗死的發生,進而保護冠心病病人安全[10-11]。近年來,越來越多的研究聚焦于臨床預測冠狀動脈側支循環形成的因素,以為臨床早期干預、促進側支循環的形成提供更多有效參考。sema4D為跨膜糖蛋白(免疫系統),由基質金屬蛋白酶產生,主要在腫瘤細胞、血小板、內皮細胞及B細胞中表達,參與血管生成、腫瘤進展、血栓形成及炎癥性疾病[12-13]。李月亮等[14]研究顯示,sema4D可能作為預測冠心病預后的重要指標。本研究結果顯示,冠心病病人sema4D水平高于健康者,與Gong等[15]研究結果基本一致。分析其原因,可能是因為a4D在病理狀態下釋放,經切割后產生可溶性sema4D,促進斑塊的易碎性,加速炎癥反應的發生,促進血小板聚合及激活,進而促進血栓形成。此外,血栓形成后,sema4D可脫落血小板表面,結合血管內皮細胞受體誘導血管生成[16]。本研究亦發現,側支循環不良組病人外周血sema4D水平高于側支循環良好組,提示外周血sema4D水平與冠心病病人側支循環形成過程可能存在一定的相關性。

有研究顯示,腦梗死病人中sema4D升高與免疫細胞過度激活有關[17]。作為sema4D主要淋巴細胞,研究已證實CD72與sema4D結合后可使自身脫落、去磷酸化,并作為B細胞表面抗原受體(BCR)信號的調節因子對B細胞功能進行調節,或介導B細胞活化(通過CD40-CD40L)。由此可知,異常表達的CD72可證實異常激活的免疫反應發生。故本研究分析CD72在冠心病病人中的表達,結果顯示,與對照組相比,冠心病組外周血CD72水平明顯降低,與Yan等[6]研究中CD72mRNA在急性心肌梗死病人外周血中呈低表達的研究一致。此外,冠狀動脈側支循環不良組CD72水平高于側支循環良好組,提示CD72表達可能與冠心病病人冠狀動脈側支循環的發生有關。本研究通過繪制散點圖評估外周血sema4D、CD72在冠心病冠狀動脈側支循環形成良好病人中的相關性,結果顯示,兩者呈負相關,兩者可能共同參與側支循環形成過程。進一步多因素Logistic回歸分析顯示,高表達的sema4D、高水平的TC為冠心病病人冠狀動脈側支循環形成的危險因素,高表達的CD72為保護因素,提示sema4D、CD72可能作為臨床早期評估冠狀動脈側支循環形成情況的潛在指標。

綜上所述,冠心病病人外周血sema4D呈高表達,CD72呈低表達,且高表達的sema4D、高水平的TC為影響冠狀動脈側支循環形成的獨立危險因素,高表達的CD72為保護因素,可能為判斷冠狀動脈側支循環形成情況的重要指標。但是本研究為單中心研究且納入樣本量較少,還需在以后研究中擴大樣本量,進行多中心研究以明確sema4D、CD72在冠狀動脈側支循環形成中的具體作用。