木芙蓉花質量標準研究

于輝　孫鵬鵬　田真　張秀婷

【摘要】目的：確立了木芙蓉花的質量控制標準。方法：通過外觀特征鑒定、顯微鑒別和薄層色譜法（TLC）等對木芙蓉花進行定性鑒別；根據2020年版《中國藥典》四部通則中的檢查內容分別對不同批次木芙蓉花的水分和水溶性浸出物含量進行測定；并利用高效液相色譜法（HPLC）測定對木芙蓉花中有效成分蕓香苷進行含量測定。結果：木芙蓉花的外觀性狀和顯微特征清晰可辨；TLC斑點清晰、分離效果佳；10批木芙蓉花水分含量平均值為10.10%，水溶性浸出物平均值為41.53%。蕓香苷含量在0.0188～0.9412 μg范圍內，呈良好的線性關系（r=0.999），平均加樣回收率為101.5%，RSD為1.16%。結論：方法準確可信，操作簡便可行，為木芙蓉花的質量控制提供了理論依據。

【關鍵詞】木芙蓉花；薄層色譜法；高效液相色譜法；質量標準

【中圖分類號】R284.1【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2023）21-0031-05

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2023.21.zgmzmjyyzz202318008

Study on the Quality Standard of Hibiscus mutabilis flowersYU Hui1SUN Pengpeng2TIAN Zhen1ZHANG Xiuting3*

1.Shandong Drug and Food Vocational College， Weihai 264200， China;

2.Zibo Institute for Food and Drug Control， Zibo 255000， China;3.Qilu Medical University，? Zibo 255300， ChinaAbstract：Objective In this study， the quality standard control method of Hibiscus mutabilis flowers was established. Methods Microscopic identification and TLC were adopted in the qualitative identification of Hibiscus mutabilis flowers. The contents of water and water-soluble extractive were determined according to the methods of Chinese Pharmacopoeia. The content of rutin was determined by HPLC. Results The microscopic features of Hibiscus mutabilis flowers were identified. The characteristic spots of the rutin reference substance could be clearly displayed by TLC. The average contents of water and water -soluble extract in ten batches of Hibiscus mutabilis flowers were 10.10% and 41.53%， respectively. The content of rutin was determined by high-performance liquid chromatography. rutin showed a good linear relationship in the 0.0188-0.9412μg （r=0.999 6） ，with an average recovery of 101.5% and RSD of 1.16%. Conclusion This method is accurate and reliable， and the operation is simple and feasible， which provides a theoretical basis for the quality control of Hibiscus mutabilis flowers.

Keywords：Flowers of Hibiscus Mutabilis L.; TLC; HPLC; Quality Standard

木芙蓉花為錦葵科、木槿屬植物落葉小喬木或灌木木芙蓉Hibiscus mutabilis L.的新鮮或干燥花，又名芙蓉花、木蓮、拒霜花、地芙蓉、華木。木芙蓉花主要采摘于夏、秋兩季剛剛開放的花朵，曬干或烘干后入藥［1］。木芙蓉花主產地在中國山東、河北、安徽等省區，原產于中國湖南，為成都市市花，現東南亞各國和日本也都有栽培［2］。《本草圖經》和《本草綱目》有明確記載，木芙蓉花“味辛平，無毒”，主治“一切大小癰疽、腫毒惡瘡”［3］。清熱解毒、涼血止血、消腫排膿為木芙蓉花的主要功效［4］。木芙蓉花的化學成本一般可以分為黃酮類、苷類成分、香豆素類成分等，其中黃酮類含量最高，種類也最多，大約有25個。同時黃酮類成分也是木芙蓉花的主要藥效成分，在抗炎、耐病毒、強心、利膽、止痛和鎮定等方面發揮重要功能 ［5］。

通過對木芙蓉質量標準調查研究發現，現行《中國藥典》2020年版只對木芙蓉葉的質量標準進行了收載，木芙蓉花僅有衛生部頒藥品標準（中藥材第一冊）且標準較為粗疏，僅做性狀鑒別［6］，目前對木芙蓉花的質量標準鮮有報道。中藥材的質量標準關系到藥材的采集、炮制、制劑、成分提取等方面，并且對臨床使用起著重要指導作用。本試驗采集10批產地不同的木芙蓉花， 考查其顯微特征、薄層色譜特征、水分、水溶性浸出物等方面；此外，木芙蓉花中含有蕓香苷等黃酮類化合物［7］，其有較高的藥用價值，是治療糖尿病、高血壓、心血管疾病等多種疾病的良藥，此外它還有抗菌和抗放射作用［8］。故本研究選擇采用高效液相色譜法測定蕓香苷含量，為該藥材質量標準建立和規范使用提供科學依據。

1材料、儀器與試藥

1.1材料木芙蓉花10批，分別采購自浙江省杭州市、廣東省清遠市、廣東省深圳市、河北省安國市、四川省成都市、河南省周口市、云南省昆明市及購自安徽亳州藥材市場。經鑒定，十批藥材皆為錦葵科植物木芙蓉（Hibiscus mutabilis L.）的干燥花。具體信息見表1。

1.2儀器設備U3000高效液相色譜儀（戴安集團公司）、BX-41生物顯微鏡（日本Nikon公司）WFH-204B紫外分析儀紫外燈（杭州齊威儀器公司）、WT-B天平（杭州萬特衡器公司）、KQ-300DA超聲波清洗器（深圳市華策技術公司）、HH-S14A恒溫水浴鍋（鄭州市亞榮儀器設備公司）；DHG-9070A烘箱（上海精宏實驗設備有限公司）。

1.3試劑與試藥蕓香苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：100080-200707）；甲醇（色譜純，國藥集團生化藥物試劑股份公司，批號：20220106）；冰醋酸（色譜純，國藥集團生化藥物試劑股份公司，批號：20211206）；娃哈哈純凈水（杭州娃哈哈集團股份公司，批號：20220120）；4%CH3COOHNa硅膠G薄層板（青島海洋化工廠分廠）；乙酸乙酯（國藥集團生化藥物試劑公司，批號：20220305）；甲酸（國藥集團生化藥物試劑公司，批號：20211210）；硫酸（國藥集團生化藥物試劑公司，批號：20200313）；丙酮（國藥集團生化藥物試劑公司，批號：20210901）；三氯甲烷（國藥集團生化藥物試劑公司，批號：20211016）。

2方法與結果

2.1性狀鑒別將木芙蓉干燥花置于白色工作臺上，輕輕將失水皺縮的花瓣展開，測量花瓣的長和寬，觀察花瓣正反面顏色、形狀以及表面特征，留意木芙蓉花的氣味；將花瓣摘除，觀察并測量花柱和雄蕊的性狀。

2.1.1性狀特征如圖1所示，本品多呈皺縮團狀或鐘狀，完全展開的花瓣呈倒三角型形，長3.0～5.0 cm，寬1.5～3.0 cm；表面有縱向紋理，呈放射狀，為淺黃色，靠近邊緣處有分叉；花瓣顏色以紫色為主調，深淺不一，偶見淺黃色，內面基部呈黃綠色，花瓣數15～25瓣；花萼5裂，長1～1.5 cm，表面被星狀柔毛覆蓋，闊卵形狀裂片；雄蕊多數，聯合成管狀，包裹花柱，長1.0～1.5 cm，花藥柄長0.3～0.7 cm。柱頭呈黃綠色，柱頭頭狀，子房5室，花柱先端5裂。氣微香，味甘淡。注：木芙蓉花外觀顏色和形狀與花期和品種有關。其中花期決定花瓣顏色，開花初起為白色或淡黃色，花盛開時顏色變深至紫色，采收受花期影響顏色不一致；而花瓣數量與品種相關，藥用一般為重瓣木芙蓉。

2.2顯微鑒別取少許60目過篩的木芙蓉花粉末放置于干燥透明的載玻片上，攤平放置，觀察粉末色澤，再滴入1～2滴水合氯醛試液，置于燃燒著的酒精燈上，加熱使其透化，反復以上動作1～2次，直至透化完全，然后滴入1～2滴稀甘油使其分散，用蓋玻片敷蓋好，最后放置于顯微鏡下，觀察其粉末顯微特征。結果如圖2所示。

粉末顏色呈紫紅或暗紫色，偶見土黃色。花冠水平表皮細胞呈長方形或不規則狀，垂直周壁呈微波狀扭曲，氣孔為直軸式，邊緣具有許多以4～7個單細胞非腺毛組成的放射狀腺毛，其壁平滑。薄壁細胞呈多邊形或矩形，可見螺紋導管。

花粉粒呈球狀，外壁有大量尖刺突起。花粉囊內壁細胞加厚，呈棱形，外表面為多角形，呈肋條狀壁加厚；花絲細胞呈長條形，具螺紋狀導管。

完整的腺毛細長呈圓錐形，腺頭略成三角形，2～3細胞，腺柄7～11個細胞，內含大量淡黃色分泌物。草酸鈣簇晶較小，呈長方塊狀、菱形以及多邊形狀，棱角微尖。

2.3薄層色譜鑒別黃酮類成分是木芙蓉花的主要活性成分，本研究以蕓香苷作為黃酮類成分的代表性成分對木芙蓉花進行定性質量控制。

2.3.1對照品溶液的制備蕓香苷對照品10 mg，加15 mL甲醇，放入超聲波清洗儀中輔助溶解，放入20 mL容量瓶中，加甲醇定容，制成每1 mL含0.5 mg的溶液，即為對照品溶液。

2.3.2供試品溶液的制備稱取木芙蓉花藥材粉末0.5 g放入100 mL錐形瓶中，加入30 mL甲醇，塞緊，放入超聲波清洗儀中超聲30 min（300 W，40 kHz），濾過，蒸干濾液，加水15 mL將殘渣溶解，加入20 mL氯仿，振搖提取，棄去下部氯仿溶液，水液層加入水飽和正丁醇25 mL，振搖提取，棄去下部水溶液，分取上部正丁醇溶液，放在水浴鍋上加熱蒸干，最后加2 mL甲醇溶解殘渣，即得供試品溶液。

2.3.3檢測方法依次吸取對照品溶液和10批木芙蓉花供試品溶液1 μL，點于同一以4%CH3COOHNa為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲酸-水-丙酮（15∶2∶3∶7）為展開劑，直接展開，取出，晾干，噴以10%的硫酸乙醇液，置于提前預熱好105 ℃的烘箱中加熱至呈現清晰斑點，置紫外燈（365 nm）下檢視。結果如圖3所示。由圖可知，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的黃綠色熒光斑點。

2.4水分和水溶性浸出物檢查根據2020版《中國藥典》［9］四部通則0832水分測定法第二法（烘干法）測定10批樣品，主要操作如下：取木芙蓉花供試品3 g，取干燥至恒重的扁形稱量瓶，將木芙蓉花藥材平鋪于中，供試品厚度要低于5 mm，精密稱定，將瓶蓋打開，用烘箱烘干干燥5 h，溫度設為100～105 ℃，蓋好瓶蓋，移放至玻璃干燥器中，放涼冷卻30 min，精密稱定，再烘干干燥1 h，溫度依舊為上述溫度，載放入玻璃干燥器中冷卻，稱重，當連續兩次稱重的差異小于5 mg時，實驗結束。根據減失的重量，計算供試品中含水量（%）。

按2020年版《中國藥典》方法測定，10批木芙蓉花中水含量為8.73%～11.80%，平均值為10.10%；水溶性浸出物含量為 33.17%～49.80%，平均值為41.53%。結果見表1。

2.5含量測定

2.5.1系統適應性考察色譜條件色譜柱：Diamonsil C18（ODS）；柱溫：30 ℃；流動相：甲醇-1%冰醋酸溶液（35∶65）；流動速率：1 mL·min-1；檢測波長：257 nm；進樣量：10 μL。理論板數按蕓香苷峰計算應不得低于2000。系統適應性色譜圖如圖4所示，橫坐標為時間（min），縱坐標為吸收度值（A）。

2.5.2對照品溶液的制備取對照品蕓香苷（蘆丁）10 mg，精密稱定，至100 mL容量瓶，加入適量甲醇，用超聲波清洗儀（功率：300 W，頻率40 kHz）溶解，定容至刻度線，搖勻，即得蕓香苷對照品溶液。

2.5.3供試品溶液的制備分別取不同批次的木芙蓉花粉末1 g，精密稱定，至100 mL圓底燒瓶，精密加入50%甲醇溶液50 mL，稱定其重量，回流提取（30 min），放涼，稱重，補足失重，濾過，精密量取續濾液2 mL，置于10 mL容量瓶中，50%甲醇定容至刻度線，即得木芙蓉花供試品溶液。

2.5.4線性關系考查精密吸取對照品溶液1 mL、1 mL、1 mL、1 mL、2 mL，分別置于50 mL、25 mL、10 mL、5 mL、5 mL容量瓶中，加乙醇稀釋成不同濃度的對照品溶液，按上述色譜條件進樣分析。以蕓香苷（蘆丁）進樣量（X）對峰面積積分值（Y）進行線性回歸，得回歸方程為Y=2.0×107X-189379（r=0.9996，n=6）。結果表明，蕓香苷（蘆丁）進樣量在0.0188～0.9412 μg范圍內與峰面積積分值呈良好線性關系。

2.5.5精密度試驗按上述色譜條件對照品溶液反復進樣6次，記錄峰面積并計算RSD值。結果顯示，蕓香苷峰面積RSD=0.677%（n= 6），表明儀器精密度良好。

2.5.6穩定性試驗在上述色譜要求條件下，取同一供試品溶液適量，分別于0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h時進樣測定。測得出蕓香苷峰面積積分值的RSD=0.519%（n=6），表明供試品溶液在24 h內，其穩定性良好。

2.5.7重復性試驗分別精密稱取同一批木芙蓉花樣品對其進行重復性試驗（購自安徽亳州藥材市場，樣品4號）適量，按“2.5.3”項下方法制備供試品溶液，照上述色譜條件的要求測定。結果，RSD= 0.859%（n= 6），表明方法重復性良好。

2.5.8加樣回收率試驗精密稱取已知含量的木芙蓉花藥材樣品（蕓香苷含量為0.0373 mg·g-1）適量，共10份，分別精密加入一定量的蕓香苷對照品，按“2.5.3 ”項下方法制備供試品溶液，照上述色譜條件測定蕓香苷含量，并計算加樣回收率。結果見表3。

2.5.9樣品含量測定取適量各個批次木芙蓉花樣品，精密稱定，按“2.5.3”項下方法制備供試品溶液，照上述色譜條件測定，計算出每批木芙蓉花藥材中的蕓香苷含量。經計算10批樣品中，蕓香苷（蘆丁）含量最高為38.9 μg·g-1，最低為11.9 μg·g-1，平均值為27.38 μg·g-1。結果見表4。

3討論

3.1薄層鑒別試驗發現，藥材本身色素等成分大極性成分以及其他各種非極性成分會影響實驗結果，因此需要適當對藥材進行進一步脫色、分離處理，查閱相關研究［10］發現甲醇相比乙醇對蕓香苷的溶解效果更好，故將提取溶劑換為甲醇。超聲提取和回流提取對供試品制備基本無差別，但超聲提取較方便，故選擇超聲提取。

3.2含量測定比較了超聲提取法和熱回流法兩種供試品溶液制備方法，熱回流法效率明顯高于超生提取法，因此選擇回流法作為供試品提取方法。通過查閱文獻［11-12］ ，同時測定木芙蓉花的蕓香苷含量有多種流動相選擇，通過試驗，最終確定了在該條件下測定二者含量，其分離效果好，基線平穩，重復性好，達到了含量測定的目的。本法重復性好、操作簡便，可為木芙蓉花質量控制提供依據。

3.3不同批次木芙蓉花質量比較通過對不同產地批次的木芙蓉花的外觀形狀、顯微、薄層色譜、水分、灰分、蕓香苷（蘆丁）含量進行研究發現，各產地的木芙蓉花基原一致，定性鑒別、一般雜質等質量檢查結果較為統一。但是花作為入藥部分，在外觀鑒別、含量測定方面會出現差異。通過對10批次的藥材研究發現，9號木芙蓉花的外觀形狀，顯微粉末特征、蕓香苷（蘆丁）含量均與其他批次有明顯差異，初步分析其原因，主要是該批次花朵顏色整體較淺，查閱文獻，發現木芙蓉花的花期決定其顏色，而顏色深淺恰好與木芙蓉花中的黃酮成分（黃酮醇苷及花色素）含量有關，因此在對木芙蓉花采集方面建議在花盛開時采收。

此外，研究木芙蓉花中蕓香苷（蘆丁）含量明顯少于木芙蓉葉中其含量，但是也有文獻表明，木芙蓉花中總黃酮的含量高于葉，因此在木芙蓉花的含量測定指標方面是否需要增加其他的有效成分指標，尚需進一步研究。參考文獻

［1］國家藥典委員會.中國藥典（一部）［S］.北京：中國醫藥科技出版社，2020：63.

［2］孫藝銘，石小慶，劉曉莉，等.木芙蓉研究進展［J］.綿陽師范學院學報，2021，40（11）：78-82.

［3］邾枝花，夏倫祝.木芙蓉研究進展［J］.安徽醫藥，2005（5）：324-325.

［4］ISHIKURA N. Flavonol glycosides in the flowers of Hibiscus mutabilis f. oversicolor［J］. Agricultural and Biological Chemistry，1982，46（6）：1705-1706.

［5］夏曉旦，黃婷，薛嫚，等.木芙蓉化學成分與藥理作用的研究進展［J］.中成藥，2017，39（11）：2356-2360.

［6］中華人民共和國衛生部藥典委員會.中華人民共和國衛生部藥品標準（中藥材第1冊）［S］.北京：化學工業出版社：1992：17.

［7］陳云，趙紅英，王貴發，等.高速逆流色譜分離純化木芙蓉葉中蕓香苷［J］.醫藥導報，2013，32（6）：4.

［8］黃尚榮.藥用蕓香苷（蘆丁）化學成分提取方法及其藥理學研究進展［J］.現代農業科技，2009（23）：3.

［9］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（四部）［S］.北京：中國醫藥科技出版社，2020：114-115.

［10］姚昕利，舒文將，李鶴，等.響應面法優化超聲波輔助提取桂北金槐米中蕓香苷工藝［J］.江蘇農業科學，2019，47（2）：4.

［11］陳貞干，唐小梅，陳遠道，等.木芙蓉提取物中蕓香苷含量的高效液相色譜法測定［J］.湖南文理學院學報（自然科學版），2010，22（3）：4.

［12］沈平，黃道平，謝燕湘.高效液相色譜法測定木芙蓉葉中蕓香苷含量的研究［J］.實用預防醫學，2008，15（1）：3.

（收稿日期：2023-02-03編輯：陶希睿）