基于特異性調控的氟苯尼考與氟苯尼考胺寬譜免疫分析方法研究

周文玥，楊金易，張詠儀，李然，王弘，徐振林，田元新 ，沈玉棟

1(華南農業大學食品學院，廣東省食品質量安全重點實驗室，廣州 5106422）2(南方醫科大學藥學院，廣東省新藥篩選重點實驗室，廣州 510515）

1 HPLC-MS/MS 方法的建立

取豬肉樣品，分別添加已知濃度的氟苯尼考和氟苯尼考胺標準品，進行前處理并凈化后采用icELISA 方法與HPLC-MS/MS 方法同時測定，進行結果比對。

色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm×150 mm，2.7 μm)；流速：0.5 mL/min；柱溫：40℃；進樣量：10 μL；流動相：A 為水溶液，B 為乙腈溶液；梯度洗脫程序：0~7.5 min，35%~95% B；7.5~9.5 min，95% B；9.5~9.6 min，95 %~35% B；9.6~12 min，35% B。

質譜條件：電噴霧電離（ESI）；掃描方式：ESI 負模式（0 min~6 min）和ESI 正模式（6 min~12 min）；監測模式：多反應監測(MRM)；霧化氣、氣簾氣、輔助氣、碰撞氣均為高純氮氣；氟苯尼考和氟苯尼考胺定量離子對、定性離子對、去簇電壓、碰撞氣能量等參數如下表：

表S1 HPLC-MS/MS方法檢測條件Table S1 The detection conditions of HPLC-MS/MS

2 兩種方法檢測結果準確度的相關性

以HPLC-MS/MS 所測得的氟苯尼考及氟苯尼考胺濃度為Y 軸，以icELISA 測得的氟苯尼考及氟苯尼考胺濃度為X 軸，繪制散點圖。對兩種方法的測定結果進行線性回歸分析，結果表明如下圖所示。回歸方程為：y=0.99x-1.68，R2為0.99，說明建立的icELISA 方法的測定結果準確可靠。

圖S1 icELISA 與HPLC-MS/MS 方法檢測結果準確度的相關性Fig S1 The correlation between the accuracy of detection results using icELISA and HPLC-MS/MS methods

3 抗體性能

3.1 抗體純化

采用辛酸-硫酸銨沉淀法純化兔血清后，經SDS-PAGE 電泳圖分析（圖 S2），純化前的兔血清雜帶較多，純化后雜帶減少且在55KD 和25KD 處清晰可見抗體重鏈和輕鏈。

圖 S2 多克隆抗體純化SDS-PAGE 電泳鑒定Fig.S2 SDS-PAGE analysis of purification of polyclonal antibody

3.2 抗體特異性

表S2 icELISA方法對氟苯尼考、氟苯尼考胺及其結構類似物的交叉反應率Table S2 CRs of Florfenicol, Florfenicol amine and its analogs by icELISA method

3.3 精密度與穩定性