毛竹林下靈芝栽培品種篩選研究

田蘇奎，柳新紅，蔣俊，潘永柱，曾凡清，杜平海，丁利超，應國華，呂明亮

（1. 縉云縣林業技術推廣站，浙江 縉云 321400；2. 浙江省林業技術推廣總站，浙江 杭州 310004；3. 麗水市農林科學研究院，浙江 麗水 32300；4. 麗水市林業技術推廣總站，浙江 麗水 323000）

靈芝Ganodermalucidum是一種名貴的藥用真菌，具有抗腫瘤、護肝、抗病毒、抑菌、抗氧化等多種藥效，民間稱之為“仙草”。隨著靈芝藥用功效被不斷發現和證實，以及人們保健意識的不斷提高，對靈芝及其產品的需求量也逐年大幅增加[1]，這一現象促進了靈芝人工栽培規模的擴大。靈芝栽培模式也從段木大田栽培向林下栽培方式擴展。靈芝的林下栽培因其不受農田面積限制、環境質量優良、產品品質高[2]等優點而越來越受到重視。林下靈芝段木栽培主要技術來源于大田段木栽培，其主栽品種也是從常規段木栽培中引入。目前，有高靈芝多糖和三萜含量的適合精深加工專用的靈芝品種[3]、靈芝盆景專用品種[4-5]的選育研究，還沒有專門適于林下栽培靈芝品種的研究。同時，靈芝林下栽培因受地理位置、海拔、氣候、土壤等生態環境條件影響，以及山地林下栽培設施相對簡化，并進行適度連作，與傳統的大田栽培模式有顯著的不同。在毛竹Phyllostachysedulis林進行靈芝栽培同樣需要適宜在毛竹林山地下栽培的專用靈芝品種，因此，開展毛林下靈芝栽培品種的篩選，通過在毛竹林下的全程栽培考察，以菌絲生長態勢、靈芝子實體和孢子粉產量，產品的多糖和三萜含量等作為評價指標，對靈芝專用品種進行篩選研究，為毛竹林下靈芝栽培提供技術支持，助推毛竹林下靈芝栽培產業發展。

1 材料和方法

1.1 供試品種

試驗所用靈芝品種共4 種，分別為‘靈芝119’‘靈芝19’‘靈芝29’和‘靈芝39’。

‘靈芝119’：引自龍泉市謝良明靈芝菌種場，是目前龍泉靈芝大田段木栽培的主要品種，為對照品種；‘靈芝19’：從浙江菇爾康生物科技有限公司基地栽培的‘靈芝119’（種源來自龍泉市謝良明靈芝菌種場）中優選分離菌株，與‘靈芝119’同源；‘靈芝29’：由麗水市農林科學研究院從國內30 余個靈芝品種中篩選出的品種；‘靈芝39’：麗水市白云山森林公園靈芝野生種組織分離經篩選獲得，麗水市農林科學研究院保存。

1.2 方法

1.2.1 不同靈芝品種菌絲生長速度比較

（1）木屑基質菌絲生長速度比較

為考察菌絲生長速度，通過在人工配制的均一培養基上培育靈芝，對其生長速度進行檢測，反映各菌株的菌絲生長性能。試驗選用木屑培養基的配方為：雜木屑74%、麩皮25%、石膏粉1%，含水量在53%。采用折徑為15 cm×55 cm 的筒袋裝料，常壓滅菌培養料溫度達100 ℃，保持11 h。料棒滅菌并冷卻后分別接入‘靈芝119’‘靈芝19’‘靈芝29’和‘靈芝39’的菌種，每棒接種4 孔，2021 年12 月26 日接種，后在大棚中培養，各品種隨機抽取8 支菌棒定時用記號筆劃線，記錄1 月21—29 日菌絲每日的生長距離，計算菌絲生長速度。

（2）段木基質菌絲生長比較

段木基質選青岡Cyclobalanopsisglauca的木段，將其截成長約20 cm 的段，用折徑為30 cm 的靈芝專用栽培筒裝袋，100 ℃常壓滅菌培養料，保持48 h。2022 年2 月26 日分別接入‘靈芝119’‘靈芝19’‘靈芝29’和‘靈芝39’的菌種，觀測記錄菌絲生長情況，隨機抽取10 袋，采用菌絲生長覆蓋段木表面積、雜菌污染數量進行評價。

1.2.2 不同靈芝品種的出芝率、孢子粉和子實體產量比較 將青岡木段按長度20 cm 左右截成段，裝入折徑為30 cm 靈芝專用栽培筒，兩端用纖維繩扎好，100 ℃常壓滅菌，保持48 h。分別冷卻后接入‘靈芝119’‘靈芝19’‘靈芝29’和‘靈芝39’的菌種，培養到菌絲發滿袋后用于覆土出芝[6]。

出芝試驗點設置在麗水市縉云縣新建鎮豐山村竹林靈芝栽培基地，海拔500 m，東南坡向的毛竹山，用挖機對毛竹林地進行水平帶平整，水平帶寬約4.5 m，兩側留毛竹用于遮蔭，中部3.5 m 范圍內毛竹采伐、挖去竹根與竹蔸，用竹條搭一寬3 m，高2 m 的栽培拱棚，棚上蓋薄膜，薄膜上蓋一層遮陽網，棚內松土深30 cm，棚內做兩條1 米寬的陽畦，中部設一走道，寬0.5 m，在每畦上挖兩行深18 ～ 20 cm 的凹槽，間距10 cm，用利刀割破塑料袋取出靈芝菌段，按不同品種，依次臥放排列在凹槽內，每兩個菌段間距8 ～ 10 cm，空隙處填上土，然后在菌段表面鋪上厚2 cm 的細土。每一小區22 段，每棒質量在7 kg 左右，一個小區總質量在155 kg 左右，隨機排列，重復3 次。

5 月10 日菌絲發滿菌袋，5 月20 日脫袋覆土，到6 月8 日和6 月12 日，觀測出芝情況，6 月24 日通過疏芝，每一菌段留1 朵靈芝，7 月25 日對靈芝進行套筒集粉，經過近2 個月的套筒集粉管理，于9 月22 日采收靈芝和靈芝孢子粉，分別把靈芝和孢子粉在太陽下曬干，統計產量。

1.2.3 不同品種的子實體形態比較 從‘靈芝119’‘靈芝19’‘靈芝29’和‘靈芝39’段木栽培試驗采收的靈芝中，從每個品種隨機抽取15 個靈芝子實體，對芝蓋直徑（縱徑與橫徑的平均）、厚度（芝蓋的邊緣厚度），芝柄直徑（柄粗）、長度（柄長）等外觀數據進行檢測，并對芝蓋表面顏色進行比較。

1.2.4 不同品種的孢子粉多糖和三萜含量比較 ‘靈芝19’是來源于‘靈芝119’，又用相同的段木基質栽培，靈芝孢子粉具有相同品質，所以在檢測時只選其中之一。選取‘靈芝29’和‘靈芝119’段木栽培采收的靈芝孢子粉烘干，按檢測要求送譜尼測試集團上海有限公司，按《保健食品功效成分檢測方法》（2011 年版）進行多糖與三萜含量檢測[7]。

1.2.5 不同品種的子實體三萜含量 選用‘靈芝19’和‘靈芝39’段木栽培采收的靈芝子實體，進行三萜含量測定，所檢測的17 種三萜類化合物分別是：烯酸C、靈芝酸C2、靈芝酸G、烯酸B、靈芝酸B、烯酸A、靈芝酸A、靈芝酸H、赤芝酸A、烯酸D、靈芝酸D、靈芝酸F、酮三醇、DM、靈芝醇F、靈芝醇B、靈芝醛A，在麗水市農林科院食用菌所分析實驗室采用HPLC（高效液相色譜儀）檢測[8]。

1.2.6 數據分析 采用SPSS Statistics19 對試驗數據進行統計分析，采用單因素方差分析各處理差異的顯著性水平，采用最小顯著差數法（P<0.05，LSD）進行不同處理間均值的差異顯著性比較。

2 結果與分析

2.1 不同靈芝品種的菌絲生長速度比較

2.1.1 不同靈芝品種在木屑基質上的菌絲生長速度 1 月21—29 日，4 個靈芝品種在木屑基質上每日的菌絲生長量見表1。由表1 可知，4 個靈芝品種菌絲的平均生長速度差異明顯，其中，‘靈芝29’菌絲的生長速度最快，達4.98±0.32 mm·d-1，與其他3 個品種菌絲的生長速度有顯著差異（P<0.05），較‘靈芝119’快34.6%，‘靈芝19’‘靈芝39’‘靈芝119’間的菌絲生長速度無顯著差異。

表1 4 個靈芝品種8d 的菌絲生長量Tab. 1 Mycelium growth of 4 G. lucidum cultivars within 8 days

2.1.2 不同靈芝品種在段木基質上的菌絲生長速度比較 于2022 年4 月11 日，翻堆，挑出感染雜菌的袋包，估測菌絲覆蓋面積，結果統計見表2。4 個品種在段木基質中菌絲生長情況見表2。表2 可見，在木屑培養基菌絲生長最快的品種29，在段木基質上菌絲生長同樣最快（覆蓋面積比例最大），其次分別為‘靈芝19’‘靈芝119’和‘靈芝39’，與木屑基質排序略有不同；而且‘靈芝29’的成品率高于‘靈芝119’‘靈芝19’‘靈芝39’的成品率，說明菌絲生長快有助于提高菌包制作的成品率。

表2 4 個靈芝品種菌絲覆蓋面積及成品率Tab. 2 Mycelium coverage area and yield of 4 G. lucidum cultivars

2.2 不同靈芝品種的出芝率、孢子粉和子實體產量

2.2.1 不同靈芝品種的出芝率比較 對6 月8 日和6 月12 日的靈芝出芝情況觀察，4 個品種的出芝數和出芝率見表3。表3 可見，從6 月8 日出芝數統計可以發現，‘靈芝29’和‘靈芝39’的出芝數較多，特別是‘靈芝29’表現更為明顯，出芝相對較早；6 月12 日4 個品種的出芝數量從多到少依次為‘靈芝39’‘靈芝119’‘靈芝29’和‘靈芝19’，但每個菌段都生長有1 個以上靈芝，出芝率均達到100%，說明4 個品種均具備生產所需的出芝能力。

表3 4 個靈芝品種的出芝率Tab. 3 Germination rate of 4 G. lucidum cultivars

2.2.2 不同靈芝品種的孢子粉產量比較 表4 可見，靈芝孢子粉的產量以‘靈芝29’最高，其次為‘靈芝39’、‘靈芝19’和‘靈芝119’‘靈芝29’孢子粉的平均產量為1 080±36 g·段-1，比對照‘靈芝119’的產量高12.3%，與對照‘靈芝119’和‘靈芝19’間存在顯著差異（P<0.05），‘靈芝39’孢子粉的平均產量為1 024±53 g·段-1，比對照‘靈芝119’高6.4%，兩者間無顯著性差異。

表4 4 個靈芝品種的孢子粉產量Tab. 4 Spore powder yield of 4 G. lucidum cultivars

2.2.3 不同靈芝品種的子實體產量 表5 可見，4 個靈芝品種的子實體產量從高到低依次是‘靈芝29’‘靈芝19’‘靈芝119’和‘靈芝39’，通過對試驗產量的統計，發現‘靈芝29’的子實體產量為1 667±41 g·段-1，與‘靈芝39’子實體的產量有顯著差異（P<0.05），與‘靈芝119’和‘靈芝19’間無顯著差異，‘靈芝39’與‘靈芝119’和‘靈芝19’間無顯著差異。

表5 4 個靈芝品種的子實體產量Tab. 5 Fruiting body yield of 4 G. lucidum cultivars

2.3 不同靈芝品種的子實體形態指標比較

4 個靈芝品種在毛竹林下段木栽培的子實體外觀形態指標調查見表6。表6 可見，4 個靈芝品種的蓋徑從大到小依次是‘靈芝29’‘靈芝119’‘靈芝39’‘靈芝19’，菌蓋厚度從大到小依次是‘靈芝19’‘靈芝39’‘靈芝119’‘靈芝29’，菌柄長度（柄長）從大到小的品種依次是‘靈芝119’‘靈芝19’‘靈芝39’‘靈芝29’，菌柄直徑（柄粗）從大到小的品種依次是‘靈芝119’‘靈芝39’‘靈芝19’‘靈芝29’。綜合來看，‘靈芝29’的子實體形態比較特別，蓋徑大，菌柄短，菌蓋厚度較薄，菌蓋色較淺，‘靈芝39’子實體的蓋徑中等，菌蓋較厚，菌柄較粗短，菌蓋色較深。‘靈芝119’子實體的蓋徑較大，菌蓋厚度一般，菌柄粗長，菌蓋顏色較深。

表6 4 個靈芝品種的子實體外觀數據Tab. 6 Morphological traits of fruiting bodies of four G. lucidum cultivars

2.4 不同靈芝品種的孢子粉多糖和三萜含量

‘靈芝29’和‘靈芝119’孢子粉的多糖和三萜含量檢測結果見表7。由表7 可見，‘靈芝29’孢子粉的多糖和三萜含量均比‘靈芝119’高，分別高25.73%、3.83%，說明‘靈芝29’的品質要好于‘靈芝119’。

表7 ‘靈芝29’和‘靈芝119’孢子粉多糖和三萜含量Tab. 7 Content of polysaccharides and triterpenes in spores of and G. lucidum ‘29’ and G. lucidum ‘119’

2.5 不同靈芝品種的子實體三萜含量 表8 可見，在‘靈芝19’和 ‘靈芝39’子實體中僅檢出了靈芝酸C2、靈芝酸G、烯酸B、靈芝酸B、靈芝酸A、靈芝酸H、靈芝酸D、靈芝酸F 共8 種三萜類化合物，未檢出烯酸A、烯酸C、烯酸D、赤芝酸A、DM、靈芝醇F、靈芝醇B、靈芝醛A；在檢出的靈芝酸G、靈芝酸A、靈芝酸H、靈芝酸D、靈芝酸F 中，在‘靈芝39’子實體中的含量明顯高于‘靈芝19’；靈芝酸C2、烯酸B、靈芝酸B、酮三醇在‘靈芝39’子實體中可檢出，但在‘靈芝19’中未檢出；總三萜含量‘靈芝39’是‘靈芝19’的7.88倍。可見從野生靈芝中篩選的‘靈芝39’，其子食體中含有的三萜種類多于‘靈芝19’、含量高于‘靈芝19’，是難得的子實體高三萜品種。

表8 ‘靈芝19’和‘靈芝39’子實體的三萜含量Tab. 8 Triterpenoids content in fruit body of G. lucidum ‘19’ and G. lucidum ‘39’

3 結論與討論

3.1 結論

本文主要對引進品種‘靈芝29’和麗水當地野生分離品種‘靈芝39’，從木屑基質和段木基質菌絲生長、制包成品率，子實體形態、孢子粉產量、子實體產量和活性成分等指標進行評價。結果發現，‘靈芝29’具有發菌快，栽培菌段制作成品率高，孢子粉產量高的優點，是目前毛竹林下靈芝栽培收獲孢子粉的優選品種。

野生馴化品種‘靈芝39’雖然子實體產量比對照品種‘靈芝19’低2.83%，但子實體中的三萜含量是‘靈芝19’的7.88 倍，且含有‘靈芝19’所沒有的靈芝酸C2、烯酸B、靈芝酸B、酮三醇等成分，同時該品種的孢子粉產量略高于對照品種‘靈芝19’，是毛竹林下靈芝栽培收獲子實體的優選品種，也說明從野生的靈芝種質，可以篩選到子實體三萜含量較高的靈芝品種。

3.2 討論

目前，未見林下栽培靈芝的專用品種，主要引用自大田靈芝栽培的品種，本次試驗的品種‘靈芝119’在毛竹林下栽培的品種對比中表現并不突出，可能是林下與大田的栽培環境條件不同導致的，因此毛竹林下栽培的靈芝品種不應完全照搬大田栽培品種。為推進毛竹林下靈芝的發展，可以通過從野生靈芝分離和收集現有大田栽培品種在毛竹林下栽培進行系統篩選，更需要開展雜交等育種方法以獲得更多適合毛竹林下栽培的優良品種。本次研究選用的品種是基于大田栽培靈芝使用的品種，數量偏少；品質評價時只對2 個品種孢子粉的多糖和三萜含量、2 個品種子實體中的三萜含量進行了測定，更多的靈芝品種間的比較還有待進一步深化研究。