白囊耙齒菌5種不同開口方式栽培的效果比較

李 健 劉義勇 胡志強 杜忠偉 王 旭 王 鑫*

（1. 延邊朝鮮族自治州農業科學院，國家食用菌產業技術體系延吉綜合試驗站，吉林 延吉 133000；2. 梨樹縣森林病蟲害防治中心，吉林 延吉 133000）

白囊耙齒菌（Irpexlacteus），俗稱白耙齒菌，是一種藥用真菌，分類學上隸屬于擔子菌亞門（Basidiomycetes）、層菌綱（Hymenomycetes）、非褶菌目（Aphyllophorales）、多孔菌科（Polyporaceae）、耙齒菌屬（IrpexFr.）[1]。其廣泛分布于吉林、黑龍江、四川、云南和西藏等地，是一種常見的野生木腐真菌[2]。白囊耙齒菌主要生長在闊葉樹倒木、枯立木、枯枝上，子實體一年生，菌蓋呈瓦片狀平伏或堆疊式覆蓋（圖1），形似貝殼，或自然反卷，形似屋檐，偶爾側向生長聯合。菌蓋呈白色、奶油色或淡黃色，可能生長密集絨毛或硬毛；其外表光滑且有淺淺的溝紋，邊緣顏色均一，邊緣幼嫩的部分通常呈現孔狀、多角形，管口為薄壁結構。新鮮時質地是軟革質、性韌，具有特殊的淡香，而在干燥的過程中會收縮變堅硬，顏色漸變為淺咖色，沒有任何香味[3-4]。

圖1 野生白囊耙齒菌

白囊耙齒菌多糖具有出色的抗菌、消炎和利尿功效，目前已經研發出多種藥劑，如腎炎康和益腎康膠囊，用于治療腎炎[5]。此外，白囊耙齒菌還有較高含量的麥角甾醇和腺苷[6-7]。發酵中期的發酵液會散發出香氣，利用GC-MS分析技術可以檢測到30多種用于可日化和食品的香料成分[8]。

2013年，國內圖力古爾等首先嘗試白囊耙齒菌栽培[9]。本試驗通過篩選白囊耙齒菌最佳出菇開口方式，以期提高其人工栽培的產量與質量，為今后工廠化栽培奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 供試菌種

白囊耙齒菌‘IL-W01’在汪清縣仲坪鄉采集分離獲得，保藏在延邊朝鮮族自治州農業科學院食用菌研究所。

1.2 主要試劑和儀器

葡萄糖、瓊脂、75%酒精、95%酒精等均為國產分析純。上海博迅YXQ-100A立式壓力蒸汽滅菌器，連云港國鑫GXMQ-EE-9.7JS培養基滅菌器，蘇州安泰SW-CJ-1BU潔凈工作臺，上海精宏DNP-9272電熱恒溫培養箱，濟南普朗特PLT-G50全自動定量灌裝機，天津泰斯特DZ-10LⅢ蒸餾水器，上海雷磁PHS-3C pH計，常熟雙杰JJ223BC分析天平，青島海爾HYC-390F冷藏冷凍箱，黑龍江千珍源傳送帶開口機。

1.3 母種制作

PDA培養基：馬鈴薯200 g、瓊脂粉20 g、葡萄糖20 g、水1 000 mL。

稱取馬鈴薯200 g切條放入鍋中，加入蒸餾水1 000 mL煮沸，用三層濾布過濾，留取濾液倒回鍋中，加入瓊脂粉20 g、葡萄糖20 g，加蒸餾水定容至1 000 mL，倒入全自動定量灌裝機中繼續加熱攪拌均勻后，即可將培養液灌裝至20 mm×200 mm玻璃試管中，灌裝至1/4試管高度，塞上海綿塞，在立式壓力蒸汽滅菌器中121 ℃滅菌30 min后擺放斜面，待培養基冷卻凝固后在潔凈工作臺中接入白囊耙齒菌菌種，在電熱恒溫培養箱中28 ℃避光培養，早晚各通風一次。

1.4 原種（作栽培種）制作

培養基配方：二級菌專用枝條90%、輔料木屑7.8%、麥麩2%、白糖0.1%、石膏粉0.1%。

將主料二級菌專用枝條用石灰水浸泡24 h后，與經加水攪拌均勻的木屑、麥麩、白糖和石膏粉等輔料充分混合，使其含水量保持在60%～65%，并用白灰（熟石灰，CaO）調節pH至8。裝袋時先在16 cm×37 cm×0.004 cm聚乙烯二級菌袋底部鋪上一層輔料，再裝與輔料混合的二級菌專用枝條，最后再鋪一層輔料，裝袋要緊實，裝好后蓋上無棉蓋體，每袋裝干料0.5 kg。

裝好袋的培養基置于高壓滅菌器中121 ℃滅菌120 min，待冷卻后在潔凈工作臺中接入試管中1/10量的白囊耙齒菌母種，在恒溫培養箱中28 ℃避光培養20天，并早晚各通風5 min。

1.5 栽培袋制作

培養料配方：雜木屑86.5%、稻糠10%、豆粉2%、石膏粉1%、石灰粉0.5%，含水量60%～65。

原料加水攪拌混合均勻，含水量以用手緊握有水滴落為宜，用裝袋機裝入規格為17 cm×36 cm、厚0.004 cm的聚乙烯栽培袋中，每袋裝干料0.75 kg，并置于高壓滅菌器中121 ℃滅菌120 min。待冷卻后在潔凈工作臺中接入1根白囊耙齒菌原種枝條，在培養室中避光培養，初期保持溫度在28～30 ℃，控制CO2濃度在0.04%以下，空氣濕度在65%以下。8天后保持溫度在25～30 ℃，培養20～30天長滿菌袋。菌絲長滿后直接進行出菇管理。

1.6 出菇管理

（1）栽培方式。白囊耙齒菌可選用層架栽培或者地擺栽培出菇，本試驗采用層架栽培和地擺栽培相結合的方式進行，第一潮菇采收之前為溫室層架式栽培，采收后轉移到室外大棚地擺式栽培，之后進行第二潮菇出菇管理。

（2）開口方式。將栽培袋在溫室層架擺放5天，待菌絲恢復潔白時開始開口，準備出菇。開口方式，立袋出菇設開“/”口、大“V”口和小“-”口，臥袋出菇設開大“—”口和敞口，共5種開口方式。每種開口方式100袋，比較子實體產量和商品性狀。開口前使用75%酒精對電動開口機刀頭和壁紙刀進行消毒處理。

①“/”口：用壁紙刀每袋開10個“/”口，分4豎排（2個、3個、2個、3個）分布菌袋側面。

②大“V”口：用壁紙刀每袋開10個大“V”口，（2個、3個、2個、3個）分布菌袋側面。

③小“-”口：在菌袋側面用黑木耳電動開口機開小“-”口，開10豎排，每豎排26個，共260個小“-”口。

④大“—”口：在菌袋頂部用壁紙刀開大“—”口，開2橫排，共2個大“—”口。

⑤敞口：在菌袋頂部用手將袋口打開，敞口。

（3）出菇管理。待開口3天后開口處菌絲恢復潔白，開始噴水，保持環境濕度在65%左右，溫度在22～26 ℃。出現原基后加大噴水量，保持環境濕度在85%左右，待菌袋表面長出2～3 cm大小的白色突起，且長出絨毛狀子實層時進行采收。采收后晾干放在陰涼處保存。

第一潮菇采收后，由于溫室溫度太高，轉移到室外大棚地擺，停水3天，待菌絲恢復潔白后繼續噴水。為避免高溫期出菇降低子實體產量和商品性，在進入三伏后停水1個月，待溫度適宜后再繼續澆水，進行第二潮菇出菇管理。

1.7 數據測定與分析

每種開口方式取30袋，記錄原基形成、子實體形成、子實體成熟時間和子實體形態，測兩次采摘的子實體鮮重、干重，取平均值，采用Excel 2017進行數據整理，SPSS 25采用鄧肯分析法進行方差分析和差異顯著性分析。

2 結果與分析

2.1 子實體形成與成熟時間

5種開口方式子實體形成與成熟時間相差較大，以開口方式⑤最快，從菌袋開口至原基形成、子實體形成、子實體成熟的時間分別為8.00 d、12.67 d和45.67 d，其次是開口方式④和②，三者間原基形成時間無顯著差異，但子實體形成和成熟時間開口方式⑤與④、②之間差異顯著（表1）。開口方式③原基形成、子實體形成和成熟均最遲，比開口方式⑤分別遲5.67 d、8.66 d、10.00 d。5種開口方式按原基形成時間從快到慢排序，依次為⑤＜④＜②＜①＜③，顯示菌袋開口越大，形成原基越早。

表1 不同開口方式白囊耙齒菌子實體形成和成熟時間

表2 5種開口方式栽培的子實體產量

2.2 子實體形態

菌袋開口處培養料表面形成灰白色小突起，即為白囊耙齒菌原基，5種開口方式白囊耙齒菌均形成原基（圖2），但原基大小不同。5種開口方式按原基從小到大排序，依次為③＜①＜②＜④＜⑤，顯示菌袋開口越大，形成原基越大。

圖2 5種不同開口方式的白囊耙齒菌原基（上）和子實體（下）

5種開口方式栽培白囊耙齒菌子實體形態有所差異（圖2），其中①、②、④形態相似，呈聚集狀；⑤呈大朵狀，片大，邊緣有環帶；③呈散朵狀，根小，易于采摘，不粘連栽培料，且子實體形態好，商品價值高。

2.3 產量表現

5種開口方式栽培白囊耙齒菌，子實體平均鮮重、干濕比及生物轉化率均以開口方式⑤為高，分別為128.54 g/袋、1∶3.36和17.14%。開口方式③平均干重最高，為41.16 g/袋，子實體干濕比為1∶2.86，含水量較低，生物轉化率達15.70%。開口方式①各項指標均低，平均干重22.85 g/袋、鮮重56.15 g/袋，生物轉化率僅7.49%。生物轉化率由高到低，依次為⑤＞④＞③＞②＞①。5種開口方式栽培白囊耙齒菌生物轉化率均較低，未能完全轉化培養料中的養分。

3 結論與討論

目前，國內外對白囊耙齒菌的人工馴化栽培不同開口方式出菇的研究尚屬空白，國內僅報道圖力古爾等[9]人工馴化栽培獲得成功，但未提及產量，采用的是敞口出菇。

本試驗經對5種開口方式栽培白囊耙齒菌進行比較，結果顯示5種開口方式均能形成原基，并獲得成熟子實體，但在原基形成、子實體形成、子實體成熟時間，子實體形態和產量上均有差異。綜合各項結果，在日后栽培中可選擇開口方式⑤敞口和開口方式③小“-”口兩種開口方式，小“-”口與敞口的子實體成熟時間相差約10天，這可能與敞口方式開口大，容易接觸外界環境，致使生長發育較快有關。但敞口方式在澆水時易積水，高溫高濕易致雜菌污染率高，要注意控制溫度在26 ℃以下。小“-”口開口小，利于保水保濕，對不良環境耐受好，雜菌污染率低，可使用電動開口機開口，省時省力。子實體形態方面，敞口開口方式子實體呈大朵狀，片大，邊緣有環帶；小“-”口開口方式子實體呈散朵狀，根小、無栽培料粘連，易于采摘，且子實體形態好，商品價值高；其余3種開口方式①“/”口、②大“V”口和④大“—”口子實體形態相似，呈聚集狀。

本試驗篩選出白囊耙齒菌人工栽培適宜的出菇開口方式為敞口和小“-”口，為其人工栽培出菇開口方式提供了新的選擇。兩種開口方式產量上相近，但生物轉化率都很低，可能原因為白囊耙齒菌生長緩慢，在一個生長周期內不能完全轉化培養料中的養分，提高生物轉化率將是未來白囊耙齒菌栽培的主要研究方向。