茶提取物復(fù)合方對(duì)眼致病菌的抑制作用研究

李史儀，陸顯格，湛水秀，郝志龍，余文英*

1. 福建農(nóng)林大學(xué) 園藝學(xué)院，福建 福州 350002；2. 福建農(nóng)林大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，福建 福州 350002；3. 植物與微生物相互作用福建省高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建 福州 350002

近年來(lái)，由于人們高強(qiáng)度、高頻率使用電腦、電視與手機(jī)等視頻終端產(chǎn)品及晝夜使用空調(diào)，患有不同程度干眼癥的人的數(shù)量逐年上升，患病率為17% ～ 33%[1]。干眼癥（Dry Eye Syndrome，DES；或Xerophthailmia），因眼球表面水分、豁液和脂質(zhì)分泌不足造成淚液質(zhì)、量及動(dòng)力學(xué)的異常，引起淚膜不穩(wěn)定及眼表面的損害，從而表征為視久疲勞、眼酸脹、干澀無(wú)淚及異物感等[2]。干眼癥常與結(jié)膜炎、瞼緣炎并發(fā)，主要表現(xiàn)為眼干澀引起的淚液分泌量減少以及淚液殺菌成分的變化，進(jìn)而加重眼睛感染的概率，產(chǎn)生結(jié)膜炎、瞼緣炎等輕中度炎癥；而反過(guò)來(lái)，慢性炎癥引起瞼板腺堵塞進(jìn)而影響淚液分泌，使眼睛愈發(fā)干澀[3,4]。結(jié)膜炎和瞼緣炎常為各種細(xì)菌、蠕形螨等感染引起的感染性炎癥[5]。目前醫(yī)院西藥主流治療手段為滴加人工淚液和眼藥水兩種方法。人工淚液短期內(nèi)可改善干眼[6]，尤其是對(duì)眼睛術(shù)后引起的干眼療效好[7]，但其他原因引起的干眼治療效果并不穩(wěn)定，且若長(zhǎng)期使用易產(chǎn)生依賴性；眼藥水中人工化學(xué)藥物成分亦可能對(duì)人體產(chǎn)生副作用。常見(jiàn)的中醫(yī)治療方法有中藥內(nèi)服、中藥穴位敷貼、針灸及中藥熏蒸等。劉瑩等[8]利用補(bǔ)腎養(yǎng)肝明目方（由枸杞、黃精、菊花、熟地、白芍、太子參、麥冬、五味子、山藥、白蒺藜、丹參、當(dāng)歸、炙甘草等組成）治療，有效率達(dá)96.7%。謝琳等[9]報(bào)道采用益氣養(yǎng)陰活血法治療干眼病，有效率達(dá)82%。Ocak 等[10]亦發(fā)現(xiàn)中成藥芪明顆粒總有效率超過(guò)90%。

茶具有抗菌明目等功效，與茶葉中的茶多酚及其氧化產(chǎn)物、茶皂素、茶多糖、維生素C、維生素A 等成分密切相關(guān)[11]。蒲公英的黃酮類與多糖類等有良好的抗炎、抑菌殺螨以及保護(hù)肝臟的作用[12]。菊花具有疏風(fēng)清熱、平肝明目等功效，對(duì)金黃色葡萄球菌等有良好的抑制作用，已被用于干眼癥治療[13]。山茶油主要通過(guò)影響細(xì)胞壁與細(xì)胞膜的通透性，甚至破壞細(xì)胞膜的完整性以達(dá)到抑菌的效果[14]。由互葉白千層提取的白千層精油作為一種天然抑菌劑，含有單萜烯類、醇類及倍半萜烯類揮發(fā)性化合物。互葉白千層精油具有抗細(xì)菌和真菌的作用，還被添加至護(hù)眼貼中，被廣泛應(yīng)用于眼科疾病中螨蟲(chóng)性瞼緣炎的治療[15,16]。但目前干眼中草藥配方的開(kāi)發(fā)與應(yīng)用仍不多，且給藥方式主要以內(nèi)服湯劑為主。中藥熏蒸在短期內(nèi)對(duì)干眼癥有較顯著的療效，其不僅能夠改善局部眼干癥狀且在根本上給予輔助治療，無(wú)毒副作用[17]。

為拓寬中草藥給藥方式如霧化熏蒸理療，本研究篩選便于霧化的茶、蒲公英、菊花、山茶油、互葉白千層等草本，分別探討了4 種茶類（綠茶、紅茶、白茶、烏龍茶）提取物對(duì)S.aureus與E.coli等眼致病細(xì)菌的抑菌效果，以篩選出最佳抑菌茶類，并進(jìn)一步以此種茶類為主與其他中草藥按不同濃度進(jìn)行復(fù)配，測(cè)試復(fù)配方對(duì)眼科炎癥致病菌的抑菌效果，以期得到對(duì)眼科炎癥致病菌有較佳抑制效果的復(fù)合配方，并將此抑菌消炎配方應(yīng)用至干眼SPA 的霧化熏蒸理療中，從而為干眼癥的緩解治療提供一種新型的、天然的輔助性措施。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 草本

供試草本及草本提取液：茶葉（尤溪綠茶、尤溪白茶、尤溪烏龍茶、尤溪紅茶）、野菊花、蒲公英、互葉白千層精油（30%乙醇稀釋，濃度0.04 g/mL）、山茶油（30%乙醇稀釋，濃度0.04 g/mL）；茶葉由福建農(nóng)林大學(xué)園藝學(xué)院茶葉加工工程實(shí)驗(yàn)室提供，其余4 種購(gòu)于福州大參林藥店。

1.1.2 供試菌種

供試菌種：金黃色葡萄球菌（S.aureus）、大腸桿菌（E.coli）、青霉菌（Penicilliumsp.）和鐮刀菌（Fusariumsp.），保存于植物與微生物相互作用福建省高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。

1.2 方法

1.2.1 草本水提液的制備

將尤溪綠茶、尤溪紅茶、尤溪白茶、尤溪烏龍茶、菊花和蒲公英分別用小型超微粉碎機(jī)（KN-500A）磨碎，600 目過(guò)篩；4 種茶樣分別取5 g 于250 mL 滅菌三角瓶，加入無(wú)菌水150 mL，按茶水比1 ∶30（g/v）的比例在沸水浴中浸提45 min，制成1 ∶30（g/v）的茶浸提液。同法分別制成1 ∶10（g/v）的菊花與蒲公英浸提液。將以上各浸提液抽真空過(guò)濾，移裝于滅菌容量瓶，密封，置4℃冰箱備用。

1.2.2 菌種制備

S.aureus和E.coli分別接種于LB 液體培養(yǎng)基，37℃下培養(yǎng)18 h，并調(diào)節(jié)濃度1×106備用；Penicilliumsp.和Fusariumsp.分別接種于PDA瓊脂培養(yǎng)基，28℃下培養(yǎng)3 d，備用。

1.2.3 抑菌效果測(cè)定

采用濾紙圓片法（Kirby-Bauer test）。

單一草本對(duì)供試細(xì)菌的抑菌試驗(yàn)：將6 mm無(wú)菌濾紙片分別放入單一草本提取液中浸泡10 min，以無(wú)菌水中浸泡10 min 為對(duì)照（除山茶油及互葉白千層精油外），因精油用30%酒精做溶劑，因而在山茶油及互葉白千層精油中以30%的酒精浸泡10 min 做對(duì)照。E.coli或S.aureus菌懸液（1×106）200 L 分別均勻涂布于LB 平皿上，再將已浸泡10 min 的2 片濾紙片對(duì)稱置于距平皿圓心2 cm 處，37℃培養(yǎng)24 h，觀察并測(cè)量抑菌圈。

單一草本對(duì)供試真菌的抑菌試驗(yàn)：取6 mmPenicilliumsp.或Fusariumsp.菌餅接種于平皿中央，再夾取浸泡10 min 的2 片濾紙片對(duì)稱置于離真菌菌餅2 cm 處，28℃培養(yǎng)72 h，觀察并測(cè)量抑菌圈。

草本復(fù)配組合對(duì)供試細(xì)菌的抑菌試驗(yàn)：將初步篩選出的白茶與4 種草本蒲公英、菊花、互葉白千層精油、山茶油提取液按表1 組合進(jìn)行抑菌試驗(yàn)。

表1 以白茶為主的5 種草本提取液復(fù)配比例Table 1 Compound formulas ratio of 5 kinds of herbal extracts mainly based on white tea

抑菌圈測(cè)量與結(jié)果處理：用游標(biāo)卡尺以十字交叉法測(cè)量抑菌圈直徑，抑菌效果采用試驗(yàn)組抑菌圈直徑減去對(duì)照組抑菌圈直徑來(lái)計(jì)算，每次抑菌試驗(yàn)5 個(gè)平皿重復(fù)及3 次生物學(xué)重復(fù)。采用Excel 做方差分析。

1.2.4 茶和優(yōu)化復(fù)配方多酚測(cè)定

茶類多酚測(cè)定參照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 8313—2018《茶葉中茶多酚和兒茶素類含量的檢測(cè)方法》中的福林酚試劑法[18]。篩選出的2 種優(yōu)化配方中各組分用磨樣機(jī)磨碎，過(guò)40 目篩，按照所占比例稱取一定質(zhì)量的各組分于10 mL 離心管，其余步驟參照GB/T 8313—2018 中的福林酚試劑法[18]。

1.2.5 優(yōu)化配方抑菌穩(wěn)定性試驗(yàn)

熱處理對(duì)優(yōu)化配方抑菌效果的影響：取2種優(yōu)化配方的樣品液體提取物，分別于40℃、60℃、80℃下加熱45 min，采用濾紙圓片法測(cè)試對(duì)S.aureus和E.coli的抑菌效果。

紫外線對(duì)優(yōu)化配方抑菌效果的影響：取2種優(yōu)化配方液體提取物分別在紫外燈下照射10 min、20 min 和30 min，采用濾紙圓片法測(cè)試對(duì)S.aureus和E.coli的抑菌效果。

2 結(jié)果與分析

2.1 單方劑的抑菌效果

2.1.1 4 種單一茶提取液的抑菌作用

從4 種單一茶提取液的抑菌效果可看出，不同茶類的提取液對(duì)不同菌的抑制能力有一定 差異（圖1、圖3A）。前期制取1 ∶30、1 ∶50、1 ∶70 和1 ∶100（g/v）的茶水浸提液效果初篩抑菌效果發(fā)現(xiàn)，1 ∶30（g/v）茶水比最好。因此采用4 種茶類的1 ∶30 茶浸提液進(jìn)行抑菌效果比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)尤溪白茶對(duì)E.coli的抑制效果顯著大于其他3 種茶類（p＜ 0.05），抑菌圈直徑為11.9 mm；尤溪白茶對(duì)S.aureus的抑制效果亦大于其他茶類，且與紅茶差異顯著（p＜ 0.05），其抑菌圈直徑為11.8 mm。可見(jiàn)，尤溪白茶對(duì)常見(jiàn)眼科致病細(xì)菌的抑菌效果較好，故選擇尤溪白茶提取物進(jìn)行后續(xù)復(fù)配方試驗(yàn)。

圖1 4 種單一茶提取液的抑菌效果Figure 1 Effects of four kinds of single tea extracts on inhibiting growth of bacteria

2.1.2 4 種單一草本的抑菌作用

從其余4 種草本單一提取液的抑菌效果可看出，不同草本在對(duì)供試菌的抑制能力上表現(xiàn)出較大差異（圖2、圖3A、圖3B）。4 種單劑中，互葉白千層精油對(duì)E.coli的抑制效果顯著優(yōu)于其余3 種藥劑（p＜ 0.05），抑菌圈直徑為14.3 mm；對(duì)S.aureus，互葉白千層精油的抑菌圈直徑為12.7 mm。互葉白千層精油對(duì)于眼科致病真菌（Penicilliumsp.和Fusariumsp.）均有一定抑制作用（圖3C），而其余3 種提取物對(duì)供試的Penicilliumsp.和Fusariumsp.無(wú)抑制效果。

圖2 4 種單一草本提取液的抑菌效果Figure 2 Effects of four single herbal extracts on inhibiting growth of bacteria

圖3 各單一提取液抑菌效果Figure 3 Antibacterial effects of each single extract

2.2 二二復(fù)配的抑菌效果

2.2.1 2 ∶1 復(fù)配

從二二復(fù)配液（2 ∶1）對(duì)供試菌抑菌效果可看出，4 種二二復(fù)配液（2 ∶1）在對(duì)供試菌的抑制能力上差異不顯著（p＜ 0.05）（圖4A）。相對(duì)于其他3 種復(fù)配液，WT ∶EOMA-1 對(duì)眼科致病細(xì)菌（E.coli和S.aureus）的抑制作用更好，抑菌圈直徑分別為12.0 mm 和11.3 mm；WT ∶CO-1 的抑制效果最弱。且各草本經(jīng)二二復(fù)配后對(duì)眼科致病細(xì)菌（E.coli和S.aureus）的抑制作用較單一方無(wú)明顯提高。

圖4 二二復(fù)配液對(duì)供試菌抑菌效果Figure 4 Antibacterial effect of compound solution containing two components on tested bacteria

2.2.2 3 ∶1 復(fù)配

從二二復(fù)配液（3∶1）對(duì)供試菌抑菌效果看出，四種二二復(fù)配液（3 ∶1）在對(duì)供試菌的抑制能力上表現(xiàn)出一定差異（圖4B）。WT ∶EOMA-2對(duì)E.coli和S.aureus的抑制作用均大于其他3種復(fù)配液，抑菌圈直徑分別為11.4 mm 和13.0 mm；且在E.coli的抑制效果上與其余3 種復(fù)配液存在顯著差異（p＜ 0.05）。與單方相比，4種二二復(fù)配液（3 ∶1）和二二復(fù)配液（2 ∶1）一樣，其對(duì)眼科致病細(xì)菌（E.coli和S.aureus）的抑制作用無(wú)顯著提高。

2.3 三三復(fù)配的抑菌作用

2.3.1 2 ∶1 ∶1 復(fù)配

從三三復(fù)配液（2 ∶1 ∶1）對(duì)供試菌抑菌效果可看出，6 種三三復(fù)配液（2 ∶1 ∶1）在對(duì)供試菌的抑制能力上表現(xiàn)出較大差異（p＜ 0.05）（圖5A）。 相比于其他5 種復(fù)配液，WT∶C∶CO-1對(duì)眼科致病細(xì)菌（E.coli和S.aureus）的抑制作用較好，抑菌圈直徑分別為11.9 mm和10.8 mm；WT ∶C ∶T-1 對(duì)E.coli和S.aureus的抑制作用均顯著最弱（p＜ 0.05）。

圖5 三三復(fù)配液對(duì)供試菌抑菌效果Figure 5 Antibacterial effect of the compound solution containing three components on the tested bacteria

2.3.2 3 ∶1 ∶1 復(fù)配

從三三復(fù)配液（3 ∶1 ∶1）對(duì)供試菌抑菌效果看出，6 種三三復(fù)配液（3 ∶1 ∶1）在對(duì)供試菌的抑制能力上表現(xiàn)出較大差異（圖5B）。WT ∶T ∶EOMA-2 效果較優(yōu)，對(duì)E.coli和S.aureus的抑菌圈直徑分別為15.4 mm 和14.5 mm，相比于其他5 種復(fù)配液差異均顯著（p＜ 0.05）；WT ∶C ∶T-2 對(duì)E.coli和S.aureus的整體抑制效果均最弱（p＜ 0.05）。

2.4 四四復(fù)配與五五復(fù)配的抑菌結(jié)果

2.4.1 2 ∶1 ∶1 ∶1 和2 ∶1 ∶1 ∶1 ∶1 復(fù)配

從四四復(fù)配液（2 ∶1 ∶1 ∶1）對(duì)供試菌抑菌效果可看出，4 種草本提取液四四復(fù)配（2 ∶1 ∶1 ∶1）在對(duì)供試菌的抑制能力上表現(xiàn)出較大差異（圖6A）。對(duì)于S.aureus，WT ∶C ∶T ∶EOMA-1抑菌效果顯著強(qiáng)于其他3 種復(fù)配液（p＜ 0.05），抑菌圈直徑為12.2 mm；WT ∶C ∶EOMA ∶CO-1的整體抑菌效果顯著最弱（p＜ 0.05）。

從五五復(fù)配液（2 ∶1 ∶1 ∶1 ∶1）對(duì)供試菌抑菌效果（圖6A）可看出，WT ∶C ∶T ∶EOMA ∶CO-1 對(duì)眼科致病細(xì)菌（S.aureus和E.coli）的整體抑制作用與單方劑一致，其抑菌圈直徑分別為12.0 mm 和11.5 mm。

2.4.2 3 ∶1 ∶1 ∶1 和3 ∶1 ∶1 ∶1 ∶1 復(fù)配

從四四復(fù)配液（3 ∶1 ∶1 ∶1）對(duì)供試菌抑菌效果看出，4 種草本四四復(fù)配液（3 ∶1 ∶1 ∶1）在對(duì)供試菌的抑制能力上表現(xiàn)出一定差異（圖6B）。相比于其他3 種復(fù)配液，WT ∶C ∶T ∶EOMA-2 對(duì)E.coli和S.aureus的抑制效果均顯著最強(qiáng)（p＜ 0.05），抑菌圈直徑分別為14.0 mm和11.8 mm。

從五五復(fù)配液（3 ∶1 ∶1 ∶1 ∶1）對(duì)供試菌抑菌效果（圖6B）可看出，WT ∶C ∶T ∶EOMA ∶CO-2 對(duì)眼科致病細(xì)菌（E.coli和S.aureus）的整體抑制作用與單方劑一致，其抑菌圈直徑分別為11.0 mm 和12.0 mm。

2.5 復(fù)配液對(duì)真菌的抑制效果

各復(fù)配液對(duì)眼致病真菌（Penicilliumsp.和Fusariumsp.）抑制試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，復(fù)配液對(duì)青霉菌Penicilliumsp.無(wú)抑制效果；復(fù)配液WT ∶T ∶EOMA-2、WT ∶T ∶EOMA-1、WT ∶C ∶T ∶EOMA-2、WT ∶EOMA ∶CO-1 對(duì)鐮刀菌Fusariumsp.有一定抑制作用（圖7），其余復(fù)配液無(wú)抑制效果。

圖7 復(fù)配液對(duì)鐮刀菌Fusarium sp.的抑菌圈效果圖Figure 7 Anti-fugni effect of the compound solution on Fusarium sp.

2.6 提取物有效抑菌物質(zhì)

2.6.1 4 種茶提取物的有效物質(zhì)含量

茶葉中的茶多酚具有抗氧化、抑菌抗炎等作用，且在水浸提液中含量較高[12]。由于加工工藝的不同，多酚類物質(zhì)在加工過(guò)程中轉(zhuǎn)化，使得不同茶類多酚含量存在較大差異，故對(duì)4種茶類茶樣的水浸出物、多酚類、茶色素含量進(jìn)行測(cè)定。從表2 可看出，尤溪綠茶和尤溪白茶的水浸出物和茶多酚含量均顯著高于尤溪烏龍茶和尤溪紅茶，而尤溪紅茶的茶紅素、茶褐素含量顯著高于尤溪烏龍茶（p＜ 0.05）。

表2 4 種茶樣中生化成分含量Table 2 Content of biochemical components in four types of tea samples %

2.6.2 優(yōu)化配方的多酚含量

對(duì)篩選出的2 種抑菌效果較好配方WT ∶T ∶EOMA-2 和WT ∶C ∶T ∶EOMA-2（白茶含量分別為0.120 0 g 和0.066 6 g）的多酚含量測(cè)定結(jié)果（圖8）可看出，單劑白茶的多酚含量高于其余2 種復(fù)配方，經(jīng)方差分析達(dá)顯著水平（p＜ 0.05）；其中，WT ∶T ∶EOMA-2 多酚含量高于WT ∶C ∶T ∶EOMA-2。

2.7 優(yōu)化配方的抑菌穩(wěn)定性

2.7.1 熱處理對(duì)優(yōu)化配方抑菌穩(wěn)定性的影響

將WT ∶T ∶EOMA-2 和WT ∶C ∶T ∶EOMA-2兩種優(yōu)化配方分別在40℃、60℃和80℃下處理45 min，以未處理的優(yōu)化配方為對(duì)照。結(jié)果表明，各優(yōu)化配方在經(jīng)過(guò)不同溫度處理后對(duì)S.aureus和E.coli幾乎無(wú)抑制效果；與對(duì)照組相比，抑菌效果下降明顯。

2.7.2 紫外線照射對(duì)優(yōu)化配方抑菌穩(wěn)定性的影響

將WT ∶T ∶EOMA-2 和WT ∶C ∶T ∶EOMA-2兩種優(yōu)化配方分別置于紫外燈下分別照射10 min、20 min 和30 min，以未處理的優(yōu)化配方為對(duì)照。結(jié)果（圖9）顯示，紫外照射30 min 優(yōu)化配方WT ∶C ∶T ∶EOMA-2 對(duì)E.coli抑菌效果顯著下降（p＜ 0.05），WT∶T∶EOMA-2則不顯著。紫外照射對(duì)WT ∶T ∶EOMA-2 和WT ∶C ∶T ∶EOMA-2 抑制S.aureus的效果影響不顯著（p＜0.05）。

3 討論與結(jié)論

中醫(yī)認(rèn)為茶葉具有消毒殺菌的作用，因此本試驗(yàn)探討茶葉提取物對(duì)眼致病細(xì)菌（S.aureus和E.coli）及眼致病真菌（青霉菌和鐮刀菌）的抑制活性，分別測(cè)定了尤溪白茶、尤溪綠茶、尤溪紅茶和尤溪烏龍茶的抑菌圈直徑，并最終篩選出尤溪白茶作為復(fù)配液主要成分。在這4類（種）茶葉浸出液中，抗S.aureus和E.coli作用最強(qiáng)的為尤溪白茶和尤溪綠茶，然后為尤溪烏龍茶和尤溪紅茶。由于這4 種茶葉中尤溪白茶和尤溪綠茶的茶多酚含量較高，因此我們推測(cè)這些茶葉浸出物抑菌作用的主要成分可能為茶多酚，這與茶多酚在抗菌中有明顯作用相一致[19]。進(jìn)一步地測(cè)定4種茶中茶多酚的結(jié)果表明，尤溪綠茶和尤溪白茶的多酚含量顯著高于尤溪烏龍茶和尤溪紅茶（p＜ 0.05）。白茶作為一種天然草本，具有抗視疲勞和抑菌抗炎的功效，且茶葉本身無(wú)論是內(nèi)服還是外用（如干眼SPA中的霧化、熏蒸等）對(duì)人體的親和性表現(xiàn)較高，幾乎無(wú)副作用，故試驗(yàn)各復(fù)配液均采用以白茶為主要成分（濃度最高）的方式進(jìn)行復(fù)配。

本試驗(yàn)初步篩選出抑菌能力較好且對(duì)眼睛與眼部皮膚親和性較高的5 種草本：尤溪白茶、菊花、蒲公英、互葉白千層精油和山茶油。尤溪白茶、菊花、蒲公英進(jìn)行煎煮浸提，單劑提取液濃度分別為0.033 g·mL-1、0.1 g·mL-1和0.1 g·mL-1；盡管互葉白千層精油已被廣泛應(yīng)用于眼貼或加熱眼罩，鑒于純高濃度互葉白千層精油在干眼SPA 霧化時(shí)對(duì)眼睛及眼部皮膚具有一定刺激性，本試驗(yàn)選擇的是濃度為4%的互葉白千層精油稀釋液，山茶油亦同理，以保證對(duì)眼睛的親和性。再以尤溪白茶為主與其余4 種提取液按比例混合，得到4 種兩兩復(fù)配液（2 ∶1 和3 ∶1）、8 種三三復(fù)配液（2 ∶1 ∶1和3 ∶1 ∶1）、4 種四四復(fù)配液（2 ∶1 ∶1 ∶1 和3 ∶1 ∶1 ∶1）和2 種五五復(fù)配液（2 ∶1 ∶1 ∶1 ∶1 和3 ∶1 ∶1 ∶1 ∶1）。試驗(yàn)加入了無(wú)菌水和30%乙醇為對(duì)照。結(jié)果方差分析表明，WT ∶T ∶EOMA-2和WT ∶C ∶T ∶EOMA-2 對(duì)眼科致病細(xì)菌（E.coli、S.aureus）的綜合抑制效果最好。其中WT ∶T ∶EOMA-2 表現(xiàn)最佳，對(duì)E.coli和S.aureus的抑菌圈直徑分別為15.4 mm 和14.5 mm，優(yōu)于所有單劑的抑菌效果；WT ∶C ∶T ∶EOMA-2 的抑菌效果僅略低于單劑中的互葉白千層精油，考慮到干眼SPA 霧化熏蒸治療中高純互葉白千層精油會(huì)對(duì)眼睛與眼部皮膚產(chǎn)生一定的刺激性，因此在復(fù)配液中建議WT ∶C ∶T ∶EOMA-2，在保證抑菌抗炎療效的同時(shí)提高互葉白千層精油稀釋度以增強(qiáng)親和性。

所有復(fù)配液中WT ∶C ∶T-1 和WT ∶C ∶T-2 對(duì)S.aureus與E.coli的抑制能力最弱，且相比于各成分單劑其綜合抑菌能力顯著下降，可能與尤溪白茶在與菊花、蒲公英分別取一定體積復(fù)配后各自的質(zhì)量濃度下降有關(guān)，因而引起復(fù)配液抑菌能力有所下降。另外，二二復(fù)配液、三三復(fù)配液與單一浸提液的抑菌效果比較顯示出尤溪白茶與菊花、蒲公英之間并無(wú)協(xié)同抑菌作用。WT ∶T ∶EOMA-2 和WT ∶C ∶T ∶EOMA-2 綜 合抑菌效果最優(yōu)，盡管各配方中多酚含量顯著低于單劑白茶的茶多酚含量（p＜ 0.05），但與單劑對(duì)比抑菌效果有所增強(qiáng)或相當(dāng)，可見(jiàn)復(fù)配液中的互葉白千層精油和山茶油與其他成分之間存在協(xié)同效應(yīng)，且互葉白千層精油的增益效果更顯著。互葉白千層精油與山茶油的有效抑菌成分尚待進(jìn)一步測(cè)定。大多數(shù)復(fù)配液在互葉白千層精油的存在下均表現(xiàn)出良好的抑菌活性。綜上結(jié)果表明，復(fù)配液中的各種抑菌成分之間可能存在協(xié)同效應(yīng)或者拮抗作用，并非所有效果較好的單一植物提取液在按比例混合后其抑菌活性能夠得到增強(qiáng)，在實(shí)際應(yīng)用中仍需根據(jù)致病源的特性、各復(fù)配方的穩(wěn)定性以及不同濃度下各草本提取液與人體的親和程度研制復(fù)合配方，并進(jìn)行多次平行試驗(yàn)，以確定其抑菌能力。

本試驗(yàn)還探討了2 種優(yōu)化配方WT ∶T ∶EOMA-2 和WT ∶C ∶T ∶EOMA-2 在 不 同 溫 度和紫外照射時(shí)間下的抑菌穩(wěn)定性，結(jié)果表明各優(yōu)化配方在40℃后抑菌效果顯著下降（p＜0.05），這可能與茶樹(shù)精油的易揮發(fā)性和耐熱性差[20]以及茶多酚對(duì)溫度非常敏感[21]等因素有關(guān)。因此，優(yōu)化配方應(yīng)當(dāng)在低溫下保存。隨著紫外照射時(shí)間的變化，WT ∶T ∶EOMA-2和WT ∶C ∶T ∶EOMA-2 抑菌效果變化不顯著（p＜ 0.05），對(duì)紫外線照射的穩(wěn)定性良好。

本試驗(yàn)旨在為干眼SPA 霧化治療提供一種天然的草本復(fù)合配方，發(fā)揮其抑菌抗炎功效。有研究報(bào)道許多干眼病患者亦伴有螨蟲(chóng)性瞼緣炎，致病原為皮脂螨和蠕形螨[4]，因此后期我們將對(duì)試驗(yàn)中的復(fù)配液進(jìn)行抑螨率的測(cè)定。