MEIS1 基因多態性與血液透析維持不寧腿綜合征的相關性研究

潘 濤 池學鋒 褚滋泓

不寧腿綜合征（restless leg syndrome，RLS）屬于是較為常見的一種運動感覺異常性病癥，常表現為靜態休息或夜間睡眠時存在下肢麻木、蟲蝕、蟻走等嚴重不適感[1-2]。研究發現，相比正常健康的群體，血液透析維持患者伴發RLS 的概率較高（6%～75%）[3]。RLS 家族有較高的陽性率，說明RLS 存有遺傳易感性，環境因素、易感基因以及其互相作用有關[4]。髓系親嗜性白血病病毒整合位點1（myelophilic leukemia virus integration site 1，MEIS1）屬于同源盒基因中的分枝基因，轉錄因子的編碼為三核苷酸環延伸家族中的一員，對血液透析維持伴RLS 發生、進展均有參與[5]。基于此，本文探討了MEIS1 基因多態性與血液透析維持伴RLS 的相關性，以期為臨床治療該病提供依據。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取2021 年5 月至2022 年5 月在浙江省溫州老年病醫院神經內科進行血液透析維持患者70 例，其中血液透析維持伴RLS 組患者40 例，男27 例，女13 例；年齡50～65（60.64±4.56）歲；特發性RLS 組患者30 例，男26 例，女14 例；年齡50～66（60.67±4.59）歲。本研究經過醫院倫理委員會審批（批件號WLNY-A-2023001）。

1.2 納入及排除標準 納入標準：（1）符合慢性腎臟病（chronic kidney disease，CKD）5 期診斷標準；（2）符合RLS 相關診斷標準：①下肢存在異常感覺；②具有強烈想要活動下肢的欲望；③休息誘發或加重癥狀；④精神或體力活動可以暫時性部分或完全緩解癥狀；同時滿足以上四條，并確保不是因其他醫學行為狀況導致的即可確診為RLS。（3）年齡≥18 歲；（4）行規律血液透析時間≥3 個月；（5）病例資料完整、可靠性、準確較優，能配合研究。排除標準：（1）伴有嚴重腦、肝及造血系統等原發病癥、精神疾病患者；（2）存在帕金森病、肌痛、周圍神經病變、妊娠、靜脈瘀滯、感染、下肢水腫、類風濕關節炎、心力衰竭、腿部痙攣性病癥、體位不適、習慣性拍足等疾患者；（3）臨床病歷原始資料記錄不全者。

1.3 方 法

1.3.1 基因多態性檢測 （1）留取所有研究對象肘靜脈血3 mL，-20 ℃保存，通過血液基因組提取試劑盒（廠家：武漢納磁生物科技有限公司；批號NMG0141-16）提取細胞全基因組以此對DNA 進行提取。（2）采用4 對引物特異擴增突變分析方法對MEIS1 基因的rs1820989、rs113851554 基因多態性予以檢測。rs1820989 上游引物序列為 5' -ATTGATCCTGTCACCCAGGTAG-3'，下游引物序列為5'-GAAGGGAGACTGTGAAATGGTC-3'；rs113851 554 上游引物序列：5'-AACAAGCACAGTTCTCAGCA AA-3'，下游引物序列：5'-TGATCTAGATGCTTGAGT TGAAA-3'。（3）MEIS1 2 個基因位點PCR 反應體系和條件：其中，PCR 反應引物：由NCBI 的GenBank獲取MEIS1 基因序列及其對應的2 個多態性位點。PCR 擴增反應體系：cDNA 模板10 μL，IOuM 上游引物0.1 μL，IOuM 下游引物0.1 μL，H2O 為6.35 μL，25 mM dNTP 為0.8 μL。反應條件：94 ℃預變性3 min，94 ℃變性30 s，56～66 ℃復性30 s，72 ℃退火延長30 s，總延長為72 ℃5 min。（4）使用Prime Premier Version 5.0 軟件選取限制性內切酶及酶切產物片段大小，其中，MEIS1 基因rs1820989：限制性內切酶Vsp1 中包含等位基因（C、T），且對應的酶切片大小分別是393bp、202bp+191bp；MEIS1 基因rs113851554：限制性內切酶Csp61 包括等位基因（T、C）及對應的酶切片大小分別為183 bp、105 bp+78 bp。（5）DNA 在特定位點進行PCR 擴增后，先檢測經電泳的瓊脂糖（廠家：太陽馬；規格：100 g/瓶），看是否有目的條帶的擴出，以此對PCR 產物的濃度進行判斷，以便進行下一步的限制性內切酶酶切反應，酶切反應后在進行電泳檢測。

1.3.2 實驗室指標 所有受試者抽靜空腹脈血4 mL，使用離心機（廠家：Eppendorf；型號：5417R）行離心處理（設半徑5 cm，10 min，轉速3500 r/min）后，分離清液，-70 ℃置冰箱內儲存，待檢。由我院實驗室檢測β2-微球蛋白（β2-microglobulin，β2-MG）、尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）、血肌酐（serum creatinine，Scr）、血紅蛋白（Hemoglobin，Hb）、血液透析尿素清除指數（clearance time/Urea distribution volume，Kt/V）、甲狀旁腺激素（parathyroid hormone，PTH）、鈣離子（Calcium ion，Ca）、血清無機磷（phosphorus，P）、C-反應蛋白（C-reactive protein，CRP）、轉鐵蛋白飽和度（transferrin saturation，TS）水平。

1.3.3 MRI 檢查 使用美國GE 1.5T 超導型磁共振掃描，其中T1W1、FLAIR 及T2W2 序列，部分的患者增加DWI 序列額掃描，FOV：2218，矩陣：200180，層厚：5 cm，NEX：2～3 次，層間距為2 mm，對患者施加增強掃描，行冠狀位、矢狀位及橫軸位的掃描。測量共3 次后取平均值，獲得最終的RMSI 值、log 值。

1.4 統計學方法 應用SSPS 26.0 統計軟件對數據進行統計分析。計量資料用例（%）表示，采用χ2檢驗或Fisher 確切概率法比較兩個位點的等位基因和基因型在各組中的分布差異。采用二元Logistic 回歸分析MEIS1 基因rs1820989、rs113851554 多態性2 個位點表達與血液透析維持伴RLS 患者的相關生化指標的相關性，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 血液透析維持伴RLS 患者與特發性RLS 患者之間MEIS1 基因多態性2 個位點表達比較 應用Logistic 回歸分析顯示，血液透析維持伴RLS 患者與特發性RLS 患者的發生均與MEIS1 基因多態性的2個位點表達有關（P＜0.05）。見表1。

表1 血液透析維持伴RLS 患者與特發性RLS 患者之間MEIS1 基因多態性2 個位點表達比較[例（%）]

2.2 MEIS1 基因rs1820989、rs113851554 多態性2個位點表達與血液透析維持伴RLS 患者的相關生化指標相關性 采用Logistic 回歸分析，可得出MEIS1基因rs113851554、rs1820989 多態性與Kt/V、Ca 水平無關（P＞0.05）；與β2-MG、BUN、Scr、Hb、PTH、P、CRP、TS 相關（P＜0.05）。見表2、3。

表2 MEIS1 基因rs1820989 多態性與血液透析維持伴RLS 患者的相關生化指標相關性[例（%）]

表3 MEIS1 基因rs113851554 多態性與血液透析維持伴RLS 患者的相關生化指標相關性[例（%）]

2.3 MEIS1 基因rs1820989、rs113851554 多態性分別與血液透析維持伴RLS 患者的MRI 參數相關性采用Logistic 回歸分析，顯示MEIS1 基因rs113851554、rs1820989 多態性與MRI 參數的幅度log 值及RMSI值相關（P＜0.05）。見表4、5。

表4 MEIS1 基因rs1820989 多態性與血液透析維持伴RLS 患者MRI 參數的相關性[例（%）]

表5 MEIS1 基因rs113851554 多態性與血液透析維持伴RLS 患者MRI 參數的相關性[例（%）]

2.4 MEIS1 基因s1820989、rs113851554 多態性與特發性RLS 患者的MRI 參數的相關性 采用Logistic回歸分析發現，MEIS1 基因s1820989、rs113851554多態性均與MRI 參數RMSI 值、幅度log 值有關（P＜0.05）。見表6、7。

表6 MEIS1 基因rs1820989 多態性與特發性RLS 患者MRI 參數的相關性[例（%）]

表7 MEIS1 基因rs113851554 基因多態性與特發性RLS患者的MRI 參數的相關性[例（%）]

3 討 論

RLS 屬于一種中樞性神經系統病癥，可分為癥狀性及特發性兩種，多數特發性患者存在家族史，呈現常染色體顯性或隱性遺傳[6-7]。MEIS1 是指同源盒基因中三氨基酸環延伸家族的成員，通過和同源框基因（HOX）蛋白及其他的轉錄因子互相作用進而發揮對細胞活性的調節作用，且MEIS1 基因在多種類的正常造血組織內有著廣泛的表達[8-9]。本研究發現，MEIS1 基因rs113851554、rs1820989 多態性與BUN、PTH、Scr、β2-MG、CRP、TS、Hb 表 達 及MRI 參 數RMSI 值、幅度log 值變化相關。表明RLS 患者中CRP、BUN、β2-MG、PTH、Scr、Hb、TS 可通過MEIS1基因進行影響。

血液透析患者會伴隨機體中毒素的積聚使得體內肌肉萎縮、貧血等狀況，久之引起RLS 疾病[10-11]。有研究對接受血液透析的RLS 患者疾病發生的風險因素進行探究，發現糖尿病史及透析齡較長為主要的影響因素[12-13]。研究指明，老年屬于發生RLS 病癥的主要保護性因素，而腹膜透析、年齡≥35 歲、高表達的成纖維細胞生長因子-23（FGF-23）、Hb≤9.8 g/dL、TS＜47%、CRP≥1.24 mg/dL、血清鐵蛋白（SF）≤700 ng/mL 及P＞5.2 mg/dL 為透析患者發生RLS 疾病的風險因素[14]。本研究顯示，血液透析維持伴RLS 與CRP、TS、β2-MG、BUN、Scr、PTH、Hb 以及幅度log 值、RMSI 值與MEIS1 基因s1820989、rs113851554 多態性有著一定的相關性。表明可通過進一步分析血液透析維持伴RLS 患者癥狀發生的主要因素，為臨床對該類患者的病癥更好的進行干預。

綜上所述，在MEIS1 基因s1820989、rs113851554多態性的基礎上分析血液透析維持與RLS 的相關性，探討MEIS1 基因多態性與患者發生血液透析維持伴RLS 的關聯性，可以證實β2-MG、BUN、TS、Scr、Hb、PTH、CRP 的水平變化可作為血液透析維持伴RLS 疾病主要特異及敏感的生物學指標，為分析血液透析維持伴RLS 患者患病的主要病理機制及干預提供了依據，為臨床治療帶來契機。