基于HPLC法和指紋圖譜的桑菊感冒片質量評價研究

摘要：目的" 建立不同廠家桑菊感冒片的HPLC指紋圖譜，為科學評價桑菊感冒片的質量提供理論依據。方法" 采用phenomenex Gemini C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）為色譜柱，乙腈-水梯度洗脫程序，檢測波長為348 nm，柱溫為25 ℃，流速為1.0 ml/min，建立桑菊感冒片的HPLC指紋圖譜，使用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統（2008版）計算相似度，通過對照品比對及文獻檢索對共有峰進行指認，確定其來源。結果" 測定10批次桑菊感冒片的指紋圖譜，確立的指紋圖譜上有13個共有峰，10批次樣品的指紋圖譜相似度結果在0.940～0.989，相似度良好;方法學驗證結果表明重復性、穩定性、精密度結果均符合要求。結論" 本方法操作簡單、可靠，適用于桑菊感冒片指紋圖譜的建立，可為桑菊感冒片的質量控制提供依據。

關鍵詞：桑菊感冒片;高效液相色譜法;指紋圖譜;相似度

中圖分類號：R284" " " " " " " " " " " " " " " " " "文獻標識碼：A" " " " " " " " " " " " " " " " "DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2023.07.027

文章編號：1006-1959（2023）07-0139-04

Study on Quality Evaluation of Sangju Ganmao tablets Based on HPLC and Fingerprint

ZHANG Lu-yan1，YANG Jie1，QIAN Yi-xin2，WANG Qing1

（1.Ningxia Institute for Drug Control，Ningxia 750004，Yinchuan，China;

2.Engineering Research Center of the Utilization for Characteristic Bio-Pharmaceutical Resources in Southwest，Ministry of Education，University of Guizhou，Guiyang 550025，Guizhou，China）

Abstract：Objective" To establish an HPLC fingerprint analysis method for Sangju Ganmao tablets of different manufacturers， and to provide a theoretical basis for scientific evaluation of the quality of Sangju Ganmao tablets.Methods" The phenomenex Gemini C18 （4.6 mm×250 mm， 5 μm） was used as the chromatographic column， and the acetonitrile-water gradient elution program was used. The detection wavelength was 348 nm， the column temperature was 25 ℃， and the flow rate was 1.0 ml/min. The HPLC fingerprint of Sangju Ganmao tablets was established. The similarity was calculated by the similarity evaluation system" chromatographic fingerprint of TCM（Version2008）. The common peaks were identified by reference substance comparison and literature search to determine their source.Results" There were 13 common peaks on the fingerprints after analyzing chromatograms from 10 batches of Sangju Ganmao tablets. The similarity of 10 batches of samples ranged from 0.940 to 0.989， and the similarity was good. The results of methodological verification showed that the repeatability， stability and precision met the requirements.Conclusion" The method is simple， reliable and suitable for the establishment of fingerprint of Sangju Ganmao tablets， which can provide a basis for the quality control of Sangju Ganmao tablets.

Key words：Sangju Ganmao tablets;HPLC;Fingerprint;Simililarity

桑菊感冒片（Sangju Ganmao tablets）以桑葉、菊花為主要成分，處方中加入連翹、苦杏仁、甘草、蘆根、桔梗、薄荷素油等6味藥材組成[1]，功能與主治為疏風清熱，宣肺止咳，主要用于風熱感冒初起，頭痛，咳嗽，口干，咽痛等癥狀。其質量標準收載于《中國藥典》2020年版一部，僅對連翹以連翹苷為指標進行了檢測[2]，薄層鑒別控制甘草、桔梗及連翹的質量[3，4]，因此有必要對其質量標準進行全面控制。中藥指紋圖譜可以用來評價中藥材和中藥成方制劑質量的有效性、真實性、穩定性和優良性，可以有效控制中藥材及其制劑質量[5-7]。查閱相關文獻[8-10]，目前未見有關桑菊感冒片建立指紋圖譜的報道。為此，本文通過高效液相色譜法建立桑菊感冒片的指紋圖譜，通過評價其共有峰歸屬分析和相似度，確認分析成分，整體評價桑菊感冒片的質量，為科學評價藥品質量提供依據。

1儀器與材料

1.1試驗儀器" 安捷倫1260 高效液相色譜儀，DAD二極管陣列檢測器，色譜柱為phenomenex Gemini C18（4.6×250 mm，5 μm），梅特勒XS-205電子天平。

1.2試劑與對照品" 蘆丁（批號：100080-201409，含量：91.9%）、綠原酸（批號：110753-201415，含量96.2%）、木犀草苷（批號：111720-201408，含量：94.9%）和3，5-O-二咖啡酰基奎寧酸（批號：111782-201405，含量：92.0%），均購自于中國食品藥品檢定研究院。乙腈、磷酸均為色譜純，甲醇為分析純，水為純化水。

1.3樣品來源" 桑菊感冒片均為市售樣品，天津企業1批次（批號：CC23243），西安企業3批次（批號：141650、151580、151600），四川企業3批次（批號：1407006、1504001、1403002），甘肅企業3批次（批號：140801、140904、140505）。

1.4色譜條件" 以phenomenex Gemini C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）為色譜柱，以乙腈為流動相A，以0.1%磷酸溶液為流動相B，按表1中的規定進行梯度洗脫，檢測波長為348 nm，柱溫為25 ℃，流速為1.0 ml/min。

1.5對照品溶液制備" 分別取綠原酸、蘆丁、木犀草苷和3，5-O-二咖啡酰基奎寧酸對照品適量，精密稱定，加甲醇稀釋溶解制成每1 ml中約含15、10、10 μg和10 μg的混合溶液，作為混合對照品溶液，進樣10 μl注入液相色譜儀測定。

1.6供試品溶液的制備" 取本品10片，研細，取1 g，精密稱定，精密加入50%甲醇25.0 ml，稱定重量，超聲提取30 min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，再濾過，取續濾液10 μl注入液相色譜儀測定。

2方法學考察

2.1精密度試驗" 取桑菊感冒片（批號：CC23243），按照“1.6”項制備供試品溶液，在“1.4”項色譜條件下連續進樣5次，通過綠原酸（3號色譜峰）作為參照峰，計算各共有峰的相對保留時間和相對峰面積。相對保留時間的RSD在1.0%以內，相對峰面積的RSD在2.0%以內，表明該進樣儀器的精密度良好。

2.2重復性試驗" 取桑菊感冒片（批號：CC23243），按照“1.6”制得5份供試品溶液，按本文色譜條件分別進樣，記錄色譜圖，以綠原酸（3號色譜峰）作為參照峰，經計算，相對保留時間的RSD在1.0%以內，相對峰面積的RSD在2.0%以內，表明該方法重復性良好。

2.3穩定性試驗" 取桑菊感冒片（批號：CC23243），按照“1.6”制備供試品溶液，按本文色譜條件，分別在0、2、4、8、12、24 h進樣測定，記錄色譜圖，以綠原酸（3號色譜峰）作為參照峰，經計算，相對保留時間的RSD在1.0%以內，相對峰面積的RSD在2.0%以內，表明樣品24 h內穩定良好。

3 HPLC指紋圖譜的建立及相似度分析

分別取桑菊感冒片4個廠家10批次樣品，按“1.6供試品溶液準備”項下方法制備10批次樣品的供試品溶液，按本文色譜條件，記錄色譜圖，見圖1。

采用國家藥典委員會“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統（2008年版）”的軟件，將10批次桑菊感冒片的圖譜導入，將天津企業批號為CC23243的樣品溶液，用作針對相似性計算校正的參照圖譜[2，3]。結果顯示，2～9批次制劑間指紋圖譜與參照圖譜之間的相似度均不小于0.90，見表2，表明相似度良好。對保留時間0～55 min內的色譜峰進行分析，均有13個穩定的特征峰（編號1～13），確定其為桑菊感冒片的共有指紋峰，經過對照品比對，其中，3號峰為綠原酸，8號峰為蘆丁，9號峰為木樨草甘，12號峰為3，5-O-二咖啡酰基奎寧酸。

4討論

4.1檢測波長的選擇" 在200～400 nm波長范圍內進行光譜掃描，蘆丁在256和354 nm的波長處有最大吸收，綠原酸在220、242和326 nm的波長處有最大吸收，木樨草苷在255和348 nm的波長處有最大吸收，3，5-O-雙咖啡酰基奎寧酸在220、242和328 nm的波長處有最大吸收。根據試驗所得數據并參考文獻[11]，上述4種成分在348 nm的波長處具有良好的響應，樣品中相鄰色譜峰的基線分離可以滿足檢測要求。因此，選用348 nm作為測定波長。

4.2樣品指紋圖譜相似度" 全部4個廠家的10批樣品指紋圖譜的相似度在0.940～0.989，不同廠家之間結果基本類似。桑菊感冒片的HPLC指紋圖譜有13個穩定的特征峰，通過對照品的比對，主要體現了桑葉和菊花的成分。《中國藥典》2020年版一部對桑菊感冒片的質量控制，主要在連翹、桔梗和甘草的薄層鑒別;連翹藥材中連翹苷的含量測定。建立的桑菊感冒片HPLC指紋圖譜，根據峰面積的差異以及共有峰的缺失等，可能反映不同廠家之間原藥材的質量差別、生產工藝的差別以及部分廠家簡化生產工藝等問題[12]，適用于全面控制桑菊感冒片的質量。

4.3合理評價中藥及其制劑質量的作用" 中藥及其制劑是我國傳統醫藥用于實踐的精髓，是中華民族五千年歷史傳承的寶貴財富，利用適宜的檢測方法評價好中藥及其制劑的質量至關重要。中藥材是天然而成其成分復雜，中藥制劑由多味藥材組成，合理有效評價其質量應采取與之相適應的評價體系，能夠提供豐富鑒別特征信息的檢測方法，展現中藥的本質特性，建立中藥指紋圖譜能夠全面反應中藥及其制劑中所含化學成分的種類與數量，能夠整體描述和評價中藥及其制劑的質量[13]。中藥指紋圖譜的研究、建立和應用，對于提高和統一中藥質量，促進中國式現代化中藥發展的新要求具有很重要意義。

4.4 指紋（特征）圖譜的檢測方法" 該方法首次收載于《中國藥典》2010年版，共計20個品種，分別為植物油脂和提取物14個品種、成方制劑和單味制劑6個品種;《中國藥典》2015年版收載了61個品種的指紋（特征）圖譜，分別為藥材和飲片4個品種、植物油脂和提取物19個品種、成方制劑和單味制劑38個品種;《中國藥典》2020年版收載了73個品種的指紋（特征）圖譜，分別為藥材和飲片8個品種、植物油脂和提取物20個品種、成方制劑和單味制劑45個品種。不斷完善藥品質量標準，加快中藥質量標準與先進檢測技術相結合，不斷促進提高中藥質量標準，大力發展我國傳統醫藥事業。

4.5 建議" 中藥材飲片產地豐富，不同產地中藥材質量有所差別，桑菊感冒片樣品為市售產品，所需原藥材由生產企業自行采購，而本次實驗所采用的桑菊感冒片批次、廠家有限，為能更好地控制藥品質量，今后需進一步增加樣品批次，擴大生產廠家范圍，進一步研究藥物的質量標準，力爭全面、客觀、真實控制藥品質量。

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收稿日期：2022-06-02;修回日期：2022-07-13

編輯/成森

作者簡介：張蘆燕（1982.2-），女，寧夏銀川人，本科，副主任藥師，主要從事藥品檢驗與研究