血液中乙醇檢測方法的校正測量分析

潘 宇，董彥杰

(安徽宜凱司法鑒定所，安徽 安慶 246000)

飲酒后駕駛機動車，對行人及財產都會產生重大安全隱患。世衛組織提出，酒駕是交通事故發生的最主要因素[1]。因此，我國制定了嚴格的酒駕處罰標準。 最近幾年，在機動車數量增加的同時酒駕發生率也有增無減[2]。駕駛員是否酒駕，將依據駕駛員體內血液中乙醇含量進行判斷[3]，但是，血液中乙醇含量測定[4-7]存在一定的誤差。頂空氣相色譜法用來檢測血液中乙醇含量，分離效果好、準確度高[8]。按現行中華人民共和國公共安全行業標準GA/T 1073-2013《生物樣品血液、尿液中乙醇 、甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、異丙醇和正丁醇的頂空-氣相色譜檢驗方法》規定，兩份樣品的相對相差不超過10%(有凝血塊的血樣不得超過15%)，定量數據可靠，結果按兩份樣品的平均值計算，否則需要重新進行測定[9]。就氣相色譜儀每天的校正值，在什么樣的范圍內才能滿足檢測要求，本文對此進行分析。

1 理論分析

根據有限數據統計分析，儀器測試方法是否可用，可用t檢驗法進行檢驗[10]。

(1)

在標準GA/T 1073-2013中，實驗對同一樣品，平行測定兩次，會得到兩個數據。那么(1)式就可轉化為：

(2)

因為只有兩個數據x1和x2，所以

(3)

(4)

將(3)式代入(4)式可得：

(5)

式中，D=|x1-x2|，為兩次測定值的極差或相差。

將(5)式代入(2)式，可得：

(6)

若計算得到的t值小于一定置信度和自由度下的tP，f值(tP，f值表(雙邊)[10])，說明此方法不存在顯著性差異，方法可靠。若計算得到的t值大于一定置信度和自由度下的tP，f值(tP，f值表(雙邊))，說明此方法存在顯著性差異，此方法不能使用。

從tP，f值表(雙邊)數據表可得，若P=0.95時，兩次測定的t0.95，1=12.71。若用標準樣品實驗，平行測定同一樣品兩次，可得x1和x2，用(6)式計算得到t值小于12.71，說明此法可靠，可以使用。由此可得：

(7)

若P=0.90時，兩次測定的t0.95，1=6.31。若用標準樣品實驗，平行測定同一樣品兩次，可得x1和x2，用(6)式計算得到t值小于6.31，說明此法可靠，可以使用。由此可得：

(8)

2 儀器和試劑

2.1 儀器

氣相色譜儀 GC9720Plus(浙江福立分析儀器股份有限公司，中國)，全自動頂空進樣器APL(奧普樂科技集團(成都)有限公司，中國)，普力菲爾超純水機(上海富詩特環保科技有限公司，中國)，渦旋混合器(海門市其林貝爾儀器制造有限公司，中國)。

2.2 試劑

100 mg/dL、80 mg/dL、50 mg/dL 標準乙醇樣品(Supelco分析標準品，USA)，叔丁醇(HPLC測定w>99.5%) (Shanhai Macklin Biochemical Co.，Ltd.)。

3 實驗方法

取 100 mg/dL 或 80 mg/dL 或 50 mg/dL 標準乙醇樣品 100 μL，加入 4.0 mg/dL 的叔丁醇內標物液 500 μL，密封加熱 10 min，全自動頂空進樣檢驗，根據標準曲線回歸方程(線性相關系數R2=0.9998)，得出檢測結果。

4 檢測實例分析

按實驗方法，用 80 mg/dL 標準乙醇樣品，一周校準儀器測定數據見表1；用 100 mg/dL 標準乙醇樣品，一周校準儀器測定數據見表2；用 50 mg/dL 標準乙醇樣品，一周校準儀器測定數據見表3。從表1 、表2和表3可知，測量數據的D值均不大于0.5，且都滿足一定置信度和自由度下的顯著性檢驗標準，說明此方法安全可靠。

表1 一周校準測定血液中乙醇含量分析測定結果(每天一次，80 mg/dL)

表2 一周校準測定血液中乙醇含量分析測定結果(每天一次，100 mg/dL)

表3 一周校準測定血液中乙醇含量分析測定結果(每天一次，50 mg/dL)

用 80 mg/dL 標準乙醇樣品，一周的平均相對誤差為0.05%。

用 100 mg/dL 標準乙醇樣品，一周的平均相對誤差為0.04%。

用 50 mg/dL 標準乙醇樣品，一周的平均相對誤差為0.08%。

5 不同乙醇標準溶液校正儀器的誤差分析

不同質量濃度乙醇標準溶液，在不同置信度下，一周的測定的平均值見表4。從表4看出，隨乙醇標準溶液質量濃度的增大，測量的相對誤差減小。我們選用 80 mg/dL 標準乙醇樣品進行儀器校準，主要原因為：車輛駕駛人員血液中乙醇含量如果大于或者等于 80 mg/dL 的行為即屬于醉酒駕駛，且使用 80 mg/dL 標準乙醇樣品校正時相對誤差較小(0.05%)。

表4 一周不同質量濃度乙醇標準溶液測定結果的平均值

6 結果與討論

與上述處理方法相同，若用 100 mg/dL 標準乙醇樣品進行儀器校準時，置信度P=0.95，測定值在97.0～103.0 mg/dL 的范圍內，此方法可用于未知樣品中乙醇含量的測定；置信度P=0.90，測定值在99.0～101.0 mg/dL 的范圍內，此方法可用于未知樣品中乙醇含量的測定，且測定的相對誤差較小。若用 50 mg/dL 標準乙醇樣品進行儀器校準時，置信度P=0.95，測定值在47.0～53.0 mg/dL 的范圍內，此方法可用于未知樣品中乙醇含量的測定；置信度P=0.90，測定值在49.0～51.0 mg/dL 的范圍內，此方法可用于未知樣品中乙醇含量的測定，但測定的相對誤差較大。

我們建議使用P=0.90、80 mg/dL 的標準乙醇樣品進行儀器校準。若超出此范圍，則說明儀器條件、試劑純度、標準曲線可能出現問題，需要仔細檢查儀器各項指標與溫度條件是否正常，氣路是否仍然密封完好，電路檢測系統或色譜工作站是否運行良好，所用試劑的純度、容量是否依舊保持相對穩定；再次進行儀器校正，若仍無法達到標準，便需要考慮重新測定標準曲線。直到問題解決，乙醇標準溶液的檢測值相對誤差在正常范圍之內，才能正常使用儀器用于檢測血液中乙醇含量。