超高效液相色譜-串聯質譜法同時檢測預制菜中60 種藥物殘留的含量

◎ 林 緒，陳瓊華，李冰虹

（廣電計量檢測集團股份有限公司，廣東 廣州 510065）

預制菜又稱“方便菜”，一般是以各類農產品為原料，以調味料為輔料，經預選、調制等工藝加工而成的半成品或成品[1]。隨著生活節奏越來越快，簡單烹調就能食用的預制菜，對于時間緊湊、不擅長烹調的年輕人來說，越來越盛行[2]。預制菜中，蔬菜水果等原料會帶入農藥殘留，肉蛋奶及水產品會帶入獸藥殘留[3]，威脅人體的健康安全[4]。然而，目前預制菜缺乏藥物殘留的檢測標準及相關安全標準[5]，在監管方面存在一定的困難。因此，本研究旨在開發一種經濟、快速準確的預制菜藥物殘留檢測方法。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

乙酸銨、甲酸，質譜純（美國Thermofisher 公司）；乙腈、甲醇，色譜純；N-丙基乙二胺（PSA）、十八烷基硅烷鍵合硅膠（C18）、中性氧化鋁（ALN）、無水硫酸鎂，分析純（上海安譜實驗科技股份有限公司）；氯化鈉，分析純（上海潤捷科技發展有限公司）；實驗用水為超純水；標準品分別購于阿爾塔科技有限公司、德國 DrEhrenstorfer GmbH 公司、上海安譜實驗科技股份有限公司。

AB 4500 超高效液相色譜-質譜/質譜聯用儀（配有ESI、Analyst 采集系統及MultiQuant 數據處理系統）（美國SCIEX 公司）；ME203E 電子分析天平、XS205DU 電子分析天平（瑞士梅特勒公司）；TGL-21高速冷凍離心機（四川蜀科儀器有限公司）；T18 均質器（德國IKA 公司）。

1.2 實驗方法

1.2.1 標準溶液配制

①分別準確稱取60 種藥物殘留標準物質適量，用乙腈溶解并稀釋成濃度為10 μg·mL-1的儲備液。②分別吸取標準儲備液，用空白基質提取液稀釋至濃度為4、10、20、50、100 ng·mL-1。

1.2.2 前處理方法

①樣品取可食部分，充分混勻粉碎后備用。②稱取樣品2.00 g（精確至0.01 g）于50 mL 離心管中，加入10 mL 0.8%甲酸水乙腈（體積比，下同）溶液，12 000 r·min-1均質提取1 min，加入1 g NaCl后劇烈振蕩30 s，8 000 r·min-1離心5 min，放置冰箱-20 ℃冷凍1 h，立即取乙腈層1.5 mL 于裝有50 mg ALN、30 mg C18、50 mg PSA 的凈化管中，渦旋1 min，靜置5 min，取上清液過0.22 μm，待測。

1.2.3 液相色譜條件

①XBridge BEH C18 色譜柱（2.5 μm，2.1×100 mm）；進樣量5 μL；流速：0.35 mL·min-1；柱溫40 ℃。②梯度洗脫：洗脫液A 為5 mmol·L-1乙酸銨含0.1%甲酸水；洗脫液B 為含乙腈。③洗脫程序：0～1.8 min，A 85%；1.8～5 min，A 85%～20%；5～8 min，A 20%～20%；8～8.1 min，A 20%～85%；8.1～10 min，A 85%～85%。

1.2.4 質譜條件

氣簾氣流速：30 L·min-1；霧化氣流速（GS1）：55 L·min-1；輔助加熱氣流速（GS2）：55 L·min-1；碰撞氣（CAD）：中等強度（medium）；輔助加熱氣溫度：550 ℃；噴霧電壓：5 000 V（ESI+）/－4 500 V（ESI-）；掃描模式：多反應監測模式。

2 結果與分析

2.1 流動相優化

為了獲得良好的峰型和離子化效率，對比0.1%甲酸水-甲醇、0.1%甲酸水-乙腈、5 mmol·L-1乙酸銨含0.1%甲酸水-甲醇、5 mmol·L-1乙酸銨含0.1%甲酸水-乙腈、水-甲醇、水-乙腈。結果發現，5 mmol·L-1乙酸銨含0.1%甲酸水-乙腈作為流動相時，絕大部分藥物殘留響應較好，且峰型較好。因此，綜合考慮，選此作為測試的流動相。在優化的色譜及質譜條件下，60種藥物殘留的總離子流色譜圖見圖1。

圖1 60 種藥物殘留的總離子流色譜圖

2.2 前處理條件優化

2.2.1 提取溶劑的選擇及其條件的優化

相關研究表明，乙腈不僅是農藥殘留檢測方法中的最優提取溶劑，也是獸藥殘留檢測中的優選提取溶劑[6-7]。因此，本研究不再進行有機溶劑的對比實驗，而是通過對比不用pH 的乙腈對藥物殘留的提取效果。本研究比較0.1%甲酸乙腈、0.3%甲酸乙腈、0.5%甲酸乙腈、0.8%甲酸乙腈、1%甲酸乙腈、0.5%氨水、1%氨水、3%氨水、5%氨水、8%氨水的提取效果，稱取預制菜試樣2 g 于50 mL 離心管中，以30 μg·kg-1進行加標回收實驗（提取溶液未做凈化）。60 種藥物殘留的提取效率見圖2。

圖2 不同提取溶劑平均回收率分布圖

由上述數據可知，用0.8%甲酸乙腈作為提取溶劑時，有多種藥物殘留的回收率在60%～100%，效果最好。因此，采用0.8%甲酸乙腈作為60 種藥物殘留的提取溶劑。

2.2.2 提取方式的選擇

目前，廣泛應用于食品樣品中藥物殘留分析的提取方法主要有微波輔助萃取[8]、高速勻漿提取[9]、超聲提取[10]等。本研究通過微波輔助萃取的提取方法，發現微波提取時會使溶劑溫度升高，使得熱不穩定的藥物殘留降解。選取腐霉利、多菌靈、恩諾沙星陽性樣品對比超聲提取和高速勻漿提取的前處理方式，通過比較其回收率，結果顯示，高速勻漿提取相比超聲提取的效率更高，原因可能在于超聲提取未能完全提取已經跟基質結合的藥物，而高速勻漿提取時間快、能使細胞膜破裂至核分離，進而目標物更容易被提取。因此，本文選擇高速勻漿提取的方式。

2.2.3 凈化方法的選擇及優化

一般預制菜都含有大量的蛋白質及油脂，而乙腈可以沉淀蛋白質，同時，冷凍可以去除一定量的脂肪和蛋白質。因此，本研究將乙腈提取液在-20 ℃以下冷凍1 h，發現脂肪和蛋白質會在提取液表面凝結成塊狀。通過對乙腈溶液氮吹后發現，對于油脂含量高的樣品乙腈仍會溶解部分油脂。這說明，僅使用低溫冷凍凈化的效果不佳，仍需進一步凈化。

為達到更佳的凈化效果，對比凈化填料PSA、C18、ALN、GCB單個及組合用量的凈化效果，配比如下：

A.30 mg GCB+100 mg MgSO4

B.50 mg ALN+30 mg C18+30 mg PSA+100 mg MgSO4

C.100 mg ALN+50 mg C18+50 mg PSA+100 mg MgSO4

D.100 mg ALN+100 mg C18+100 mg PSA+100 mg MgSO4

E.100 mg ALN+30 mg C18+30 mg PSA+100 mg MgSO4

5 種組合填料對預制菜中60 種藥物殘留回收率的影響分布見表1。

表1 不同凈化填料的凈化效果表

通過比對實驗，說明在0.8%甲酸水乙腈提取溶劑下，以B 組分散萃取凈化填料，對于預制菜中60 種藥物殘留的凈化效果和回收率最佳。同時，對比發現B 組跟E 組填料凈化比較接近，而ALN 可以除去油脂，因此，對于油脂含量較大的樣品，可適當增加ALN 的用量。

2.3 檢出限和定量限

按本前處理在空白基質添加一定濃度的標液，以信噪比為3 時的濃度作為檢出限，信噪比為10時的濃度作為定量限，60 種藥物殘留的檢出限均≤20 μg·kg-1，定量限均≤50 μg·kg-1，檢出限和定量限均較低。

2.4 方法準確度和精密度

以陰性樣品小炒肉為基質，以50、100、150μg·kg-13 個添加水平進行添加回收率和精密度的實驗。按試樣制備的方法加入適量的對照品，按照優化好前處理檢測方法進行平行測定6 次，計算回收率。結果表明，樣品檢測平行性良好，RSD 小于10%，回收率在60%～120%，符合相關方法驗證要求。

2.5 實際樣品測定

在市場采購了咖喱雞、青豆炒肉、梅菜扣肉、牛肉牛筋方便菜、東坡扣肉、招牌鹵肉各一批，按照該方法開展檢測工作。結果顯示，青豆炒肉檢出噻蟲嗪及滅線磷，含量分別為54 μg·kg-1和21 μg·kg-1，為不合格產品。因此，預制菜相關安全及檢測標準亟須完善。

3 結語

本研究經過對預制菜樣品提取方式及凈化方式進行優化，有效除去了樣品中的雜質，并采用空白樣品基質配制標準曲線，利用液相色譜-串聯三重四極桿質譜儀同時測定預制菜中60 種藥物殘留。本研究覆蓋項目種類廣，且靈敏度高、選擇性好、結果準確可靠，可用于市場上預制菜的抽查，進而為預制菜的市場監管提供技術支持。