QuEChERS-HPLC 法測定食用菌中克百威及3-羥基克百威的殘留量

◎ 蘇肯明，羅詩泳

（佛山市沃特測試技術服務有限公司，廣東 佛山 528000）

克百威（carbofuran），又名呋喃丹、蟲螨威，是一種因具有高效、低毒、選擇性強等優點而被廣泛應用的氨基甲酸酯類農藥。克百威在農作物中，除了本體殘存外，還存在相關降解物，其降解物又分為3-羥基克百威（3-hydroxycarbofuran）和3-酮基克百威（Carbofuran-3-keto）。其中，3-羥基克百威毒性大[1]。GB 2763—2021《食品中農藥最大殘留限量》規定，克百威殘留物為克百威和3-羥基克百威之和，在食用菌中的最大殘留限量定為 0.02 mg·kg-1[2-3]。

現行的國家標準和其他標準體系中，較為常用的有C18 固相萃取小柱、Carb/NH2固相萃取小柱、QuEChERS 凈化管、凝膠色譜儀等方法，多使用OPA 進行衍生，再柱后衍生法進行測定，如GB 23200.112—2018《植物源性食品中9 種氨基甲酸酯類農藥及其代謝物殘留量的測定 液相色譜-柱后衍生法》和NY/T 761—2008 的第三部分[4-5]。目前，國內外的主流檢測儀器有GC、HPLC、GC-MS/MS、HPLCMS/MS 等。由于克百威屬于極性強、熱穩定性較差的物質，因此，更適合使用HPLC 或HPLC-MS/MS 進行檢測。雖然HPLC-MS/MS 技術已日趨成熟，但其成本昂貴，在一般實驗室中難以得到推廣和應用。用高效液相色譜法檢測克百威和3-羥基克百威，具有選擇性強、靈敏度較高、重現性較好，且易于實現等優點。

基于此，本研究期望建立一種液相色譜法檢測食用菌中克百威和3-羥基克百威的分析方法，旨在保證食用菌的質量安全、加強環境保護。

1 材料與方法

1.1 儀器設備

高效液相色譜儀 U3000 analytical（配FLD 檢測器，Thermo Fisher）；高速均質儀（德國IKA 集團）；多功能渦旋混合器（上海力辰）；24 位氮吹儀（上海安浦）；冷凍離心機（湖南湘儀）。

1.2 標準物質與試劑

克百威標準品、3-羥基克百威標準品（1 000 mg·L-1，上海安浦）；乙腈、甲醇（色譜純，默克）；MgSO4、NaCl（分析純，國藥）；Na3C6H5O7·2H2O、C6H6Na2O7·1.5H2O（分析純，阿拉丁）；PSA（分析純，上海安浦）；Milli-Q 超純水。

1.3 試驗方法

1.3.1 溶液配制

混合標準溶液：吸取一定量的克百威、3-羥基克百威貯備液，置棕色容量瓶中，用乙腈稀釋成濃度為5 mg·L-1混合標準工作液避光-18 ℃及以下條件保存，有效期1 個月。用乙腈逐級稀釋成濃度分別為 0.05、0.10、0.20、0.50、1 mg·L-1的標準工作曲線。

1.3.2 樣品前處理

稱取10 g 食用菌試樣于50 mL 離心管中，加入20 mL 0.1 % 甲酸乙腈溶液，用高速均質機20 000 r·min-1均質1 min，加入4 g MgSO4、1 g NaCl、1 g Na3C6H5O7·2H2O、0.5 g C6H6Na2O7·1.5H2O及1 顆陶瓷均質子，3 000 r·min-1渦旋1 min 后8 000 r·min-1冷凍離心5 min[6]。取10 mL 上清液加入含1 500 mg MgSO4、250 mg PSA 的15 mL 塑料離心管中，3 000 r·min-1渦旋1 min，8 000 r·min-1離心5 min。取2 mL 上清液于40 ℃水浴氮吹至近干，殘渣用乙腈定容至1 mL，過微孔濾膜，用于測定[7]。

1.3.3 色譜條件

色譜柱：C18 柱，150×4.6 mm，5 μm；流動相：甲醇+0.1 %甲酸溶液=30+70；流速：1 mL·min-1；熒光檢測器：λem=209 nm，λex=307 nm；進樣量：10 μL。

2 結果與分析

2.1 線性范圍和檢出限

克百威、3-羥基克百威混合系列工作液濃度分別為 0.05、0.10、0.20、0.50、1 mg·L-1。以目標農藥的保留時間定性，被測定的試樣中克百威、3-羥基克百威的色譜峰的保留時間與標準物質中所對應的色譜峰的保留時間作比較，相差應在±0.05 min 之內。

采用外標法定量，以標準物質中克百威、3-羥基克百威的質量濃度和色譜峰的峰面積，繪制其標準曲線，結果如表1 所示，標準曲線圖譜如圖1 所示。在0.05～1 mg·L-1的線性范圍內，克百威相關系數（r2）為0.998 95，3-羥基克百威相關系數（r2）為0.999 44，定量限均為0.01 mg·kg-1，各考察參數均滿足標準限值要求。

表1 克百威、3-羥基克百威線性關系與檢出限表

圖1 克百威、3-羥基克百威的線性曲線圖

2.2 方法的準確度和精密度

準確度指在一定實驗條件下多次重復性試驗測定值與參考值之間的接近程度。在本方法中，準確度以試驗回收率進行評估，精密度以變異系數（CV）進行評估。

取18 份陰性食用菌樣品，每份試樣質量為10 g，分別添加克百威、3-羥基克百威混合標準溶液至0.05、0.10、0.20 mg·kg-13 個水平濃度，每個水平做6 個平行試樣。樣品按2.3.3 步驟進行前處理后進行上機測試，分別計算平均值、平均回收率和實驗室內變異系數。結果顯示，當添加濃度為0.05、0.10、0.20 mg·kg-1時，克百威回收率為85.29%～101.1 %，CV 值（n=6）為1.48～6.25；3-羥基克百威回收率為93.04 %～98.29 %，CV 值（n=6）為1.16～1.77。具體計算結果如表2 所示，加標圖譜如圖2 所示。結果表明，克百威、3-羥基克百威的回收率和實驗室內變異系數均滿足規定要求。

表2 克百威、3-羥基克百威回收率和變異系數測定結果表

圖2 添加水平為0.20 mg·kg-1 樣品的液相色譜圖

3 結語

本試驗建立了一種經QuEChERS 凈化，液相色譜法（HPLC）測定食用菌中克百威、3-羥基克百威殘留量的檢測方法。QuEChERS 凈化法是目前用于農殘檢測的熱門前處理方法，具有步驟便捷、試驗耗時短、過程損失小的優勢，整體過程具有簡單、高效、成本低、易于推廣的特點，且該試驗方法線性范圍、檢測限、精密度和準確度均滿足現行標準的要求，可以為今后建立食用菌的其他農藥殘留檢測提供參考。