摘" 要:豬流感是由豬流感病毒導致的一種高度傳染性病毒病,多發于春冬兩季,各品種、年齡的豬均可發病,給養豬業帶來了重大的經濟損失。本文從豬流感的流行情況及臨床癥狀展開敘述,總結近年來豬流感的實驗室診斷方法,提出相關防治措施,以期為豬流感的防控提供參考。
關鍵詞:豬流感;流行情況;臨床癥狀;實驗室診斷;防治措施
中圖分類號:S851.33 文獻標志碼:A 文章編號:1001-0769(2024)03-0067-04
豬流感(swine influenza,SI)是由豬流感病毒(swine influenza virus,SIV)引起的一種高度傳染性病毒病,多發于冬春兩季,各品種、年齡的豬均可發病。豬流感的臨床癥狀通常表現為咳嗽、流鼻涕、直腸溫度升高、昏睡、呼吸困難及食欲減退等[1],還可引起流產等繁殖障礙。豬流感的發病率為100%,死亡率較低,繼發感染會加重病情,治療困難,會給養豬業造成嚴重的經濟損失[2]。
豬流感病毒是分節段的單股負鏈RNA病毒,屬于正黏病毒科A型流感病毒屬,核衣殼外囊膜上有血凝素(hemagglutinin,HA)和神經氨酸酶(neuraminidase,NA)兩種表面糖蛋白,根據抗原性差異可分為不同亞型。最常鑒定到的亞型為經典型H1N1和禽類H1N1、人類H1N1和H1N2、重組H3N2和重組H1N2,其他在豬體內可鑒定的亞型還包括重組H1N7、H3N1、H2N3、禽類H4N6、H3N3和H9N2。在歐洲發現的H1N1、H1N2和H3N2亞型流感病毒在抗原和遺傳上不同于在美國發現的同亞型病毒。豬的呼吸道內有受體,可結合豬、人類和禽類的甲型流感病毒。因此,豬、禽、人類的甲型流行病毒可在豬體內進行基因重組,豬被稱為產生新型流感病毒的“混合器”[3]。A型流感病毒能感染人、馬、豬和各種禽類等動物。人和禽流感病毒進入豬體內后可以與豬流感病毒發生重組,導致其具有跨越物種屏障的傳播能力,可引發大流行[4]。因此,本文從豬流感病毒的流行情況及臨床癥狀展開敘述,總結近年來豬流感的診斷及防控方法的研究進展,以期為豬流感的防控提供參考。
1" 流行情況
目前,從豬體內分離出H1N1、H1N2、H3N2、H5N1及H7N7等亞型豬流感病毒,其中H1N1、H1N2和H3N2亞型流行較為廣泛,在流行過程中在豬體內重組,形成了穩定的遺傳譜系,給養豬業帶來巨大威脅。
1918年,西班牙發生人和豬幾乎同時感染經典H1N1亞型豬流感病毒,據報道死亡人數達5 000萬,造成了重大影響,此次流行被稱為“西班牙流感”。隨后在北美洲、南美洲、歐洲、亞洲等地區陸續有報道。我國于1991年第一次從豬體內分離到經典H1N1亞型豬流感病毒,經分析發現該毒株屬于歐亞禽進化分支,2000年后分離率逐漸升高。魏啟珍等在1980年左右的血清學調查中發現H1N1亞型和H3N2亞型流感病毒抗體已在豬群中存在。陳化蘭等在2010年至2013年開展的豬流行病學調查中發現,歐洲禽類H1N1亞型流感病毒在我國豬群中已占據首位。相關研究表明,H1N1亞型流感病毒的流行是由歐洲H3N2亞型與人類季節性的H1N1亞型流感病毒的HA片段相互重配導致的[5]。2009年,墨西哥發生了人感染pdm/09 H1N1亞型流感病毒,隨后迅速向全世界傳播[6],經分析發現,該型流感病毒屬于北美三源重排和歐洲類禽豬流感病毒的重排產物。目前,重組pdm/09 H1N1亞型流感病毒基因片段已在世界豬群中普遍存在,但是否再次導致大流行尚未可知。
2" 臨床癥狀
豬流感主要引起呼吸道癥狀,特征為咳嗽、打噴嚏、流鼻涕、直腸溫度升高、昏睡、呼吸困難及食欲減退等。豬繁殖與呼吸綜合征病毒、豬偽狂犬病毒、豬肺炎支原體、豬呼吸道冠狀病毒、胸膜肺炎放線桿菌和其他細菌也可導致類似的呼吸道癥狀,但有所不同。其中胸膜肺炎放線桿菌引起的急性感染癥狀與豬流感癥狀相似,如呼吸困難、呼吸急促、腹式呼吸、咳嗽、發熱、沉郁和食欲減退。豬流感病毒在感染24 h后出現臨床癥狀,并從鼻腔排毒,7~10 d后停止排毒。豬流感呈流行性或地方流行性兩種形式。流行性豬流感可迅速傳播至整個豬群,在沒有繼發感染的情況下很快康復;地方流行性豬流感的臨床癥狀則不明顯[3,7]。豬流感的發病率為100%,而死亡率一般較低,若發生繼發感染,病情會加重,死亡率會有所升高,給養豬業帶來巨大的經濟損失,需給予重視。
3" 實驗室診斷方法
目前,實驗室常用的確診方法分為病毒分離、血清學及分子生物學等檢測方法,各有特點,可根據實際情況自行選擇。
3.1 病毒分離
豬流感病毒會在呼吸道內增殖,因此,樣本采集一般采用呼吸道拭子或肺組織病料,然后用無菌的細胞培養液培養或磷酸鹽緩沖液浸泡、均漿等處理病料,通過雞胚接種或細胞培養分離病毒。病毒分離方法的優點是可以通過直接測血凝判斷是否存在豬流感病毒,缺點是耗時較長,無法快速做出診斷。
3.2 血清學方法
目前臨床中常用的血清學檢測技術為血凝抑制試驗(hemagglutination inhibition,HI)和酶聯免疫吸附測定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)等,可應用于臨床病例確診、流行率監測、疫苗接種后畜群或個體的免疫狀態確定等。HI是豬流感血清學方法中一種常用的方法,也是疫苗免疫后畜群/個體動物免疫狀態確定的關鍵,可實現免疫抗體的定量檢測。ELISA在確定動物群體/個體豬流感感染情況、疫病根除計劃和流行率監測方面比HI更具優勢。王飛飛等[8]根據純化的歐亞類禽H1N1亞型豬流感病毒滅活全病毒作為包被抗原建立了一種競爭ELISA方法。該方法與甲型H1N1亞型豬流感病毒、H3N2亞型豬流感病毒及豬圓環病毒2型等病毒均無交叉反應,特異性強。 謝良志等[9]建立了一種抗甲型H1N1亞型豬流感病毒HA蛋白單克隆抗體及雙抗體夾心ELISA方法。該方法靈敏度高,可以特異性識別2009年甲型H1N1亞型流感,與H1N1亞型流感病毒的其他毒株以及其他流感病毒亞型無交叉反應。
3.3 分子生物學方法
目前,臨床上常用的分子生物學診斷方法為常規PCR和實時熒光定量PCR。常規PCR是較早使用的分子生物學方法,在臨床病例確診過程中較為常用。實時熒光PCR是在常規PCR基礎上改進而來,在確定群體/個體感染情況、疫病根除計劃、臨床病例確診及流行率監測中均表現較好。張宇鑫等[10]建立了一種快速準確檢測豬繁殖與呼吸綜合征病毒、豬偽狂犬病病毒、豬圓環病毒2型和豬流感病毒4種豬呼吸道病毒的四重PCR。該方法特異性強,敏感性高,且與單一PCR的陽性符合率為100%。顧敏等[11]建立了一種用于雙重熒光定量PCR,不僅在臨床流行病學調查中可以對豬的鼻腔拭子和肺臟、氣管等組織樣本以及雞胚尿囊液進行檢測,還可實現H1和H3亞型豬流感病毒分型和定量測定。以上檢測方法均為實驗室常用的檢測方法,部分已通過驗證應用于臨床,每種方法各有其適用的場景,可根據實際需求,單獨使用或多種方法聯合使用,以便在發生豬流感后及時做出診斷。
4" 防治措施
4.1 隔離消毒
豬場應制定合理的疫病防控制度,并根據自身條件和環境要求規劃出疫病隔離區。當豬場發生群發疾病時,應盡快采取隔離措施,并對污染區豬舍、環境及飲水等進行徹底消毒。豬舍可選用生石灰或漂白粉消毒,環境、飲水和料槽等可使用2%~5%的過氧乙酸或季銨鹽類溶液噴灑消毒。污染區應連續消毒,消毒后保持地面干燥,以防細菌滋生。豬舍最好空置30 d。
4.2 治療方法
在治療過程中,應定期對發病豬和隔離豬舍使用0.1%新吉爾滅消毒,以減少傳播。對疑似和確診病例應及時治療,西藥主要使用M2離子通道阻斷劑(金剛烷胺和金剛乙胺等)和神經氨酸酶抑制劑(扎那米韋、帕拉米韋及蘭尼米韋等)兩類抗病毒藥物,配合碘化鉀、可待因和噴托維林等藥物進行對癥治療。同時,使用抗生素和磺胺類藥物來預防繼發感染。中藥以清熱解毒、止咳化痰為目的,常使用清開靈注射液、板藍根注射液、柴胡注射液和雙黃連注射液等藥物[12]。
4.3 疫苗接種
目前,市場上的豬流感疫苗分為全病毒滅活疫苗、弱毒疫苗、亞單位疫苗等。疫苗接種是預防豬流感的有效方式,但由于流行毒株的不同,不能完全保護豬不發病,因此,選擇適合的豬流感疫苗至關重要。
5" 小結
綜上所述,豬流感是一種高度傳染性病毒病。因此,在飼養過程中應采取嚴格的生物安全防控措施。加強飼養管理,嚴格檢疫,并對進場人員、車輛等嚴格消毒。日常應對豬舍定期消殺,以切斷傳播途徑;發現病例,及時隔離。防治結合才能更好地預防豬流感,以減少不必要的經濟損失。
參考文獻
[1] MINE J,UCHIDA Y,TAKEMAE N,et al.Genetic characterization of influenza a viruses in Japanese swine in 2015 to 2019[J].Journal of Virology,2020,94(14):e02169-19.
[2] BAGNELL CA,BARTOL FF.Review:maternal programming of development in the pig and the lactocrine hypothesis[J].Animal :an International Journal of Animal Bioscience,2019,13(12):2978-2985.
[3] 世界動物衛生組織.OIE陸生動物診斷試驗與疫苗手冊:8版[M].農業農村部畜牧獸醫局,組譯.北京:中國農業出版社,2023.
[4] ZHAO Y,SUN F,LI L,et al.Evolution and pathogenicity of the H1 and H3 subtypes of swine influenza virus in mice between 2016 and 2019 in China[J].Viruses,2020,12(3):298.
[5] BROWN I H,HARRIS P A,MCCAULEY J W,et al.Multiple genetic reassortment of avian and human influenza A viruses in European pigs,resulting in the emergence of an H1N2 virus of novel genotype[J].Journal of General Virology,1998,79(Pt 12):2947-2955.
[6] KIRISAWA R,OGASAWARA Y,YOSHITAKE H,et al.Genomic reassortant of pandemic A (H1N1) 2009 virus and endemic porcine H1 and H3 viruses in swine in Japan[J].Journal of Veterinary Medical Science,2014,76(11):1457-1470.
[7] 趙玉仲.2018-2020年豬流感病毒分離鑒定和豬流感血清學調查[D].泰安:山東農業大學,2021.
[8] 王飛飛,黃凱倫,宋祖晨,等.歐亞類禽H1N1豬流感病毒HA蛋白單克隆抗體的制備及競爭ELISA檢測方法的建立[J].中國預防獸醫學報,2022,44(9):946-951,976.
[9] 謝良志,黃序,張杰,等.抗甲型H1N1豬流感病毒血凝素蛋白單克隆抗體及雙抗夾心ELISA試劑盒.2018[2024-06-15].
[10]張宇鑫,吳艷,張偉,等.豬繁殖與呼吸綜合征病毒、偽狂犬病病毒、豬圓環病毒2型和豬流感病毒四重PCR檢測方法的建立[J].動物醫學進展,2023,44(8):22-27.
[11]顧敏,陳凱彪,劉秀梵,等.用于H1和H3亞型豬流感病毒檢測與分型的熒光定量RT-PCR引物、探針及試劑盒:CN202010806504.8[P].2020-10-30.
[12]韓樂斌.2020—2021年山東省豬流感病毒分離鑒定和豬流感血清學調查[D].泰安:山東農業大學,2022.
基金項目:杭州市桐廬縣511中青年人才培養工程
作者簡介:袁偉琴(1988— ),女,本科,主要從事動物檢疫工作
*通信作者:陳云蕾(1991— ),男,碩士,獸醫師,主要從事獸醫技術服務和獸醫實驗室檢測技術工作