張掖地區(qū)豬場鏈球菌的分離鑒定與耐藥性分析

摘" 要：為了分析張掖地區(qū)豬場鏈球菌的流行情況及對臨床中常用抗菌藥的耐藥性，本試驗于2022—2023年采集張掖地區(qū)豬場疑似患豬鏈球菌病死亡豬的肺臟、肝臟、脾臟及關(guān)節(jié)液等組織樣本182份，采用細菌分離培養(yǎng)、形態(tài)學(xué)觀察、生化鑒定等鑒定方法對鏈球菌進行分離鑒定，采用人工感染試驗動物和K-B藥敏紙片法分析鏈球菌的致病性和耐藥性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，從采集的182份樣本中分離到102株豬鏈球菌，其中82株具有致病性，可引起小鼠死亡；82株致病性鏈球菌對新霉素、阿莫西林、氨芐西林等8種藥物的耐藥率在58.5％～96.3％，對其他藥物的耐藥率在3.7％～30.5％。本研究為該地區(qū)豬場不同階段豬（育肥豬、仔豬）的鏈球菌病防控提供參考依據(jù)。

關(guān)鍵詞：豬；鏈球菌；分離鑒定；耐藥性

中圖分類號：S854.4+4 文獻標(biāo)志碼：A 文章編號：1001-0769（2024）03-0074-03

在養(yǎng)豬過程中，細菌性疾病如大腸桿菌病、沙門菌病、鏈球菌病、副豬嗜血桿菌病、放線菌病等是臨床中常見疾病，可引起不同階段的豬發(fā)生腹瀉、肺炎、關(guān)節(jié)炎等臨床癥狀，發(fā)病率和死亡率均較高，給養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重的影響[1]。鏈球菌廣泛存在于自然界中，是一種常見的革蘭陽性球菌，可引起多種動物（豬、牛、羊、鹿、雞、鴨、鵝）及人感染，嚴(yán)重危害動物和人的健康，為臨床中一種常見的人獸共患病原菌[2-3]。豬鏈球菌可以通過不同的途徑引起不同階段的豬（育肥豬、仔豬）發(fā)生一系列急性癥狀（急性敗血癥）與慢性感染（關(guān)節(jié)炎），嚴(yán)重者出現(xiàn)急性死亡，會給養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重影響[4-5]。相關(guān)研究表明，豬鏈球菌可感染各個年齡段的豬，其中對仔豬危害較大，常表現(xiàn)為急性敗血癥死亡，死亡率達80％以上，在臨床上常與病毒性疾病混合感染，給養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟損失[6]。

本試驗采集張掖地區(qū)豬場疑似患鏈球菌病死亡豬的組織樣本，共182份，病料采用多種鑒定方法進行鏈球菌鑒定，并進行致病性和耐藥性分析，為張掖地區(qū)豬場不同年齡段豬（育肥豬、仔豬）的鏈球菌病防控提供參考依據(jù)。

1" 材料與方法

1.1 病料來源

試驗于2022—2023年采集張掖地區(qū)豬場疑似患鏈球菌病死亡豬的肺臟、肝臟、脾臟及關(guān)節(jié)液等組織樣本，共計182份。

1.2 細菌分離培養(yǎng)

在無菌條件下，將采集的組織樣本進行處理，分別接種于7％綿羊血脫纖培養(yǎng)基，37 ℃恒溫培養(yǎng)12～18 h，挑取優(yōu)勢（完全溶血）單個菌落，分區(qū)劃線接種于鏈球菌顯示培養(yǎng)基，37 ℃恒溫培養(yǎng)8～12 h，挑取鏈球菌顯示培養(yǎng)基上典型單個菌落進行染色鏡檢，觀察形態(tài)學(xué)。

1.3 細菌生化鑒定

在無菌條件下，將鏈球菌顯色培養(yǎng)基上典型的單個菌落接種于胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基（tryptic soy peptone broth medium，TSB），37 ℃恒溫培養(yǎng)至對數(shù)生長期，參照鏈球菌生化鑒定試劑盒說明書，將菌液濃度用TSB調(diào)整為2個麥?zhǔn)蠞岫?，然后接種于陽性菌鑒定試紙條，37 ℃培養(yǎng)12～18 h，進行生化特性鑒定。

1.4 致病性分析

將1.3中培養(yǎng)至對數(shù)生長期的菌液用平板計數(shù)法進行計數(shù)，并將菌液濃度調(diào)整為1×108 CFU/mL，通過腹腔注射攻毒小鼠，攻毒劑量為每只0.3 mL。未攻毒組小鼠腹腔注射等量的TSB。將攻毒組小鼠與未攻毒組小鼠隔離飼養(yǎng)6 d，每天記錄小鼠的發(fā)病和死亡情況。

1.5 藥敏試驗

將1.3中培養(yǎng)至對數(shù)生長期的菌液濃度調(diào)整為1×108 CFU/mL，利用藥敏紙片進行藥敏試驗，操作步驟和判定結(jié)果參照美國臨床和實驗室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會（the Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）2013年推薦的標(biāo)準(zhǔn)進行。

2" 結(jié)果

2.1 細菌分離鑒定

臨床分離菌株在7％綿羊血脫纖培養(yǎng)基上長出典型的圓形、大小一致的α溶血菌落，在鏈球菌顯色培養(yǎng)基上長出綠色、大小一致的典型菌落，染色可見單個或聚在一起的兩頭鈍圓的桿菌，與《伯杰氏系統(tǒng)細菌學(xué)手冊》中鏈球菌的培養(yǎng)特性及形態(tài)學(xué)基本一致。

2.2 細菌生化試驗鑒定

結(jié)果顯示，臨床分離菌株為陽性菌株，能分解葡萄糖和麥芽糖，氧化酶試驗為陽性，不產(chǎn)硫化氫，與《伯杰氏系統(tǒng)細菌學(xué)手冊》中鏈球菌的生化特性基本一致。分離菌株可鑒定為鏈球菌。

2.3 分離菌株的致病性分析

在攻毒試驗期間，攻毒組小鼠在攻毒后2～ 6 d出現(xiàn)不同的發(fā)病情況，個別小鼠出現(xiàn)急性死亡。在死亡小鼠的肝臟、肺臟、脾臟等組織病料中分離到了鏈球菌。未攻毒組小鼠未出現(xiàn)明顯的臨床癥狀。結(jié)果顯示，分離的102株鏈球球菌中有82株能引起小鼠發(fā)病或死亡，表明這82株分離菌株對小鼠具有致病性。

2.4 耐藥性分析

由表1可知，臨床中分離的82株致病性鏈球菌對新霉素、阿莫西林、氨芐西林等8種藥物的耐藥性較強，耐藥率在58.5％～96.3％；對頭孢噻呋、頭孢噻肟、氟苯尼考等8種藥物的耐藥率在3.7％～30.5％。結(jié)果表明，臨床中分離的鏈球菌對不同藥物的耐藥性不同。

3" 討論

鏈球菌在飼養(yǎng)環(huán)境中分布比較廣泛，可引起牛、羊、豬、鹿、雞、鴨、鵝等多種動物及人發(fā)病，主要的臨床表現(xiàn)為敗血癥、腹瀉、肺炎、關(guān)節(jié)炎、腦膜炎等一系列癥狀。鏈球菌可以通過多種途徑感染不同階段的動物，其中對幼齡動物（仔豬、犢牛及羔羊）危害較大，死亡率較高，是一種常見的人獸共患病原菌[7]。近幾年，國內(nèi)關(guān)于仔豬鏈球菌病的報道越來越多，在我國不同地區(qū)的豬場廣泛流行。本試驗研究發(fā)現(xiàn)，從張掖地區(qū)豬場采集的182份樣本中共分離到102株鏈球球菌，其中82株具有致病性，可引起小鼠死亡，表明該地區(qū)豬場的鏈球菌感染比較嚴(yán)重，應(yīng)注意該病的綜合防控。國內(nèi)相關(guān)研究表明，分離的豬鏈球菌對臨床常用的藥物有不同程度的耐藥性，且呈現(xiàn)多重耐藥現(xiàn)象，給該病的防治帶來一定困難[8-9]。本試驗研究顯示，這82株致病性鏈球菌對臨床中常用的藥物有耐藥性，耐藥率在58.5％～96.3％；對其他藥物的耐藥率在3.7％～30.5％，說明從張掖地區(qū)豬場分離的致病性鏈球菌存在嚴(yán)重的耐藥性問題。因此，在臨床中應(yīng)重視鏈球菌病的防治，減少耐藥性的產(chǎn)生。

4" 結(jié)論

從張掖地區(qū)豬場分離的182份組織樣本中分離到102株鏈球菌，其中82株為致病性鏈球菌；這82株鏈球菌對臨床常用的8種抗菌藥物的耐藥率在58.5％以上，對其他藥物的耐藥率在為3.7％～30.5％，應(yīng)引起重視，在防治時應(yīng)根據(jù)藥敏試驗結(jié)果，選擇敏感的抗生素進行治療。

參考文獻

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