重慶部分地區山羊場藍舌病流行情況調查

張邑帆，鄭 華，張素輝

（重慶市畜牧科學院，重慶市獸用生物制品工程技術研究中心，國家動物疫病重慶觀測實驗站，重慶 榮昌 402460）

羊藍舌病是一種病毒性疾病，是由藍舌病病毒（BTV）感染造成的，因患病羊的舌頭呈藍紫色而被命名為羊藍舌病。患病動物的血液和精液中均含有大量病毒［1］，可以通過吸血昆蟲傳播病原［2］。由于精液中含有大量病毒，可以在公母羊交配時將疾病傳播給對方。對于妊娠期的母羊，該病極易造成流產與死胎。藍舌病毒的血清型有多種，疫苗免疫非常困難，免疫效果不理想，但是科學化飼養管理可以有效降低藍舌病的患病率。

國家動物疫病重慶觀測實驗站于2021 年3月～2023 年6 月對重慶市6 個區縣的35 個山羊場進行全血樣品采集，應用RT-nested PCR 方法進行BTV檢測，分析各區縣羊群的BTV感染情況及流行特點，為防控該病提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 樣品 1 771份山羊全血樣品分別于2021年3月～2023年6月采集自重慶榮昌、石柱、彭水、酉陽、長壽和武隆共6個區縣的35個山羊場，每半年采集一次，故2023年下半年的樣品未采集。

1.2 主要試劑 病毒DNA/RNA 提取試劑盒，購自西安天隆科技有限公司；DL2000 DNA Marker，2×Taq PCR MasterMix，購自寶生物工程（大連）有限公司；反轉錄試劑：HiScript II One Step RT-PCR 試劑盒購自南京諾唯贊生物科技股份有限公司。

1.3 方法

1.3.1 引物設計與合成 根據GenBank 發表的BTV及相關病毒的基因序列，目的基因片段大小為100 bp，引物序列為：BTV-A：5′-GTTCTCTAGT TGGCAACCACC-3′；BTV-B：5′-AAGCCAGACTG TTTCCCGAT-3′；BTV-C：5′-GCAGCATTTTGAGA GAGGGA-3′；BTV-D：5′-CCCGATCATACATTGC TTCCT-3′。引物由生工生物工程（上海）有限公司合成。

1.3.2 RNA 提取 本試驗使用全自動核酸提取儀進行RNA 提取，按照試劑盒要求在試劑盒加樣孔內加入200 μL羊血樣品、20 μL蛋白酶K，在磁珠孔插入攪拌套后放入全自動核酸提取儀內進行RNA 提取。等操作完成后，用移液器移出50 μL RNA模板到1.5 mL離心管內備用。

1.3.3 RT-PCR 擴增 反應體系（20 μL）：上述提取的RNA 模板5 μL，BTV-A、B 引物各0.5 μL，2×One Step Mix 10 μL，One Step Enzyme Mix 1μL，ddH2O 3μL。反應條件：50 ℃反轉錄30 min；95 ℃預變性3 min；95 ℃變性30 s、55 ℃退火30 s、72 ℃延伸30 s，共40次循環；72 ℃延伸10 min。

1.3.4 PCR擴增 反應體系（25 μL）：上述擴增的RT-RCR產物模板1 μL，BTV-C、D引物各0.5 μL，2×Taq PCR MasterMix 12.5 μL，ddH2O 10.5 μL。反應條件：94 ℃預變性2 min；94 ℃變性30 s、51 ℃退火30 s、72 ℃延伸20 s，共30 次循環；72 ℃延伸10 min。PCR 擴增產物經2.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測，電泳緩沖液為1×TAE，電泳條件為110 V 30 min，凝膠成像系統拍照保存，陽性對照片段大小為100 bp。

2 結果

2.1 不同區縣BTV檢測結果 2021～2023年對重慶6個區縣35個山羊場的1 771份山羊全血樣品進行BTV 檢測，結果得出：總樣品陽性率為6.2%（109/1 771），場陽性率為42.9%（15/35）；榮昌的樣品陽性率為9.6%（29/303），石柱的樣品陽性率為3.8%（13/344），彭水的樣品陽性率為2.9%（9/310），酉陽的樣品陽性率為11.1%（36/325），長壽的樣品陽性率為6.5%（20/306），武隆的樣品陽性率為1.1%（2/183）。詳見表1。

表1 重慶部分區縣的BTV檢測結果

2.2 2021～2023年BTV檢測結果 由表2可知，2021年樣品陽性率為4.9%（31/631），2022年樣品陽性率為8.6%（66/766），2023 年樣品陽性率為3.2%（12/374）。

表2 2021～2023年BTV檢測結果

2.3 某山羊場BTV檢測電泳圖 由圖1可知，待檢測的22 個樣品中，有7 個樣品的BTV 為陽性（編號：2、3、4、12、14、15、17）。

圖1 某山羊場BTV檢測電泳圖

3 討論

羊藍舌病主要是BTV 引起的一種嚴重侵害反芻動物的傳染病，主要由吸血昆蟲傳播。羊藍舌病會造成母羊流產，嚴重的會引起吞咽困難和呼吸困難，部分羊還會出現便秘或者腹瀉。

由于公羊的精液和妊娠母羊的胎盤都能造成垂直傳播，引起羔羊患病，因此，每一頭羊都要給予嚴格的檢查，對患病羊需要及時淘汰，嚴重者可及時撲殺，防止造成更多健康羊感染。在夏季，圈舍需要做滅蠅滅蟲處理。

重慶酉陽土家族苗族自治縣和榮昌區感染BTV 的陽性率最高，分別為11.1%和9.6%。榮昌和酉陽相比，榮昌的場陽性率為25%（2/8），酉陽的場陽性率為75%（3/4），榮昌有2個場的感染相當嚴重。經過調查，發現這兩個區縣的幾個山羊場有兩個共同點：一是從其他地區引進山羊進行品種改良，可能將病毒不小心帶入健康羊舍；二是沒有對感染山羊進行及時淘汰，只進行了隔離，故陽性率偏高。BTV樣品陽性率最低的是武隆區，為1.1%（2/183），分析原因如下：一是科學的飼養管理，夏季圈舍的滅蠅滅蟲工作做得好；二是武隆區的樣品數偏低。

目前，對BTV流行情況的調查基本上只針對抗體，而沒有對抗原的調查。有文獻報道內蒙古的BTV 陽性率為4.17%［3］，新疆的BTV 陽性率為6.79%［4］，廣西的BTV 陽性率為20.5%［5］。受時間和人力的限制，此次調查選擇的區縣較少，可能與全重慶市的實際情況存在一定差異。今后，我們會持續開展BTV感染情況調查，掌握BTV在重慶地區的流行趨勢，為重慶地區BTV的防控工作提供科學依據。

4 結論

本研究調查了重慶市6 個區縣的35 個山羊場，共采集1 771 份山羊全血樣品，通過檢測，得出BTV樣品總陽性率為6.2%（109/1 771），總體水平偏低。