苦檀子藥材及飲片質量標準研究

羅洪蓮 萬紅才 段萍 徐作剛 劉曉艷 曾琦 譚敏

基金項目：貴州省食品藥品監督管理局項目（ 貴州省中藥材、民族藥材及飲片質量標準增訂；項目編號：DBXZYC52075） 。

作者簡介：羅洪蓮（1993—），女，布依族，本科，主管藥師，研究方向為藥品質量分析及藥品質量標準研究。E-mail：1025072556@qq.com

通信作者：萬紅才（1977—），男，漢族，本科，副主任藥師，研究方向為藥品質量分析及藥品質量標準研究。E-mail：397879050@qq.com

【摘? 要】? 目的：建立苦檀子藥材及飲片的質量標準。方法：首先對多批次苦檀子藥材及飲片進行性狀描述，橫截面、粉末顯微鑒別，而后以大豆苷元和魚藤酮為指標對該藥材及飲片進行薄層色譜鑒別（TLC），最后測定該藥材及飲片的水分、灰分和浸出物。結果：苦檀子藥材及飲片的性狀和顯微特征明顯，TLC主斑點清晰，分離度符合要求，可用于鑒別該藥材；擬定了苦檀子藥材及飲片水分、總灰分、浸出物限量分別為13.0%、3.0%、22.0%。結論：該方法準確可靠，可用于苦檀子藥材與飲片的質量控制。

【關鍵詞】? 苦檀子；質量標準；薄層色譜法（TLC）；大豆苷元；魚藤酮

【中圖分類號】R282??? 【文獻標志碼】 A??? 【文章編號】1007-8517（2023）20-0024-04

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2023.20.zgmzmjyyzz202320007

Study on Quality Standard of Millettia pachycarpa Benth Seed Medicinal Materials and Decoction Pieces

LUO Honglian? WAN Hongcai*? DUAN Ping? XU Zuogang? LIU Xiaoyan? ZENG Qi? TAN Ming

Qiannan Inspection and Testing Institute， Duyun 558000，China

Abstract：Objective To establish the quality standard of Millettia pachycarpa Benth Seed medicinal materials and its decoction pieces. Methods Firstly properties identification and microscopic identification of the medicinal materials and its decoction pieces were carried out. Then the daidzein and rotenone components were identified by TLC. Finally the moisture， total ash and extract were determined. Results The characters and microscopic characteristics were determined. The TLC spots were clear and the resolution was good， so the TLC can be used to identify the medicine. It is suggested the moisture limit is less than or equal to 13.0%， the total ash limit is less than or equal to 3.0%，the limit of extract is greater than or equal to 22.0%.Conclusion The method is accurate and reliable and can be used to control the quality of Millettia pachycarpa Benth Seed medicinal materials and its decoction pieces.

Keywords：Millettia pachycarpa Benth Seed; Quality Standards; Thin Layer Chromatography（TLC）; Daidzein; Rotenone

苦檀子為豆科植物厚果崖豆藤（Millettia pachycarpa Benth.）的干燥成熟種子，冬季采收，除去果皮后曬干的種子，又名土大風子、沖天子、苦蠶子、豬腰子、日頭雞，為民間常用中藥材?？嗵醋泳哂泄ザ局雇?，消積殺蟲，散瘀消腫之功效，常用于疥癬瘡癩，痧氣腹痛，小兒疳積疼痛，外用治踢打損傷，骨折等［1-4］。經查閱文獻，了解到目前國內外對苦檀子研究甚少，需建立新的質量標準對該藥材及飲片進行質量把控。研究結合《中國藥典》2020年版四部通則的方法，通過觀察不同批次該藥材及飲片外觀性狀，藥材的切片、粉末顯微圖片并總結其共性；以大豆苷元和魚藤酮為對照品對該藥材及飲片進行薄層色譜鑒別；測定該藥材不同批次的水分、總灰分、浸出物含量測定等項目并制定合理的限度，最后建立苦檀子藥材及飲片的質量標準，使該中藥材的質量得到有效控制，以保證其藥用安全性、有效性及可靠性，也為該中藥材的下一步其他研究奠定基礎。

1? 儀器與材料

DM-2500型生物顯微鏡（Leica），Las-v3.8型顯微照相系統（Leica），XSE105DU型十萬分之一電子天平（Mettler Toledo），SK250LHC型超聲波清洗器（上?？茖В珼ZF6050型真空干燥箱（上海一恒），SRJX-3-9型馬弗爐（上海實驗），聚酰胺薄膜（浙江臺州市路橋四甲生化塑料廠），大豆苷元對照品（批號：111502-202003，純度：99.3%，中國食品藥品檢定研究院），魚藤酮對照品（批號：G451914，純度：99.3%，德國Dr.Ehrenstorfer GmbH），其余試劑均為分析純，苦檀子藥材及飲片樣品信息見表1，其原植物及供試品樣本均送由貴州中醫藥大學藥學院植物標本鑒定館魏升華教授鑒定為豆科植物厚果崖豆藤（Millettia pachycarpa Benth.） 及其種子（飲片為本研究組自制）。

2? 方法與結果

2.1? 性狀? 本品扁圓略呈腎形或棋子形，長約4 cm，厚約3 cm，表面呈紅棕色至黑褐色，有光澤，或帶有灰白色的薄膜，有橫向裂紋分布，臍點位于中腰凹陷處，子葉2片，肥厚，角質樣，易縱裂；近臍點周圍有不規則的突起，使子葉縱裂而不平。氣微，味淡而后帶有竄透性的麻感［3-4］。

2.2? 鑒別

2.2.1? 顯微鑒別? 將各批次苦檀子藥材及飲片樣品橫切面和粉末制片，在顯微鏡下觀察，總結出以下顯微鑒別特征：本品橫切面表皮為1列柵狀細胞，外被角質層；營養層由多列切向延長的薄壁細胞組成，內側細胞呈頹廢狀；子葉細胞含眾多淀粉粒；分泌腔多見，其四周由一層內含棕黃色分泌物的薄壁細胞組成；偶見成束存在的螺紋導管。本品粉末淺黃色至棕黃色，子葉細胞中充滿圓形或類圓形淀粉粒；淀粉粒眾多，呈圓形、類圓形、盔帽形或不規則形，直徑6～105 μm，多為單粒，復粒少見，臍點明顯，臍點點狀、裂縫狀或人字狀，有的輻射狀開裂，層紋不明顯；種皮柵狀細胞1列，狹長，稍不平整；偶見黃色至棕黃色色素塊；導管多為螺紋，直徑10～35 μm。主要的顯微特征如圖2。

2.2.2? 薄層色譜鑒別??? 取苦檀子藥材或飲片粉末約5 g，加石油醚（30～60 ℃）30 mL振蕩30 min，離心，除去上清液后揮干。稱取脫脂后的苦檀子粉末2.0 g，加甲醇10 mL超聲20 min，濾過，取續濾液作為供試品溶液；取大豆苷元對照品和魚藤酮對照品加甲醇制成濃度分別約為0.5 mg/mL的兩種對照品溶液作為對照溶液；照薄層色譜法（中國藥典2020年版四部通則0502）［5］試驗，吸取上述兩種對照品溶液及供試品溶液各1 μL，分別點于同一聚酰胺薄膜上，以冰乙酸-水（3∶2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1％三氯化鋁乙醇溶液，置紫外光燈（254 nm）下檢視。供試品色譜中，在與大豆苷元、魚藤酮對照品色譜相應的位置上，均顯相同顏色的斑點，如圖3、圖4。

2.3? 檢查? 照水分測定法（中國藥典2020年版四部通則0832，第二法）［6］和灰分測定法（中國藥典2020年版四部通則2302）［7］對以上苦檀子藥材及飲片各10批次進行測定，結果見表2。10 批槐枝苦檀子藥材樣品的水分為7.7%～13.9%，均值10.5%；總灰分為1.7%～3.0%，均值2.2%。10批苦檀子飲片的水分為7.5%～13.7%，均值10.3%；總灰分為1.7%～2.9%，均值2.1%。

2.4? 浸出物? 取樣品粉末，分別以水、60%乙醇溶液、70%乙醇溶液、稀乙醇溶液作為浸出介質，考察冷浸、熱浸兩種浸出方式，以對浸出介質和提取方式進行優選。熱浸法的浸出物含量普遍較冷浸法高，樣品在各介質中經熱浸提取后的浸出物含量無顯著差異，但浸出介質為水或60%乙醇溶液時，不易濾過或濾過時間過長，導致浸出物穩定性差，故采用70%乙醇溶液作為浸出介質的熱浸法測定。稱取苦檀子藥材及飲片粉末樣品約0.3 g，照浸出物測定法（中國藥典2020年版四部通則2201） ［8］測定浸出物含量，測定結果見表2。10批苦檀子藥材及飲片浸出物結果分別在22.5%～30.8%、22.6%～30.9%，均值分別為27.2%、27.4%。

3? 討論

顯微鑒別可快速、經濟、準確地區分大豆類藥材，對于苦檀子的鑒定具有一定的借鑒意義，《中國藥典》中顯微鑒別法系指用顯微鏡對藥材（飲片）切片、粉末、解離組織或表面制片及含飲片粉末的制劑中飲片的組織、細胞或內含物等特征進行鑒別的一種方法。實驗采用苦檀子切片和粉末制片，通過直接觀察法和滴加甘油醋酸試液、碘試液、水合氯醛試液等方法觀察并總結出以上顯微特征，具體操作方法簡單、便捷，可有效辨別苦檀子藥材及飲片的真偽。

在薄層色譜鑒別法的研究中，經查閱文獻了解到苦檀子含較多的黃酮類化合物［2］，其中大豆苷元為主要化學成分，現代藥理學研究表明，大豆苷元具有預防心血管類疾病［9-10］，預防骨質疏松［11-12］，抗腫瘤［13］和保護神經［14］等作用，魚藤酮則為苦檀子標志性成分，故選此兩種物質為薄層色譜鑒別指標；針對供試品溶液的制備，本實驗小組先用石油醚（30～60 ℃）對樣品粉末進行脫脂，此步驟可有效去除部分背景干擾，然后對供試品溶液的提取溶劑（甲醇、60%甲醇、60%乙醇）提取方式（水浴回流、超聲）、提取時長（10 min、20 min、30 min）進行了考察，最終采取了背景干擾較小，有效省時的超聲提取20 min的方法；然后考察了層析板的選擇，展開劑的選擇及優化，顯色劑的選擇等，最終確定了上述薄層鑒別方法。本研究還按照國家藥典委員會“中藥分析方法驗證指導原則實施細則”的相關要求，對上述薄層分析方法進行了溫度、濕度及不同廠家薄層板三方面的耐用性考察，實驗表明，該方法在低溫（4 ℃）、室溫（24 ℃）、高溫（40 ℃）、低濕度（25%）、中等濕度（50%）高濕度（75%）條件下及選用了浙江臺州市路橋四甲生化塑料廠（生產日期：2022年3月14日）及青島邦凱高新技術材料有限公司（批號：2109023G）兩個廠家的聚酰胺薄膜，其斑點均清晰明了，分離度較好，表明該方法耐用性好，專屬性強。水分和總灰分是控制中藥材及其炮制品質量的基本指標，制定合理的水分限度可保障藥材飲片在存放期間不易發霉變質，合理的總灰分限度則是控制藥材飲片純凈度的有效方法。由于國內外對苦檀子藥材及飲片研究甚少，有效成分尚不清楚，無法建立準確有效的含量測定方法，故選用浸出物測定這一綜合性指標來控制藥品質量。

根據以上測定結果及《中國藥典》2020版四部中藥質量標準指導原則（制定限度范圍可用測定平均值的80%～120%），建議苦檀子藥材及飲片的水分限度不超過13.0%，總灰分限度不超過3.0%，水溶性浸出物限度不得少于22.0%。

綜上，研究確定了苦檀子藥材及飲片的性狀，顯微鑒別特征，建立了薄層色譜鑒別法，并對水分、總灰分及浸出物做出合理的限度規定，形成了一個較為完整的質量評價體系，為貴州省地方標準的制定提供了參考依據。

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（收稿日期：2023-02-02? 編輯：劉? 斌）