基于5-HT 探討電針刺激天樞、足三里對IBS-D 大鼠的影響

張之涵，劉羽彤，顧 玲，趙旭宇，花 煬，葛 飛*，陳美娟*

1.南京中醫藥大學醫學院，江蘇 南京 210023；2.南京中醫藥大學附屬海安市中醫院，江蘇 海安 226600

腸易激綜合征（irritable bowel syndrome, IBS)是一種臨床上較為常見的消化系統紊亂的功能障礙性綜合征，病變部位以胃腸為主[1]。 其臨床表現為慢性或間歇性的腹痛，腹部不適，并伴有大便性狀和排便習慣的異常變化，且受環境、飲食、情緒等諸多因素影響。 臨床上，根據排便特點和糞便性狀分為腹瀉型、便秘型和混合型3 種。 其中，腹瀉型腸易激綜合征（diarrheal irritable bowel syndrome, IBS-D）在我國IBS 患者中占比最多[2]。除消化系統癥狀外，IBS-D患者大多數還存在情緒易激動、煩躁易怒等精神心理癥狀，這對患者及其家屬的生活質量、精神狀態產生極大的影響[3]。

IBS-D 的發病機制較為復雜。目前認為，其發病機制與胃腸動力學異常、內臟超敏反應等相關[4]。 5-羥色胺（5-hydroxytryptamine, 5-HT）是一種重要的神經遞質，與腸道運動和內臟感覺功能密切相關。5-HT 通過激活腸道神經元上的5-HT 受體，如5-羥色胺受體3A 型（5-hydroxytryptamine 3A receptor,5-HT3AR），增加腸道神經元的興奮性。 導致腸道神經傳導異常，使腸道對觸摸、壓力和其他刺激產生過度的反應，從而導致腸道高敏感[5]。 研究表明，可通過針刺天樞、內關、足三里等穴位，作用于白細胞介素-6（interleukin-6, IL-6）、5-HT、降鈣素基因相關肽（calcitonin gene-related peptide, CGRP）等多個靶點，保護腸黏膜抑制炎癥反應，從而有效緩解腸道高敏感性[6]。

相關文獻研究顯示，針灸治療消化系統疾病具有療效佳、預后好、難復發、成本低、患者依從性強等優勢[7]。 腧穴的選擇作為針灸處方的第一組成要素，與針灸的治療效果密切相關。 本研究在中醫學“合募配穴”的指導思想下，基于IBS-D 發病機制的多樣性，提出“同經異腑合募配穴”的刺灸方案，選擇手陽明大腸經募穴天樞和足陽明胃經下合穴足三里，以期更好地改善IBS-D 的臨床癥狀。 傳統針灸是通過在人體穴位上針刺來刺激經絡系統，以達到治療疾病的目的。 而電針則在傳統針灸的基礎上引入了現代的電子設備，通過電流刺激穴位，從而增強治療效果。電針是針灸的一種現代形式，是傳統中醫融入現代科技的典型代表，故本研究將采用電針來刺激穴位。

為進一步探究電針對IBS-D 降低腸道高敏感性、緩解腹瀉癥狀等優勢，本實驗以IBS-D 大鼠作為研究對象，觀察經“同經異腑合募配穴”電針干預后，對IBS-D 大鼠一般體征、內臟高敏感性及結腸組織形態學等影響，初步從5-HT/5-HT3R 通路探討電針治療IBS-D 的作用機制，以期為電針治療IBS-D的臨床應用提供科學客觀的實驗依據。

1 材料

1.1 實驗動物

選取6～8 周齡SPF 級SD 雄性大鼠共24 只，體質量（190±90） g。 由南京市江寧區青龍山動物繁殖場提供，實驗動物許可證號：SCXK（浙）2019-0002。實驗大鼠飼養于南京中醫藥大學醫學院動物房，飼養溫度18～25 ℃，相對濕度為40%～70%，噪音低于50 dB，光照時間與黑暗時間各12 h，并給予正常飲食飲水，實驗中對動物的所有處置均嚴格遵循2006年中華人民共和國科學技術部頒布的《關于善待實驗動物的指導性意見》[8]。 動物實驗已通過南京中醫藥大學實驗動物中心動物實驗倫理委員會批準（倫理批號：202309A023）。

1.2 藥物制備

根據需要進行造模的各組大鼠體質量計算所需番瀉葉藥液量（按10 mL/kg 計算），再計算出番瀉葉（海安市中醫院中藥房，批號：20221008）生藥量，稱取后用約4 倍番瀉葉體積的沸水浸泡番瀉葉30 min，用紗布過濾網過濾藥渣，再煎煮濃縮，制成生藥含量為0.45 g/mL 的番瀉葉藥液。 稱取一定質量的阿洛司瓊（上海麥克林生化科技有限公司，批號：A125218），用純水溶解最終配制成2 mg/mL 的濃溶液。 稱取一定質量的烏來糖（上海源葉生物科技有限公司，批號：S30HS196618），用純水溶解最終配制成20%的烏來糖溶液。 以上藥液制備完成后放置于4 ℃冰箱保存備用，阿洛司瓊使用時用純水將2 mg/mL 的濃溶液稀釋成1 mg/mL 的阿洛司瓊溶液。

1.3 主要試劑及藥品

Western 及IP 細胞裂解液、BCA 蛋白濃度定量試劑盒（上海碧云天生物技術有限公司，批號分別為：21309264、111622221213）；5-HT ELISA 檢測試劑盒（武漢Elabscience生物有限公司，批號：PA088P8J0805）；5-HT3A 一抗（英國Abcam 公司，批號：1017902-1）；GAPDH 單克隆抗體（美國Proteintech 公司，批號：00119680）；HRP 山羊抗兔IgG二抗 （美國Cell Signaling Technology 公司，批號：C15140851）。

1.4 主要儀器

凝膠成像分析儀器、垂直電泳儀[伯樂生命醫學產品（上海）有限公司，型號：Universal Hood Ⅱ、PowerPacTM Basic]；酶標儀（美國伯騰儀器有限公司，型號：BioTek-Elx800）；高通量組織研磨器（寧波新芝生物科技股份有限公司，型號：Scientz-48）；電子分析天平（上海YEASEN 生物科技有限公司，型號：FA2004N）；制冰機[斯科茨曼制冰系統（上海）有限公司，型號：AF100AS）]；標準型旋轉混勻儀、金屬浴恒溫器[大龍興創實驗儀器（北京）股份公司，型號分別為：MX-S、5012101200]；臺式低速離心機（湖南湘儀實驗室儀器開發有限公司，型號：LX-100）；低溫高速離心機[賽默飛世爾科技（中國）有限公司，型號：D3024R]；超純水儀（南京易普易達科技發展有限公司，型號：PLUS-E2-10TJ）；華佗牌毫針（蘇州針灸用品廠，規格：0.25 mm×25 mm）；華佗牌電針儀(蘇州醫療用品有限公司，型號：SDZ-Ⅱ)。

2 方法

2.1 分組與造模方法

SD 雄性大鼠適應性喂養7 d 后開始進行實驗，采用隨機數字表法，將24 只大鼠隨機分為4 組，分別為空白組、模型組、阿洛司瓊組及電針組，每組各6 只。選擇灌服番瀉葉煎劑聯合慢性束縛及避水應激建立IBS-D 動物模型。第1～21 天，將模型組、阿洛司瓊組及電針組大鼠束縛在自制鼠瓶內，限制其活動，時長為2 h；第8～21 天，以上3 組大鼠束縛后灌服番瀉葉溶液，給藥體積為10 mL/kg；第15～21 天，在一個透明的塑料容器（73 cm×54 cm×44 cm）中心位置固定一個圓形平臺（12 cm×12 cm×20 cm)，在容器里加入室溫以下的水，水面低于平臺面1 cm，將大鼠放置在平臺上1 h，并避免外界干擾，連續造模21 d。將每組大鼠分開放置于代謝籠中，分別記錄各組大鼠6 h內排出的稀便數與總排便數。 以稀便率（稀便數/總排便數×100%）≥25%作為造模成功標準[9]。

2.2 干預方法

造模成功后，對空白組、模型組與電針組大鼠予以生理鹽水按1 mL/100 g 體質量灌胃，對阿洛司瓊組大鼠予以1 mg/mL 濃度的阿洛司瓊溶液按1 mL/100 g 體質量灌胃，1 次/d，連續灌胃14 d。對電針組大鼠每日16:00 開始進行電針治療，大鼠在5%異氟烷伴70%氮氣和30%氧氣誘導麻醉后，以1%～2%的濃度維持麻醉。取大鼠仰臥位，穴位定位參照《實驗針灸學》[10]大鼠標準穴位圖譜，選取實驗大鼠的單側足三里、天樞，次日選取對側穴位。用0.25 mm×25 mm華佗牌毫針直刺，天樞直刺3 mm、足三里直刺5 mm后進行電針干預治療，正極連天樞，負極連足三里，兩毫針間隔超過0.5 mm 且不接觸，避免短路。 電針參數為疏密波（疏波10 Hz/密波50 Hz），強度定于該治療儀“1”檔左右，頻率2/100 Hz，電源電壓9 V，電針時間15 min，1 次/d，連續治療14 d。

2.3 大鼠內臟敏感性評估

腹壁回撤反射（abdominal wall retraction reflex,AWR）實驗[11]：0 分為無行為反應，4 分為骨盆抬起、身體呈弓狀，0～4 分隨著大鼠結腸擴張時的行為表現增強而評分增加。具體過程如下：大鼠評分前18 h禁食不禁水，用乙醇棉片對大鼠肛門進行消毒，再將8 號導尿管前端用甘油進行潤滑，然后將導尿管從大鼠肛門慢慢插入，直至球囊距肛門1 cm 左右時停止（應輕柔不可暴力），此時實驗人員用手將導尿管與大鼠尾根部固定在一起。 待大鼠平靜后用5 mL注射器連接好導尿管并向球囊內緩慢均勻注水使其擴張，觀察并記錄大鼠AWR 實驗達到4分時所需的注水量。連續測量3 次，每次20 s，每次間隔5 min，最終結果取3 次測量結果的平均值。AWR 實驗為相同施術者進行操作以減少實驗誤差。

2.4 樣本采集與指標檢測

2.4.1 動物取材 實驗結束前1 天，各組大鼠禁食不禁水。 實驗結束當天用20%烏來糖溶液進行麻醉，劑量按大鼠體質量1 mL/100 g 計算。 于大鼠頸動脈取血后，在離心機中以4 000 r/min 離心10 min（離心半徑40 cm），分離血清。 再將標本放置-80 ℃冰箱保存，用于5-HT ELISA 試劑盒檢測。解剖分離大鼠末端結腸，均剪取同一部位約1 cm 結腸末端組織，用生理鹽水將結腸組織沖洗干凈后；一半放置于濃度為10%的中性甲醛溶液中固定，用于結腸HE染色；另一半直接放置在1.5 mL 離心管并置于-80 ℃冰箱保存，用于Western blot 實驗。

2.4.2 一般指標檢測 （1）一般情況觀察：觀察每天各組大鼠外觀、活動情況、情志等變化。（2）體質量增長率（%）=（2 周后的大鼠體質量-2 周前的大鼠體質量）/2 周前的大鼠體質量×100%。

2.4.3 糞便含水量 取小鼠的新鮮糞便，稱取濕重（g），于烘箱烘干72 h 后再稱取其干重（g）以計算糞便含水量。 糞便含水量（%）=（新鮮糞便-糞便干重）/新鮮糞便×100%。

2.4.4 HE 染色觀察結腸組織形態 將4%多聚甲醛固定大鼠結腸組織經石蠟包埋、切片后，經過PBS、蘇木精染液浸泡，清洗過后，再由酸性乙醇浸潤，碳酸鋰、伊紅染液浸泡后由乙醇、二甲苯溶液浸泡封片后。 在光學顯微鏡下觀察大鼠結腸組織形態病變情況。

2.4.5 血清中5-HT 濃度的測定 ELISA 法檢測血漿中5-HT 含量。分別按照試劑盒操作步驟，檢測血清中5-HT 含量的變化。

2.4.6 Western blot 驗證目的蛋白含量的改變 （1）組織總蛋白的提取：用RIPA 裂解緩沖液提取大鼠結腸組織中的總蛋白。（2）蛋白含量測定：用BCA 蛋白定量試劑盒進行蛋白質定量。 （3）SDS-PAGE 電泳：電泳過后，將總蛋白轉移至硝化纖維素膜上轉膜過程90 min，轉膜結束后將膜浸泡在含一抗（1∶1000）溶液中4 ℃孵育過夜，TBST 清洗后再與二抗（1∶1000）孵育2 h。最后，曝光后分析蛋白5-HT3AR 的相對表達量。

2.5 統計學方法

本研究使用GraphPad Prism 9.0 對實驗數據進行統計。 數據差異比較采用單因素方差分析。 以P<0.05 表示差異具有統計學意義。

3 結果

3.1 各組大鼠一般情況觀察

空白組實驗期間活動正常，精神正常，毛發有光澤，反應敏捷，大便成型，肛門無糞染。 造模成功后的大鼠（模型組、阿洛司瓊組、電針組)出現精神疲倦，活動減少，扎堆蜷縮于角落，易激惹，未見黏液血便，肛門可見不成形糞便黏附，糞染明顯，墊料污染嚴重。 電針治療期間及電針治療后，模型組一般情況無明顯改善；阿洛司瓊組精神一般，較造模后好動，大便成形，為糞粒狀；電針組精神良好，活動正常，毛色恢復光澤，大便干濕適中，為成形糞粒。

3.2 各組大鼠體質量增長率比較

與治療前比較，治療后空白組、模型組、阿洛司瓊組及電針組體質量增長率顯著降低（P<0.001）；與空白組比較，模型組與阿洛司瓊組體質量增長率降低（P<0.01，P<0.05）；與模型組、阿洛司瓊組大鼠比較，電針組大鼠的體質量增長率升高（P<0.05）。詳見表1。

表1 各組大鼠體質量增長率變化（±s，%）

表1 各組大鼠體質量增長率變化（±s，%）

注：與治療前比較，△△△P<0.001；與空白組比較，*P<0.05，**P<0.01；與模型組比較，#P<0.05；與阿洛司瓊組比較，&P<0.05。

組別空白組模型組阿洛司瓊組電針組n6666治療后0.090±0.004△△△-0.010±0.006△△△**0.010±0.014△△△*0.070±0.049△△△#&治療前0.450±0.050 0.310±0.060 0.320±0.030 0.320±0.020

3.3 各組大鼠糞便含水量比較

與治療前比較，電針組糞便含水量顯著降低（P<0.01）；與空白組比較，模型組及阿洛司瓊組糞便含水量高（P<0.001，P<0.05）；與模型組、阿洛司瓊組比較，電針組的糞便含水量降低（P<0.001，P<0.05）。 詳見表2。

表2 各組大鼠糞便含水量變化（±s，%）

表2 各組大鼠糞便含水量變化（±s，%）

注：與治療前比較，△△P<0.01；與空白組比較，*P<0.05，***P<0.001；與模型組比較，##P<0.01；與阿洛司瓊組比較，&P<0.05。

組別空白組模型組阿洛司瓊組電針組n6666治療前0.43±0.23 0.82±0.15 0.81±0.10 0.82±0.06治療后0.37±0.12 0.82±0.06***0.66±0.10*0.42±0.09△△##&

3.4 各組大鼠腸道敏感性比較

與治療前比較，治療后空白組、模型組、阿洛司瓊組及電針組大鼠腸道容量閾值差異無統計學意義（P＞0.05）；與空白組比較，模型組腸道容量閾值顯著降低（P<0.001）；與模型組比較，阿洛司瓊組與電針組腸道容量閾值升高（P<0.05）；與阿洛司瓊組比較，電針組大鼠腸道容量閾值差異無統計學意義（P＞0.05）。詳見表3。

表3 各組大鼠腸道容量閾值變化（±s，mL）

表3 各組大鼠腸道容量閾值變化（±s，mL）

注：與空白組比較，***P<0.001；與模型組比較，#P<0.05。

組別空白組模型組阿洛司瓊組電針組n6666治療前2.63±0.15 1.67±0.42 1.47±0.42 1.60±0.35治療后2.57±0.21 1.27±0.16***2.00±0.35#2.00±0.26#

3.5 各組大鼠結腸組織病理形態比較

空白組結腸黏膜上皮完整、吸收細胞呈柱狀，上皮內混有少量杯狀細胞，上皮下的隱窩排列規則、高度正常，隱窩內含大量杯狀細胞，細胞密度適中。 模型組可見黏膜局部糜爛壞死，壞死灶疏松、毛細血管擴張、少量炎細胞浸潤。阿洛司瓊組可見隱窩局部壞死、間質疏松、毛細血管擴張充血、少量炎細胞浸潤。電針組黏膜上皮完整，吸收細胞呈柱狀，黏膜皺壁中可見炎細胞浸潤，炎細胞主要是淋巴細胞和少量中性粒細胞。 與模型組比較，阿洛司瓊組黏膜上皮完整，壞死范圍明顯減小。 與模型組比較，電針組上皮尚且完好，且無壞死灶。 與阿洛司瓊組比較，電針組上皮完整，無壞死炎性損傷程度輕。 詳見圖1。

圖1 各組大鼠結腸組織病理形態相比（HE，×200，標尺=50 μm）

3.6 各組大鼠血清中5-HT 含量比較

與空白組比較，模型組血清中5-HT 的含量上升（P<0.05）；與模型組比較，電針組血清中5-HT 含量下降（P<0.05）；與阿洛司瓊組比較，電針組血清中5-HT 的含量差異無統計學意義（P＞0.05）。詳見表4。

表4 各組大鼠血清5-HT 含量（±s，ng/mL）

表4 各組大鼠血清5-HT 含量（±s，ng/mL）

注：與空白組比較，*P<0.05；與模型組比較，#P<0.05。

組別空白組模型組阿洛司瓊組電針組n6666 5-HT 256.60±92.12 1 656.00±1 109.00*307.80±134.70 467.80±149.20#

3.7 各組大鼠結腸5-HT3AR 蛋白表達比較

與空白組比較，模型組結腸的5-HT3AR 蛋白表達升高（P<0.05）；與模型組比較，阿洛司瓊組和電針組結腸的5-HT3AR 蛋白表達均顯著降低（P<0.001）；與阿洛司瓊組比較，電針組結腸5-HT3AR蛋白表達顯著降低（P<0.001）。 詳見圖2、表5。

圖2 各組大鼠結腸5-HT3AR 蛋白表達量結果

表5 各組大鼠結腸5-HT3AR 蛋白表達量（±s）

表5 各組大鼠結腸5-HT3AR 蛋白表達量（±s）

注：與空白組比較，*P<0.05；與模型組比較，###P<0.001；與阿洛司瓊組比較，&&&P<0.001。

組別空白組模型組阿洛司瓊組電針組n6666 5-HT3AR/GAPDH 2.04±0.16 2.32±0.11*1.76±0.07###1.29±0.04###&&&

4 討論

IBS-D 病機復雜，內臟敏感性增高是其主要病理生理機制之一[12]。 慢性束縛應激可以導致大鼠神經內分泌和免疫系統紊亂，出現焦慮、抑郁等情緒障礙，進而影響內臟感覺傳入神經的功能，導致內臟高敏感性[13]。結合課題組前期預實驗，使用長期單一的慢性應激并不能穩定制備大鼠內臟高敏感模型。 避水應激作為一種急性應激源，可加重大鼠的心理壓力，進一步加重內臟高敏感性[14]。以上兩種手段結合造模結束后，各組大鼠結腸容量閾值較空白組顯著降低，說明慢性束縛疊加避水應激成功誘導IBS-D大鼠的內臟高敏感性。番瀉葉是一種天然的瀉藥，其主要成分為番瀉苷，具有刺激腸道蠕動和分泌的作用。番瀉葉灌胃后，番瀉苷可以迅速吸收進入血液循環，作用于腸道平滑肌，增加腸道蠕動頻率和力度，引發腹瀉[15]。 用以上3 種方法相結合的造模方式造模結束后，與空白組大鼠相比各實驗組大鼠的糞便含水量顯著升高，說明本實驗成功建立IBS-D 大鼠模型。研究表明，針刺對IBS-D 患者具有顯著的治療效果，但其機制并不明確[16]。5-HT 是一種重要的神經遞質，與腸道運動和內臟感覺功能密切相關。在IBS-D患者中，5-HT 含量與受體5-HT3AR 蛋白表達異常升高，導致出現腸道動力學紊亂和腹瀉癥狀[17]。 本研究發現，電針可以顯著降低IBS-D模型大鼠血清中5-HT 含量，并下調IBS-D 模型大鼠結腸5-HT3AR蛋白表達。同時，提高IBS-D 模型大鼠的體質量，降低其糞便含水量及其內臟敏感性，改善IBS-D 模型大鼠的狀態，為電針治療IBS-D 提供實驗依據。 阿洛司瓊是一種選擇性5-HT3 受體拮抗劑，通過阻斷腸道神經元上的5-HT3 受體，減少5-HT 在腸道中的生物活性，從而達到緩解腹瀉的作用[18]。這與本研究中電針治療IBS-D 的機制相似，為電針治療IBSD 提供了有效的參照。電針作為一種非藥物療法，具有副作用小、安全性高的特點，在各方面相較于阿洛司瓊具有一定的優勢。

中醫學將IBS-D 歸屬于“腹痛”“腹脹”“泄瀉”等中焦失養范疇，病位以脾胃、大小腸為主，五臟六腑氣機失調是此病發病的關鍵[19]。 IBS-D 初期病機為肝失疏泄、氣機紊亂引發肝氣乘脾煩胃，繼則脾胃失職，清揚不升，濁陰不降，腸腑失司，泄瀉不止。 脾為氣血生化之源，后期病機為脾虛日久，脾陽虧虛，腎陽失于溫煦，疾病由虛轉實，綿延難愈。 中醫論治，先辨其臟腑，IBS-D 病在胃腸，胃腸屬六腑，六腑瀉而不藏，以通為用，其病多實。 所以，IBS-D 的中醫治療原則是通降腑氣以治療胃腸實證。 針灸在調虛實、通氣機等方面，有重要作用。 而腧穴的選擇是針灸處方的第一組成要素，與針灸的治療效果直接相關。 腧穴的選擇主要涵蓋選穴原則和配穴方法兩部分。 在選穴原則方面，可以從臨證選穴的原因入手。天樞屬足陽明胃經，為大腸的募穴。張景岳注釋《素問·六微旨大論篇》寫道“樞，樞機也。 居陰陽升降之中，是為天樞”，說明天樞有調節情志、和胃止痛、健脾止瀉的功效，可用于治療腹痛、便秘、腹瀉等胃腸病[20]。 足三里為下合穴，屬足陽明胃經，《素問·咳論篇》云：“治腑者，治其合。 ”說明下合穴是治療腑病的關鍵， 故足三里可以作為調理胃腸的腧穴。此外《靈樞·五亂》提及：“氣在于腸胃者……不下者，取之三里。”也解釋了此穴可引腑氣下行，調三焦腑氣，治肚腑疾病[21]。

本研究從配穴方法的角度出發，對“同經異腑合募配穴”法進行深入的剖析和探索。 《靈樞·本輸》記載“大腸小腸，皆屬于胃，是足陽明也”，提示IBS-D可以通過足陽明胃經治療[22]。古今多有醫家記載“合募配穴”的協同作用，但此次選用的“同經異腑合募配穴”法也能體現相互配合、疏通經脈、提高療效、易于操作等優勢。 下合穴其位居于下，縱向作用于內腑，偏于通降。 足三里為胃經的下合穴，有降胃氣之效。 《會元針灸學·足陽明胃經》曰：“天樞者………清氣達胃府，上通肺金，轉濁氣通腸部，故名‘天樞’。”說明天樞具有轉運胃氣入腸腑的功效。足三里與天樞相配，調暢胃經上胃腑與下腸腑氣機的通暢，一上一下，一遠一近，升降氣機，斡旋上下，氣機通暢，陰陽相合，可有效改善IBS-D 患者腹痛、腹瀉與情志不舒的癥狀，這與當代醫學所提倡的舒緩情志的方式相契合[23]。在此之前，“合募配穴”法是治療腸道疾病的常用方法之一。 合募配穴是指將本腑的下合穴與募穴相配。所以，單純的胃腑疾病一般取胃的合募兩穴：中脘和足三里。 但根據已有研究發現，此二穴在病理條件下，對胃的運動和內臟感覺基本是無異的[24]，二者配伍也并未達到“1+1＞1”的效果[25]。基于對IBS-D 的辨臟腑分析，該病并非是單純的胃腑疾病，故本實驗針對IBS-D 病位的不單一性提出一種新型的“合募配穴”，也就是用同經異腑的合募相配，比如用大腸經的募穴配伍胃經的下合穴或者用胃經的募穴和大腸經的下合穴相配。 此前也有大數據顯示，天樞、足三里是治療IBS 常用穴中的首要穴位[26]。 最終，本實驗在“合募配穴”的指導思想下，秉承著針灸“辨證與辨經相結合”的診治原則，提出了“同經異腑合募配穴”法，選擇用電針刺激足陽明胃經的天樞、足三里，以期為電針提高IBS-D 的臨床療效奠定良好的基礎與可供借鑒的思路。

本實驗提出“同經異腑合募配穴”法治療IBS-D，有效降低了IBS－D 模型大鼠的內臟高敏感，緩解其腹痛、腹瀉癥狀。 在前人的臨床研究中發現，針灸可以降低IBS-D 患者的血清5-HT 水平[27]，與本實驗結果相一致，證明針灸在調節5-HT 水平方面具有普遍性。通過研究發現，對于5-HT 這一通路的深入研究，大多數是探究針灸對于5-HT 上游合成通路的影響[28]，而本研究則是首次探究電針對于IBS-D模型大鼠5-HT3AR 這一5-HT 受體的調控作用，這為今后進一步探討針灸調節IBS-D 的機制提供了方向。隨著人們對健康認識的深化，針灸的補瀉手法走進大眾的視野中， 目前通過補瀉手法提高IBS-D的療效的機制尚不明確，未來可以結合“同經異腑合募配穴”法進一步展開研究，希望本實驗能為往后的學者提供相關領域的研究方向

綜上，本實驗結果顯示，經過“同經異腑合募配穴”法進行電針干預治療后，IBS-D 模型大鼠血清中5-HT 含量及結腸5-HT3AR 蛋白表達均顯著降低，提示“同經異腑合募配穴”電針法對IBS-D 患者可能表現出更好的臨床療效，這為日后電針治療IBS-D提供新的實驗依據和實驗思路。