基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對(duì)接探究健脾益腎方治療糖尿病腎病的作用機(jī)制

劉哲延，祁愛蓉

1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)第四臨床醫(yī)學(xué)院，廣東 深圳 518000；2.深圳市中醫(yī)院，廣東 深圳 518033

糖尿病腎病（diabetic nephropathy，DN）是臨床常見的糖尿病并發(fā)癥，主要表現(xiàn)為白蛋白尿排泄率持續(xù)增加和/或腎小球?yàn)V過率進(jìn)行性下降，是引起終末期腎病的主要原因。目前臨床治療主要以腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)抑制劑、利尿劑、控制血壓、控制血糖及生活方式干預(yù)等為主，若進(jìn)展至終末期腎病，則需通過血液透析，甚至腎移植來維持生命[1]。

研究表明，中醫(yī)藥治療DN可有效降低患者尿蛋白水平，改善腎功能，延緩病情進(jìn)展，提高患者的生活質(zhì)量[2]。健脾益腎方是廣東省名中醫(yī)李順民教授根據(jù)五臟相關(guān)理論歸納演繹出“脾腎相關(guān)理論”而創(chuàng)建的經(jīng)驗(yàn)方，由白術(shù)15 g、大黃15 g、丹參30 g、豆蔻10 g、甘草10 g、黃芪30 g、肉蓯蓉10 g、山藥15 g組成，臨床用于治療DN療效顯著，可改善DN患者水腫、降低水鈉潴留[3-5]。但其作用靶點(diǎn)及機(jī)制還有待進(jìn)一步挖掘。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)綜合醫(yī)學(xué)、計(jì)算機(jī)學(xué)、生物信息學(xué)等多學(xué)科，是一種基于疾病、藥物、化合物、基因靶點(diǎn)、蛋白相互作用的系統(tǒng)分析方法，可對(duì)中藥治療疾病的多成分、多靶點(diǎn)、多通路作用機(jī)制進(jìn)行系統(tǒng)、深入、整體分析[6]。本研究采用中藥復(fù)方網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法挖掘健脾益腎方活性成分、作用靶點(diǎn)及信號(hào)通路，探究其治療DN的作用機(jī)制，為健脾益腎方的臨床運(yùn)用及進(jìn)一步研究提供思路。

1 資料與方法

1.1 健脾益腎方活性成分篩選及相關(guān)靶點(diǎn)預(yù)測

檢索TCMSP（https://old.tcmsp-e.com/tcmsp.php）[7]中健脾益腎方組方藥物白術(shù)、大黃、丹參、豆蔻、甘草、黃芪、肉蓯蓉、山藥的化學(xué)成分，以口服生物利用度（OB）≥30%、類藥性（DL）≥0.18為條件[8]，篩選健脾益腎方組方藥物活性成分。運(yùn)用TCMSP預(yù)測活性成分的對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)，并以現(xiàn)有文獻(xiàn)對(duì)未預(yù)測的藥物活性成分和已驗(yàn)證的靶點(diǎn)進(jìn)行補(bǔ)充。使用UniProt數(shù)據(jù)庫（https://www.uniprot.org/）將所得靶點(diǎn)轉(zhuǎn)換為相應(yīng)的基因名稱。

1.2 糖尿病腎病相關(guān)靶點(diǎn)篩選與收集

以“diabetic nephropathy”為檢索詞，檢索GeneCards數(shù)據(jù)庫（https://www.genecards.org）、OMIM數(shù)據(jù)庫（http://omim.org）、DrugBank數(shù)據(jù)庫（https://go.drugbank.com/）、TTD數(shù)據(jù)庫（http://db.idrblab.net/ttd/）及DisGeNET數(shù)據(jù)庫（https://www.disgenet.org），獲得DN相關(guān)靶點(diǎn)。其中GeneCards數(shù)據(jù)庫設(shè)定Score大于中位數(shù)的靶點(diǎn)為DN潛在靶點(diǎn)[9]。合并目標(biāo)靶點(diǎn)并刪除重復(fù)值，得到DN相關(guān)靶點(diǎn)，并利用UniProt數(shù)據(jù)庫將所得靶點(diǎn)進(jìn)行規(guī)范化處理。

1.3 藥物-疾病交集靶點(diǎn)獲取

利用Venny2.1.0在線工具（https://bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/index.html），將活性成分靶點(diǎn)與疾病靶點(diǎn)取交集，即為健脾益腎方治療DN的潛在靶點(diǎn)。

1.4 蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

將藥物活性成分靶點(diǎn)與疾病靶點(diǎn)導(dǎo)入Cytoscape3.9.1軟件，采用Bisogenet插件構(gòu)建蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)，分別生成健脾益腎方活性成分靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)與DN靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)，并通過Merge功能提取2個(gè)PPI網(wǎng)絡(luò)的交集網(wǎng)絡(luò)，利用Network Analyzer[10]及CytoNCA[11]插件計(jì)算交集PPI網(wǎng)絡(luò)的連接度（D）、介度（B）、緊密度（C）、網(wǎng)絡(luò)中心性（NC）、局部邊連通性（LAC）等網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)特征屬性值。以度值＞2倍中位數(shù)，D、B、C、NC、LAC＞中位數(shù)的節(jié)點(diǎn)為核心靶點(diǎn)。

1.5 交集靶點(diǎn)GO功能和KEGG通路富集分析

將交集靶點(diǎn)數(shù)據(jù)導(dǎo)入Metascape數(shù)據(jù)庫（http://metascape.org/gp/index.html），以P＜0.05且-log10Pvalue＞0.2為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行GO功能和KEGG通路富集分析，其中，GO功能富集分析包括生物過程（BP）、細(xì)胞組分（CC）、分子功能（MF）。采用微生信平臺(tái)（http://www.bioinformatics.com.cn/），對(duì)BP、CC、MF富集基因數(shù)排名前10位的條目和富集基因數(shù)前20位的KEGG通路進(jìn)行可視化展示。

1.6 “活性成分-靶點(diǎn)-信號(hào)通路”網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

運(yùn)用Cytoscape3.9.1構(gòu)建健脾益腎方治療DN“活性成分-靶點(diǎn)-信號(hào)通路”網(wǎng)絡(luò)，并運(yùn)用Network Analyzer及CytoNCA插件計(jì)算網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)特征屬性值，篩選核心靶點(diǎn)和主要活性成分。

1.7 分子對(duì)接

分別取“1.4”網(wǎng)絡(luò)及“1.6”網(wǎng)絡(luò)中度值排名前5位的靶點(diǎn)作為受體蛋白（共10個(gè)），以及“1.6”網(wǎng)絡(luò)中度值排名前5位的活性成分作為配體分子。從PubChem數(shù)據(jù)庫（http://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）下載配體分子2D結(jié)構(gòu)信息，再利用Chem3D軟件將2D結(jié)構(gòu)保存為“pdb”格式，并進(jìn)行MM2能量最小化修飾。利用PDB數(shù)據(jù)庫（http://www.rcsb.org/pdb）下載受體蛋白的3D晶體結(jié)構(gòu)，并以PDB格式進(jìn)行保存。利用PyMOL4.6.0軟件對(duì)活性成分進(jìn)行加氫（加電荷）、定義原子類型等處理后，保存為“pdbqt”格式；對(duì)核心靶點(diǎn)進(jìn)行去水、加氫、定義原子類型，存為“pdbqt”格式。利用AutoDock Vina[12]進(jìn)行分子對(duì)接。預(yù)測配體小分子與蛋白結(jié)合能，選擇最低結(jié)合能為最優(yōu)構(gòu)象，利用PyMOL4.6.0軟件將對(duì)接結(jié)果進(jìn)行可視化展示。

2 結(jié)果

2.1 健脾益腎方活性成分及靶點(diǎn)獲取

檢索TCMSP，獲得健脾益腎方組方藥物活性成分188個(gè)，其中白術(shù)4個(gè)、大黃7個(gè)、丹參59個(gè)、豆蔻12個(gè)、甘草88個(gè)、黃芪16個(gè)、肉蓯蓉3個(gè)、山藥11個(gè)。同時(shí)查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ為白術(shù)主要活性成分，具有抗炎性反應(yīng)、抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)、降血糖、調(diào)節(jié)免疫代謝等作用[13]；黃芪中甜菜堿、黃芪多糖、黃芪甲苷具有抗炎、抗氧化、改善胰島素抵抗、抗應(yīng)激等多種活性作用[14-15]，對(duì)DN的治療也起一定作用，故將以上成分補(bǔ)充納入。匯總后共獲得197個(gè)活性成分，其中10個(gè)成分為共有成分，見表1。獲得健脾益腎方活性成分作用靶點(diǎn)分別為：白術(shù)64個(gè)、大黃64個(gè)、丹參134個(gè)、豆蔻185個(gè)、甘草226個(gè)、黃芪276個(gè)、肉蓯蓉37個(gè)、山藥68個(gè)，將靶點(diǎn)合并去重后，共獲得363個(gè)靶點(diǎn)。

表1 健脾益腎方組方藥物共有活性成分

2.2 糖尿病腎病相關(guān)靶點(diǎn)獲取結(jié)果

檢索GeneCards數(shù)據(jù)庫、OMIM數(shù)據(jù)庫、DrugBank數(shù)據(jù)庫、TTD數(shù)據(jù)庫、DisGeNET數(shù)據(jù)庫分別獲得DN相關(guān)靶點(diǎn)3 397、256、42、22、567個(gè)。其中GeneCards數(shù)據(jù)庫將靶點(diǎn)Score值以中位數(shù)進(jìn)行2次篩選，得到靶點(diǎn)828個(gè)。經(jīng)合并去重后獲得DN靶點(diǎn)1 347個(gè)。

2.3 獲取成分-疾病共同靶點(diǎn)

利用Venny2.1在線工具將健脾益腎方藥物活性成分靶點(diǎn)與DN相關(guān)靶點(diǎn)取交集，獲得157個(gè)交集靶點(diǎn)。

2.4 蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)分析

利用Cytoscape3.9.1的BisoGenet插件分別構(gòu)建健脾益腎方與DN的PPI網(wǎng)絡(luò)，利用Merge功能提取兩者交集網(wǎng)絡(luò)，得到交集靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)，共7 754個(gè)節(jié)點(diǎn)、186 599條邊。計(jì)算交集靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)特征屬性值，通過3次篩選，獲得核心靶點(diǎn)53個(gè)，其中度值排名前5位的靶點(diǎn)分別為：TUBB、HNRNPK、NCL、PABPC1、DHX9，即為健脾益腎方治療DN的核心靶點(diǎn)。篩選策略見圖1，核心靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)見圖2。

圖1 健脾益腎方治療DN核心靶點(diǎn)篩選策略

圖2 健脾益腎方治療DN核心靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)

2.5 生物信息學(xué)分析

利用Metascape數(shù)據(jù)庫對(duì)157個(gè)交集靶點(diǎn)進(jìn)行GO功能富集分析，得到BP條目2 094個(gè)、CC條目94個(gè)、MF條目167個(gè)。BP主要涉及對(duì)激素的反應(yīng)、細(xì)胞遷移的正調(diào)控、對(duì)無機(jī)物的反應(yīng)、對(duì)脂多糖的反應(yīng)、對(duì)細(xì)胞外刺激的反應(yīng)等；CC主要影響膜筏、囊泡腔、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔、細(xì)胞外基質(zhì)、質(zhì)膜外側(cè)面；MF包括蛋白激酶結(jié)合、RNA聚合酶Ⅱ特異性DNA結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合、信號(hào)受體激活劑活性、heme血紅素結(jié)合、脂質(zhì)結(jié)合等多種蛋白、酶、脂結(jié)合。根據(jù)富集基因數(shù)篩選BP、CC和MF排名前10位的條目繪制條形圖，見圖3。

圖3 健脾益腎方治療DN靶點(diǎn)GO富集分析條形圖

KEGG通路富集分析獲得211條通路，主要涉及癌癥通路、糖尿病并發(fā)癥中的AGE-RAGE信號(hào)通路、癌癥中的蛋白聚糖、活性氧化物通路和HIF-1信號(hào)通路等。篩選富集基因數(shù)前20位通路繪制氣泡圖，見圖4。

圖4 健脾益腎方治療DN靶點(diǎn)KEGG通路富集分析氣泡圖

2.6 “活性成分-靶點(diǎn)-信號(hào)通路”網(wǎng)絡(luò)分析

運(yùn)用Cytoscape3.9.1構(gòu)建健脾益腎方治療DN“活性成分-靶點(diǎn)-信號(hào)通路”網(wǎng)絡(luò)，見圖5。計(jì)算相關(guān)網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)特征屬性值。結(jié)果顯示，槲皮素、木犀草素、山柰酚、柚皮素、刺芒柄花素為健脾益腎方治療DN的主要活性成分，見表2。預(yù)測AR、PTGS2、ESR1、PTGS1、PPARG是健脾益腎方治療DN的核心靶點(diǎn)。

圖5 健脾益腎方治療DN“活性成分-靶點(diǎn)-信號(hào)通路”網(wǎng)絡(luò)

表2 健脾益腎方主要活性成分

2.7 分子對(duì)接結(jié)果

將主要活性成分槲皮素、木犀草素、山柰酚、柚皮素、刺芒柄花素與核心靶點(diǎn)[TUBB（PDB ID：3S84）、HNRNPK（PDB ID：1J5K）、NCL（PDB ID：2FC8）、PABPC1（PDB ID：3KUJ）、DHX9（PDB ID：1UIL）、AR（PDB ID：1B0S）、PTGS2（PDB ID：1PXX）、ESR1（PDB ID：1A52）、PTGS1（PDB ID：1CQE）、PPARG（PDB ID：6FZY）]進(jìn)行分子對(duì)接，對(duì)接結(jié)果見圖6。

圖6 健脾益腎方治療DN主要活性成分與核心靶點(diǎn)分子對(duì)接熱圖

一般而言，配體與受體結(jié)合能與結(jié)合親和力成反比。在AutoDock環(huán)境下，結(jié)合能＜-5 kcal/mol表明配體與受體結(jié)合活性較佳[16]。結(jié)果顯示，在50組對(duì)接中，最低結(jié)合能＜-5 kcal/mol的有48組，提示靶點(diǎn)與活性成分間有較好的結(jié)合活性。分子對(duì)接構(gòu)象圖見圖7。

圖7 健脾益腎方治療DN主要活性成分與核心靶點(diǎn)分子對(duì)接構(gòu)象圖

3 討論

DN屬中醫(yī)學(xué)“下消”“腎消”等范疇，由于長期消渴，致使臟腑功能紊亂，陰陽氣血虛衰所致。病變部位以肝、脾、腎三臟為主，痰、瘀、濕為病理因素。健脾益腎方由白術(shù)、黃芪、大黃、丹參、甘草、豆蔻、肉蓯蓉、山藥組成，有補(bǔ)脾益腎、化瘀祛濁之功。黃芪有補(bǔ)氣升陽、利水消腫作用，可有效改善DN患者腎功能，減少尿液微量白蛋白水平[17]。大黃有瀉下積食、逐瘀痛經(jīng)、利濕退黃之功，其活性成分大黃素可降糖、改善微循環(huán)、抗炎、調(diào)節(jié)免疫及降低尿蛋白水平[18]。山藥平補(bǔ)脾、肺、腎三臟，具有增加胰島素分泌、提高胰島β細(xì)胞機(jī)能、降低腎臟纖維化的作用[19]。丹參可活血調(diào)經(jīng)、涼血消癰、清心除煩，其有效成分丹參素可降低DN大鼠血糖，改善腎臟纖維化，保護(hù)腎臟[20]。白術(shù)健脾益氣、利水燥濕，可改善胰島素抵抗，提高胰島素敏感性，改善糖脂代謝[21]。豆蔻溫中行氣、化濕，可抑制腎組織細(xì)胞凋亡、氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)[22]。

3.1 藥物活性成分分析

本研究得到健脾益腎方治療DN的主要活性成分為槲皮素、木犀草素、山柰酚、柚皮素、刺芒柄花素，均為黃酮類化合物，具有抗炎、抗氧化等功能。槲皮素可降低糖尿病模型大鼠血糖濃度[23]，改善胰島素抵抗[24]。一項(xiàng)橫斷面研究發(fā)現(xiàn)，中國人群中膳食槲皮素?cái)z入量與2型糖尿病患病率呈顯著負(fù)相關(guān)[25]，其可通過調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞極化改善腎損傷，緩解腎纖維化，保護(hù)腎功能[23]。木犀草素可激活A(yù)MPK/SIRT-1/PGC1-α蛋白表達(dá)，抑制高糖誘導(dǎo)的腎小球系膜細(xì)胞過度增生，促進(jìn)其凋亡，對(duì)DN腎損傷具有保護(hù)作用[26-28]。山柰酚可激活A(yù)MPK通路，減輕高糖條件下腎小球內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激及凋亡，對(duì)腎功能有保護(hù)作用[29]。柚皮素可通過改善氧化應(yīng)激、抑制細(xì)胞凋亡、減輕炎癥反應(yīng)等途徑，保護(hù)腎功能，減緩DN進(jìn)展[30]。芒柄花素可有效降低DN大鼠血糖和血脂，提高腎組織抗氧化能力，減輕DN氧化應(yīng)激引起的腎損傷[31]。

3.2 關(guān)鍵靶點(diǎn)及信號(hào)通路分析

目前DN發(fā)病機(jī)制尚不明確，研究普遍認(rèn)為與分子遺傳學(xué)、代謝紊亂、血流動(dòng)力學(xué)異常、炎癥反應(yīng)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、氧化應(yīng)激、自噬、外泌體等相關(guān)。根據(jù)靶點(diǎn)及通路特點(diǎn)，本研究發(fā)現(xiàn)，上述10個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)及關(guān)鍵通路的作用機(jī)制包括抑制炎癥、氧化應(yīng)激，調(diào)節(jié)代謝紊亂，調(diào)控細(xì)胞凋亡及自噬，推測健脾益腎方通過上述3條途徑發(fā)揮抗DN作用。

3.2.1 抑制炎癥、氧化應(yīng)激反應(yīng)

PTGS1、PTGS2是編碼相似酶的2個(gè)基因，可催化花生四烯酸轉(zhuǎn)化為前列腺素，是前列腺素生物合成中的關(guān)鍵酶，與炎癥反應(yīng)相關(guān)。ESR1是雌激素受體的主要類型，可上調(diào)內(nèi)皮型一氧化氮合酶mRNA水平，抑制炎癥、氧化應(yīng)激反應(yīng)，從而改善腎臟損傷[32-33]。

HIF-1在機(jī)體抗缺氧防御系統(tǒng)中占據(jù)核心地位[34]，在DN的過程中起重要作用。同時(shí)DN狀態(tài)下腎局部組織微循環(huán)障礙，導(dǎo)致體內(nèi)活性氧（ROS）產(chǎn)生過多，生成大量氧化的中間產(chǎn)物，通過ROS一系列的信號(hào)傳導(dǎo)途徑，導(dǎo)致腎足細(xì)胞損傷。

3.2.2 調(diào)節(jié)代謝紊亂

晚期糖基化終產(chǎn)物（AGEs）是高糖狀態(tài)下，蛋白質(zhì)與葡萄糖等小分子發(fā)生非酶催化的糖基化反應(yīng)形成的產(chǎn)物，糖基化終產(chǎn)物受體（RAGE）是一種跨膜受體，能與AGEs特異性結(jié)合。AGEs可直接作用于腎臟，其在腎臟的積累是進(jìn)行性腎損害的主要原因[35]，也能通過AGEs-RAGEs信號(hào)通路及下游信號(hào)通路，如p38、NF-κB、TGF-β1、VEGF等表達(dá)，介導(dǎo)DN的發(fā)生[36-38]。

醛糖還原酶（AR）作為多元醇通路的限速酶，對(duì)通路的激活和DN的發(fā)展起重要作用。高糖狀態(tài)下AR活性增加，使多元醇代謝通路產(chǎn)生的山梨醇增加，并大量蓄積，造成細(xì)胞內(nèi)滲透壓增高、細(xì)胞破裂，從而誘發(fā)細(xì)胞凋亡的發(fā)生，激活炎癥反應(yīng)，損傷腎小球細(xì)胞[39]。

3.2.3 調(diào)控細(xì)胞凋亡及自噬

近年研究發(fā)現(xiàn)，足細(xì)胞損傷是DN發(fā)生發(fā)展與轉(zhuǎn)歸的重要環(huán)節(jié)，其中足細(xì)胞的自噬缺陷起關(guān)鍵作用[40]。在腎小球過濾的最后一道屏障中，足細(xì)胞與足突之間的裂孔隔膜是主要組成部分，足細(xì)胞增殖和凋亡對(duì)維持腎小球?yàn)V過屏障的完整性至關(guān)重要[41]。糖尿病患者體內(nèi)營養(yǎng)和能量過量會(huì)抑制自噬，并使足細(xì)胞出現(xiàn)功能障礙和細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致大量蛋白尿的發(fā)生和腎小球纖維化[42]。

TUBB是人類基因組中存在的β-微管蛋白編碼基因之一，參與細(xì)胞形態(tài)的維持及細(xì)胞有絲分裂等過程，與糖尿病發(fā)生發(fā)展相關(guān)[43]。TUBB還與脂代謝相關(guān)[44]，DN患者長期血糖偏高，代謝障礙，血流動(dòng)力學(xué)改變，往往伴隨高脂血癥，加重腎損傷。NCL在纖維化、自噬、細(xì)胞凋亡等方面發(fā)揮作用，并且NCL參與肝臟糖代謝穩(wěn)態(tài)調(diào)控，改善胰島素抵抗、促進(jìn)肝臟糖原合成，改善高脂飲食誘導(dǎo)的糖代謝紊亂[45]。PABPC1是RNA結(jié)合蛋白，調(diào)控RNA與mRNA代謝，與細(xì)胞生長發(fā)育相關(guān)，通過mTOR和AKT/MAPK信號(hào)通路調(diào)控細(xì)胞凋亡與自噬[46]。DHX9能通過多種癌癥途徑，如mTOR信號(hào)通路、p53通路等，參與調(diào)控細(xì)胞生命活動(dòng)。同時(shí)KEGG富集分析顯示，癌癥途徑是健脾益腎方治療DN的關(guān)鍵通路之一。此外，癌癥中蛋白聚糖通路也是重要通路。多項(xiàng)研究結(jié)果提示，糖尿病與多種腫瘤存在相關(guān)性，與本研究預(yù)測結(jié)果相符。高血糖環(huán)境下代謝障礙、ROS及AGEs產(chǎn)生增加，可能是導(dǎo)致糖尿病并發(fā)癥和腫瘤的相關(guān)機(jī)制[47-48]。

此外，本研究對(duì)關(guān)鍵活性成分與靶點(diǎn)進(jìn)行分子對(duì)接，結(jié)果顯示，TUBB、HNRNPK、NCL、PABPC1、DHX9、AR、PTGS2、ESR1、PTGS1、PPARG關(guān)鍵靶點(diǎn)與槲皮素、木犀草素、山柰酚、柚皮素、刺芒柄花素分子對(duì)接較好。分子對(duì)接結(jié)果進(jìn)一步表明，健脾益腎方可通過多成分、多靶點(diǎn)對(duì)DN起到治療效果，并且通過分子對(duì)接驗(yàn)證了網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測結(jié)果的可靠性。

綜上所述，健脾益腎方通過多成分、多靶點(diǎn)、多途徑發(fā)揮治療DN作用。本研究探究了健脾益腎方治療DN的作用機(jī)制，為臨床應(yīng)用及進(jìn)一步研究提供了思路。但本研究也存在一定局限性：①未考慮藥物在體內(nèi)代謝情況、藥物煎煮后發(fā)生的化學(xué)反應(yīng)及藥物間的相互作用，因此無法全面獲得復(fù)方實(shí)際的有效成分。②受限于現(xiàn)有網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)相關(guān)數(shù)據(jù)庫，后續(xù)還需進(jìn)一步更新及研究驗(yàn)證。