EB 病毒感染兒童外周血Th1/Th2 型細胞標志物表達水平及臨床意義

張莎莎，馮翔，高健

河南省兒童醫院（鄭州兒童醫院）檢驗科，河南鄭州 450000

愛普斯坦-巴爾病毒（epstein-barr virus, EBV）感染是一種常見的病毒感染，特別是在兒童和青少年中[1]。雖然大多數感染者無明顯癥狀且通常在數周或數月內自行康復，但少數患兒會出現嚴重的干擾素綜合癥、傳染性單核細胞增多癥和淋巴增殖性疾病等。這些嚴重的并發癥會對患兒造成嚴重負面影響，可能會導致機體免疫系統的失控和免疫反應異常，例如淋巴增殖性疾病與傳染性單核細胞增多癥導致的肝脾腫大[2-3]。輔助性T 細胞（helper T cell, Th）1 與Th2 型細胞是機體免疫系統中至關重要的兩個亞群，分別以產生干擾素-γ（interferon-γ,IFN-γ）和白細胞介素-4（interleukin-4, IL-4）為代表。在EB 病毒感染過程中，機體內Th1/Th2 型細胞的平衡可能發生改變，從而導致免疫反應的不同類型和強度[4]。基于此，本研究選取2022 年1 月—2023 年1 月河南省兒童醫院（鄭州兒童醫院）收治的EBV 感染患兒64 例作為研究對象，通過檢測不同病毒載量的EBV 感染患兒的Th1/Th2 型細胞標志物表達水平變化，分析EBV 感染與Th1/Th2 平衡的關系，為深入探究EBV 感染的免疫學機制、評估感染嚴重程度提供參考依據。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院收治的EBV 感染患兒64 例，并納入EBV 組，另外納入64 例健康兒童作為健康組。EBV組年齡1～7 歲，平均（4.63±1.30）歲；男38 例，女26例。健康組年齡1～6 歲，平均（4.58±1.07）歲；男36例，女28 例。統計EBV 組患兒EBV-DNA 載量，根據中位水平（8.23×103拷貝）將EBV 組分為高EBV組（n=31）和低EBV 組（n=33），其中高EBV 組年齡（4.45±1.50）歲；男18 例，女13 例。低EBV 組年齡（4.77±1.05）歲；男20 例，女13 例。EBV 組與健康組、高EBV 組與低EBV 組間的一般資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。本研究已通過本院醫學倫理委員會批準（20210123 號）。

1.2 納入與排除標準

納入標準：①符合臨床中對于EBV 感染的診斷標準[5]患兒；②入組前未接受相關免疫調節治療患兒；③患兒家屬均簽署知情同意書。排除標準：①合并惡性腫瘤者；②EBV-DNA＜1×103拷貝/mL 者；③合并心臟、肝臟、腎臟等器官嚴重功能不全者。

1.3 方法

①EBV-DNA 定量檢測：患兒入院時，采集靜脈血3 mL，3 000 r/min 離心10 min，取50 μL 血漿，加入50 μL 核酸提取液，振蕩混勻15 s，干浴10 min后，以12.5 cm 的離心半徑1 500 r/min 離心10 min，取上清液，并置于枸櫞酸鈉抗凝管中，采用熒光實時定量聚合酶鏈式反應技術檢測EBV-DNA 載量；BamH1-W 正向引物：5-GCCAGAGGTAAGTGGACTTT-3，反向引物：5-TACCACCTCCTCTTCTTGCT-3，長度389 bp；熒光探針序列：5-CACACCCAGGCACACACTACACAT-3，嚴格根據試劑盒說明書進行操作，以≥1×103拷貝為陽性。②Th1 與Th2 型細胞檢測：采用酶聯免疫吸附法對上清液中的IFN-γ、白細胞介素-2（interleukin-2, IL-2）、IL-4、白細胞介素-6（interleukin-6, IL-6）進行檢測，嚴格根據試劑盒說明書進行操作。③Th1/Th2：通過流式細胞術測量Th1 細胞和Th2 細胞的數量，并計算Th1/Th2比值。

1.4 觀察指標

比較兩組的Th1/Th2 型細胞標志物（IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6）表達水平和Th1/Th2 比值差異；分析EBV-DNA 病毒載量與Th1/Th2 型細胞標志物水平的相關性。

1.5 統計方法

應用SPSS 23.0 統計學軟件分析數據，計量資料進行正態性檢驗，確認服從正態分布，表示為（±s），根據方差齊性檢驗的結果，應用t檢驗或Welcht檢驗；采用Spearson 相關性分析法分析EBV-DNA 病毒載量與Th1/Th2 型細胞標志物水平的相關性。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 EBV 組和健康組Th1/Th2 型細胞標志物、Th1/Th2 比值比較

EBV 組的IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6、Th1/Th2 均高于健康組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 EBV 組和健康組Th1/Th2 型細胞標志物、Th1/Th2 比值比較(±s)

表1 EBV 組和健康組Th1/Th2 型細胞標志物、Th1/Th2 比值比較(±s)

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2.2 高EBV 組和低EBV 組Th1/Th2 型細胞標志物、Th1/Th2 比值比較

高EBV 組的IFN-γ、IL-2、Th1/Th2 均低于低EBV 組，IL-4、IL-6 水平均高于低EBV 組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 高EBV 組和低EBV 組Th1/Th2 型細胞標志物、Th1/Th2 比值比較(±s)

表2 高EBV 組和低EBV 組Th1/Th2 型細胞標志物、Th1/Th2 比值比較(±s)

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2.3 EBV-DNA 病毒載量與Th1/Th2 型細胞標志物的相關性分析

Spearson 分析結果顯示，EBV-DNA 病毒載量與IFN-γ、IL-2、Th1/Th2 呈負相關性（P＜0.05），與IL-4、IL-6 呈正相關性（P＜0.05）。見表3。

表3 EBV-DNA 病毒載量與Th1/Th2 型細胞標志物的相關性分析

3 討論

EBV 感染可引發多種疾病，累及全身多個器官，是一種常見的人類皰疹病毒，并與免疫系統相關性疾病密切相關。大部分兒童在早期生命階段感染EBV，在1～2 歲時出現EBV 抗體血清轉換，此時大部分感染案例并不復雜，甚至容易被忽視。對于絕大多數感染者而言，潛伏感染似乎不會影響總體健康；然而，潛伏期的失調或無法控制的裂解性感染可能導致淋巴組織增殖性疾病和免疫系統相關性疾病的進展[6]。

本研究結果顯示，EBV 組的IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6、Th1/Th2 均高于健康組（P＜0.05）。這表示EBV感染患兒的Th1/Th2 型細胞標志物水平顯著升高。既往Yang D 等[7]的研究中，其傳染性單核細胞增多癥患兒的IFN-γ、IL-6 等水平均高于對照組（P＜0.05），本研究與既往研究結果一致。這可能是因為EBV 進入B 淋巴細胞后不斷復制，激活T 淋巴細胞，導致T 淋巴細胞大量活化擴增。有研究顯示，EB 病毒感染的主要細胞類型是上皮細胞和B 細胞[8]。這可能是因為在EBV 病毒的結構中，除宿主細胞衍生的膜蛋白外，還包埋若干病毒蛋白，病毒包膜蛋白是糖蛋白（glycoprotein, GP），EBV 病毒的趨向性由包膜GP 決定，而GP 又因宿主細胞的不同而存在差異[9]。EBV 感染的主要細胞類型是上皮細胞和B 細胞。因為EBV 的傳播方式是通過唾液傳播給受體，上皮細胞是第一個被感染的細胞類型。當EBV 從口咽上皮釋放后進入下層組織時，B 細胞被感染[10]。由于包膜GP 的組成，上皮細胞釋放的EBV 病毒粒子優先于B 細胞，而B 細胞釋放的EBV病毒粒子優先于上皮細胞[11]。

本研究結果顯示，高EBV 組的IFN-γ、IL-2、Th1/Th2 均低于低EBV 組，IL-4、IL-6 水平均高于低EBV 組（P＜0.05）；Spearson 分析結果顯示，EBVDNA 病毒載量與IFN-γ、IL-2、Th1/Th2 呈負相關性，與IL-4、IL-6 呈正相關性（P＜0.05）。這提示伴隨EBV 病毒載量的升高，Th1/Th2 失衡加重。沈燕等[12]研究中顯示，EBV-DNA 病毒載量與IFN-γ 呈負相關性（r=-0.519，P＜0.001），與IL-4 呈正相關性（r=0.607，P＜0.001），本研究與既往研究結果相似。EB 病毒感染后，機體免疫系統會被激活以應對病毒。這涉及T 細胞的免疫應答，其中包括Th1 和Th2 細胞的調節。Th1 細胞主要產生IFN-γ、IL-2 等細胞因子對抗病毒感染。Th1細胞的免疫應答有助于清除被EB 病毒感染的細胞，并抑制病毒的復制[13]。Th2 細胞主要產生IL-4、IL-6 和IL-13 等細胞因子，參與調節體液免疫應答。在EB 病毒感染中，Th2 細胞可能對炎癥反應起到一定的調節作用[14]。而根據研究顯示，EBV病毒載量的高低與Th1 和Th2 細胞的調節密切相關[15]。高EBV-DNA 病毒載量的患兒往往伴隨著免疫系統的強烈反應。在高EBV-DNA 病毒載量情況下，機體的免疫系統往往會出現Th1/Th2 失衡，即Th2 細胞活化和分泌增加，而Th1 細胞活化和分泌減少。這可能是由于EBV 感染抑制了Th1細胞的功能，同時促進了Th2 細胞的發育和功能[16]。而不平衡的Th1/Th2 比例可能會影響EBV感染結果[17]。例如，如果Th1 免疫應答過弱而相對Th2 免疫應答過強，則可能導致病毒的持續感染和病情的惡化。同時，低EBV-DNA 病毒載量的患兒則表現出較低程度的病毒復制活動和免疫系統反應。

綜上所述，EBV 感染患兒Th1/Th2 型細胞標志物水平呈現出明顯變化，并且隨著EBV 病毒載量的升高，IFN-γ、IL-2 水平升高，而IL-4、IL-6 水平降低，Th1/Th2 失衡加重。這能夠為深入探究EBV 感染的免疫學機制、評估感染嚴重程度從而制定適宜的臨床策略提供參考。