長白山區(qū)發(fā)酵醬菜中高產(chǎn)胞外多糖乳酸菌的篩選及多糖抗氧化性分析

尉 潔，張玲芳，胡順安，秦孟春，馬 琳，李 丹，段翠翠

（長春大學(xué)農(nóng)產(chǎn)品加工吉林省普通高等學(xué)校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，吉林長春 130022）

乳酸菌（lactic acid bacteria，LAB）是指能利用可發(fā)酵碳水化合物產(chǎn)生大量乳酸的一類革蘭氏陽性菌[1]，是公認(rèn)的食品級(jí)安全微生物，具有維持腸道菌群平衡[2-3]、調(diào)節(jié)免疫力[4-5]、降低膽固醇[6]和抗氧化[7]等多種益生功能。乳酸菌的益生作用與其所產(chǎn)生的胞外多糖關(guān)系密切，乳酸菌胞外多糖（lactic acid bacteria exopolysaccharides，LAB EPS）是乳酸菌生長代謝過程中分泌到菌體細(xì)胞外或基質(zhì)中的多糖類物質(zhì)，包括黏附在細(xì)胞表面的莢膜多糖和分泌到外部環(huán)境中的粘液多糖[8]。

研究表明乳酸菌胞外多糖具有抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗菌等功能[9-10]，其中抗氧化功能是其它功能的基礎(chǔ)，是最重要也是最需要深入研究的一種功能。當(dāng)機(jī)體受到不良刺激時(shí)，產(chǎn)生的過量自由基超出細(xì)胞抗氧化防御能力，造成機(jī)體氧化與抗氧化作用失衡，產(chǎn)生氧化應(yīng)激反應(yīng)[11]。持續(xù)的氧化應(yīng)激可導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化、蛋白質(zhì)和DNA 損傷，引發(fā)炎癥、糖尿病、動(dòng)脈粥樣硬化和神經(jīng)退行性疾病[12]。丁基羥基茴香醚（BHA）、二丁基羥基甲苯（BHT）、沒食子酸丙酯（PG）、叔丁基對(duì)苯二酚（TBHQ）等合成抗氧化劑具有較高抗氧化活性，但因其一定程度上危害健康而被限制使用[13-14]。因此，本文旨在從發(fā)酵醬菜中提取一株高產(chǎn)胞外多糖的乳酸菌，研究其多糖的抗氧化性，以期尋找一種天然來源的、安全的抗氧化劑。

本研究從吉林省延吉市收集了300 余份發(fā)酵醬菜，從中篩選出高產(chǎn)胞外多糖的乳酸菌，擴(kuò)大培養(yǎng)并分離提取胞外多糖。通過檢測DPPH 自由基、ABTS+自由基和OH 自由基清除活性，測定多糖的抗氧化性，旨在為乳酸菌胞外多糖作為天然抗氧化劑的開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

發(fā)酵醬菜（包括辣白菜、醬辣椒、牛板筋、酸菜、桔梗等）購自吉林省延吉市；過氧化氫溶液、無水乙醇、碘液、蔗糖、硫酸、苯酚 北京化工廠；三氯乙酸、抗壞血酸、硫酸鐵 國藥集團(tuán)；水楊酸、過硫酸鉀 天津光復(fù)試劑有限公司；所有試劑均為分析純；DPPH、ABTS 北京索萊寶科技有限公司；MRS 液體培養(yǎng)基（g/L）：蛋白胨10.0 g、牛肉膏10.0 g、酵母提取物5.0 g、葡萄糖20.0 g、乙酸鈉5.0 g、檸檬酸二胺2.0 g、吐溫-80 1.0 mL、磷酸氫二鉀2 g、硫酸鎂0.2 g、硫酸錳0.03 g，蒸餾水1000 mL，121 ℃，高溫滅菌20 min；MRS 固體培養(yǎng)基（g/L）：MRS 液體培養(yǎng)基中加20 g 瓊脂，121 ℃，高溫滅菌20 min；MRS-S產(chǎn)糖培養(yǎng)基（g/L）：MRS 液體培養(yǎng)基中20 g 葡萄糖替換為25 g 葡萄糖、45 g 蔗糖，121 ℃，高溫滅菌20 min。

MLR-352H-PL 電熱恒溫培養(yǎng)箱 日本Panasonic 公司；ZHWY-2102 雙層恒溫振蕩培養(yǎng)箱 上海智誠分析儀器制造有限公司；DHG-9240A 電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；HVE-50 高壓蒸汽滅菌器 Hirayama 公司；UV-1550 紫外分光光度計(jì) 日本島津公司；Thermo Multiskan Spectrum 全波長酶標(biāo)儀 上海奧陸生物科技有限公司；MDF382E 超低溫冰箱 日本三洋公司；AUW-120 電子分析天平 日本Shimadzu 公司；J-26XPI冷凍高速離心機(jī) 美國貝克曼公司；Centrifuge5430高速離心機(jī) 德國Eppendorf 公司；FDU-2100 真空冷凍干燥機(jī)、OSB-2100 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 日本東京理化株式會(huì)社。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 發(fā)酵醬菜中乳酸菌的篩選 根據(jù)參考文獻(xiàn)[15]的方法并加以修改，取5 g 發(fā)酵醬菜樣品研磨，加入45 mL 0.9%生理鹽水混勻，取1 mL 樣品溶液，梯度稀釋（10-3～10-5），均勻涂布于含0.2% CaCO3的MRS 固體培養(yǎng)基上，37 ℃培養(yǎng)24～48 h。觀察菌落形態(tài)，選取產(chǎn)生“溶鈣圈”且表面凸起，邊緣光滑，乳白色或黃色的菌落，用無菌接種環(huán)挑取單菌落接種于MRS 液體培養(yǎng)基，37 ℃培養(yǎng)24 h，重復(fù)MRS 固體培養(yǎng)基劃線操作3～5 次，直至菌落形態(tài)一致，獲得純培養(yǎng)物[16]。挑取單菌落進(jìn)行革蘭氏染色、過氧化氫酶試驗(yàn)及顯微鏡觀察，其中革蘭氏染色陽性、過氧化氫酶陰性的菌株初步認(rèn)定為乳酸菌[17]。

1.2.2 高產(chǎn)胞外多糖乳酸菌的篩選 產(chǎn)胞外多糖的乳酸菌菌落一般具有“拉絲”或者“粘液”的特點(diǎn)，依據(jù)菌落形態(tài)對(duì)產(chǎn)糖乳酸菌進(jìn)行初步篩選[18]。并利用苯酚硫酸法測定胞外多糖含量，選取產(chǎn)量較高的菌株用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。乳酸菌在固體培養(yǎng)基上平板劃線后置于恒溫培養(yǎng)箱，37 ℃培養(yǎng)48 h，可觀察到其在MRS培養(yǎng)基上呈較小、邊緣整齊、灰白的不透明圓狀，而在產(chǎn)糖培養(yǎng)基MRS-S 上菌落較大，有光澤感，且粘性較強(qiáng)，挑取菌落有拉絲現(xiàn)象產(chǎn)生。

1.2.3 菌株的生物學(xué)鑒定 將篩選的產(chǎn)糖乳酸菌送至上海派森諾生物科技有限公司進(jìn)行16S rDNA 和pheS基因序列檢測，并通過MEGA11 軟件將測序結(jié)果與乳桿菌屬內(nèi)模式菌株進(jìn)行比對(duì)，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，進(jìn)行種間和種內(nèi)鑒定。

1.2.4 乳酸菌胞外多糖的提取 參考Di 等[19]的方法并加以修改，胞外多糖的提取主要包括菌株活化、擴(kuò)大培養(yǎng)、除菌體、濃縮、除蛋白、醇沉、透析等步驟。將活化好的菌株發(fā)酵液按1.5%接種量接種于MRS 液體培養(yǎng)基，37 ℃、150 r/min 搖瓶培養(yǎng)48 h，7000×g 離心20 min 去除菌體，采用TCA 法除蛋白，在發(fā)酵上清液中加80%三氯乙酸至終濃度為4%，4 ℃靜置12 h 沉淀蛋白質(zhì)，再次離心去除沉淀。使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮上清液，然后加入三倍體積95%預(yù)冷乙醇沉淀多糖，4 ℃靜置12 h，7000×g、4 ℃離心20 min，用適量去離子水溶解多糖沉淀，利用3400 kDa 透析膜在4 ℃下透析48 h，每8 h 換一次水，最后凍干，即為粗多糖成品。

1.2.5 總糖含量測定

1.2.5.1 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 采用苯酚硫酸法，以葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)品制作標(biāo)準(zhǔn)曲線[20]。稱取10 mg 干燥至恒重的葡萄糖，用蒸餾水溶解，定容于250 mL 容量瓶，分別吸取0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8 及0.9 mL 葡萄糖溶液于試管中，加蒸餾水補(bǔ)至1 mL，然后加入1 mL 5%（v/v）苯酚，5 mL 濃硫酸，混勻靜置20 min后，490 nm 處測定吸光度。以糖含量為橫坐標(biāo)（mg/L），吸光度值（A490 nm）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，建立回歸方程，Y=8.4001X+0.022，R2=0.9994＞0.99，表示具有較高可行性和線性關(guān)系。

1.2.5.2 多糖含量測定 取1 mL 濃度為0.03 mg/mL的多糖樣品溶液，加入1 mL 5%苯酚溶液和5 mL濃硫酸，混勻靜置20 min，490 nm 處測定吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算胞外多糖含量。

1.2.6 胞外多糖體外抗氧化活性測定 將冷凍干燥后的多糖樣品配制成10 mg/mL 的胞外多糖溶液，再用超純水分別稀釋濃度為2、4、6、8 mg/mL，用于DPPH 自由基、ABTS+自由基和OH 自由基清除試驗(yàn)。

1.2.6.1 DPPH 自由基清除試驗(yàn) 參照Xu 等[21]的實(shí)驗(yàn)方法稍加修改。稱取2 mg DPPH 溶于50 mL無水乙醇，使其在517 nm 處吸光度在0.8～1.0 之間。分別取1 mL（濃度范圍2～10 mg/mL）的胞外多糖溶液與1 mL DPPH-乙醇溶液充分混勻，室溫避光反應(yīng)30 min，離心（8000 r/min，10 min），吸取上清液，517 nm 處測定吸光度值，利用下面的公式計(jì)算胞外多糖的DPPH 自由基清除率。用2 mg/mL 的抗壞血酸作為陽性對(duì)照。

式中，A0：水與 DPPH-乙醇溶液反應(yīng)的吸光值；A1：樣品與 DPPH-乙醇溶液反應(yīng)的吸光值；A2：水與樣品混合的吸光值，以排除樣品自身對(duì)試驗(yàn)的干擾。

1.2.6.2 ABTS+自由基清除試驗(yàn) 參照趙丹等[22]的實(shí)驗(yàn)方法并加以修改。0.2 mL 7.4 mmol/L 的 ABTS溶液與0.2 mL 的2.6 mmol/L 過硫酸鉀溶液混合，避光反應(yīng)14 h，制成ABTS 儲(chǔ)備液。使用前用無水乙醇稀釋，使其在734 nm 處吸光度為0.70±0.02，制成ABTS 工作液。將0.2 mL（濃度范圍2～10 mg/mL）胞外多糖溶液與0.8 mL ABTS 工作液充分混勻，避光靜置6 min，734 nm 處測定吸光度值。帶入下列公式計(jì)算胞外多糖的ABTS+自由基清除能力。用2 mg/mL 抗壞血酸作為陽性對(duì)照。

式中，A0：水與 ABTS 反應(yīng)的吸光值；A1：樣品與ABTS 反應(yīng)的吸光值；A2：水與樣品混合的吸光值，以排除樣品自身對(duì)試驗(yàn)的干擾。

1.2.6.3 OH 自由基清除試驗(yàn) 參照王榮平[23]的實(shí)驗(yàn)方法并加以修改。分別向試管中加入1 mL（濃度范圍2～10 mg/mL）胞外多糖樣品，再依次加入1 mL的6 mmol/L 硫酸亞鐵溶液和1 mL 的1%過氧化氫溶液，混勻靜置15 min，然后加2 mL 的6 mmol/L水楊酸混勻，37 ℃恒溫30 min，3000 r/min 離心10 min，吸取上清液，510 nm 處測定吸光度值。利用下式計(jì)算胞外多糖的OH 自由基清除能力。用2 mg/mL抗壞血酸作為陽性對(duì)照。

式中，A0：超純水代替樣品的吸光值；A1：含不同濃度樣品的吸光值；A2：不含樣品和H2O2的吸光值。

1.3 數(shù)據(jù)處理

所有實(shí)驗(yàn)均設(shè)三組平行，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Graph-Pad Prism 8 軟件進(jìn)行繪圖和單因素方差分析（ANOVE，LSD）。數(shù)值以均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。P＜0.05 代表差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 乳酸菌篩選結(jié)果

按上述1.2.1 的實(shí)驗(yàn)方法分離發(fā)酵醬菜中的乳酸菌，利用乳酸菌在含CaCO3培養(yǎng)基產(chǎn)生“溶鈣圈”，且具有革蘭氏染色陽性，過氧化氫酶陰性的特點(diǎn)，共篩選出160 株疑似乳酸菌，對(duì)其進(jìn)行編號(hào)，用60%甘油保存在-80℃冰箱內(nèi)。菌株A63、A120 和A128 在含CaCO3的MRS 培養(yǎng)基上生長情況如圖1所示，菌落周圍形成透明“溶鈣圈”；革蘭氏染色鏡檢結(jié)果如圖2 所示，顯微鏡下均呈藍(lán)紫色的桿狀，具有乳酸桿菌的典型特征。

圖1 菌株A63、A120、A128 的“溶鈣圈”現(xiàn)象Fig.1 Phenomenon of "dissolving calcium circle" of strains A63,A120 and A128

圖2 菌株A63、A120、A128 的革蘭氏染色鏡檢結(jié)果Fig.2 Results of Gram staining microscopy of strains A63,A120 and A128

2.2 高產(chǎn)胞外多糖乳酸菌的篩選

菌株A63 在MRS 固體培養(yǎng)基和MRS-S 產(chǎn)糖培養(yǎng)基上的生長情況如圖3 所示。

圖3 A63 在MRS（a）和MRS-S（b）培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)Fig.3 Colony morphology of A63 on MRS (a) and MRS-S (b)medium

將上述從發(fā)酵醬菜中分離的160 株乳酸菌在MRS 固體培養(yǎng)基上平板劃線，用無菌牙簽輕挑單菌落，觀察到有10 株乳酸菌有拉絲現(xiàn)象，并且在MRSS 產(chǎn)糖培養(yǎng)基上長勢良好，呈現(xiàn)光滑的乳白色菌落或呈粘液狀。選擇拉絲現(xiàn)象較為明顯的菌株A63、A120、A128 進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)、提取胞外多糖并測定產(chǎn)量。胞外多糖產(chǎn)量結(jié)果如圖4 所示，三株乳酸菌均有較高的胞外多糖產(chǎn)量，其中菌株A63 的胞外多糖產(chǎn)量顯著高于菌株A120 和A128，具有更好的開發(fā)潛力。

圖4 乳酸菌胞外多糖產(chǎn)量Fig.4 Exopolysaccharide production of Lactic acid bacteria

2.3 菌株的生物學(xué)鑒定

2.3.1 16S rDNA 基因序列分析 以菌株A63、A120和A128 的基因組DNA 為模板，進(jìn)行PCR 擴(kuò)增。引物序列為27F（5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’）和1492R（5’-CTACGGCTACCTTGTTACGA-3’）。取各個(gè)菌種純化后的PCR 產(chǎn)物，使用測序儀ABI 3730-XL 進(jìn)行DNA 測序。用NCBI Blast 程序?qū)⑵唇雍蟮男蛄形募cNCBI 16S rDNA 數(shù)據(jù)庫中的數(shù)據(jù)進(jìn)行比對(duì)，得到與待測物種序列相似性最大的物種信息[24]，并使用MEGA11 軟件繪制系統(tǒng)發(fā)育樹。由圖5 可知，三株乳酸菌與L.plantarum和L.pentosus模式菌株的親緣性較近，無法通過16S rDNA 進(jìn)行確定，所以采用pheS基因序列分析進(jìn)一步確定所測菌株的具體種類。

圖5 基于16S rDNA 基因序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.5 Phylogenetic tree based on 16S rDNA gene sequences

2.3.2pheS基因序列分析 對(duì)菌株的pheS基因進(jìn)行擴(kuò)增、測序，基因序列同樣利用MEGA11 軟件與數(shù)據(jù)庫中的模式菌株進(jìn)行比對(duì)分析，繪制系統(tǒng)發(fā)育樹。由圖6 可知，三株乳酸菌與L.plantarum的親緣關(guān)系最近，且相似性為100%，可以判斷出三株乳酸菌均為植物乳植桿菌。

圖6 基于pheS 基因序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.6 Phylogenetic tree based on pheS gene sequences

2.4 乳酸菌胞外多糖的體外抗氧化活性測定結(jié)果

2.4.1 DPPH 自由基清除率 DPPH 自由基是一類較為穩(wěn)定的合成自由基，清除過量DPPH 自由基是維持體內(nèi)自由基平衡的重要因素，也是評(píng)價(jià)抗氧化劑效果的重要指標(biāo)之一[25]。植物乳植桿菌A63、A120、A128 胞外多糖的DPPH 自由基清除率如圖7 所示，其中以2 mg/mL 的抗壞血酸作為陽性對(duì)照。由圖7可知，三株植物乳植桿菌所產(chǎn)胞外多糖的DPPH 自由基清除率均隨著胞外多糖濃度的升高逐漸增加，在試驗(yàn)濃度范圍內(nèi)表現(xiàn)為明顯的劑量依賴性，且不同濃度間差異顯著（P＜0.05）。當(dāng)胞外多糖濃度為10 mg/mL 時(shí)，菌株A63、A120、A128 胞外多糖的DPPH自由基清除率分別為90.47%、79.37%、84.94%，其中菌株A63 胞外多糖的DPPH 自由基清除率最高，與2 mg/mL 抗壞血酸的自由基清除能力接近，表明菌株A63 胞外多糖具有較強(qiáng)的清除DPPH 自由基能力。楊晨璐等[26]對(duì)從鲊?yán)苯分刑崛〉闹参锶橹矖U菌胞外粗多糖和兩個(gè)純化后的組分進(jìn)行抗氧化性研究，結(jié)果表明三種多糖對(duì)DPPH 自由基的清除率均達(dá)到90%以上，說明乳酸菌胞外多糖具有代替抗壞血酸清除DPPH 自由基的潛力。

圖7 胞外多糖的DPPH 自由基清除率Fig.7 DPPH radical scavenging rate of exopolysaccharides

2.4.2 ABTS+自由基清除率 ABTS+自由基是一種過氧化物酶底物，是評(píng)價(jià)抗氧化物抗氧化能力的另一個(gè)廣泛使用的指標(biāo)[27]。植物乳植桿菌A63、A120、A128 胞外多糖對(duì)ABTS+自由基清除率如圖8 所示，三株菌的胞外多糖均具有一定程度的清除ABTS+自由基能力。在試驗(yàn)濃度范圍內(nèi)，胞外多糖對(duì)ABTS+自由基清除率均表現(xiàn)出濃度依賴性。隨著胞外多糖濃度升高，ABTS+自由基清除率增大，但均低于抗壞血酸。當(dāng)胞外多糖濃度為10 mg/mL 時(shí)，菌株A63、A120、A128 胞外多糖的ABTS+自由基清除率分別為51.67%、47.07%、49.92%，植物乳植桿菌A63 胞外多糖的ABTS+自由基清除能力高于其他菌株所產(chǎn)胞外多糖。臧文晶等[28]從自制橘子發(fā)酵液中分離的腸膜明串珠菌HDE1 胞外多糖對(duì)ABTS+自由基的清除率為40%±0.02%，低于本研究中植物乳植桿菌A63 胞外多糖清除ABTS+自由基能力，說明植物乳植桿菌A63 胞外多糖具有較高的ABTS+自由基清除能力。

圖8 胞外多糖的ABTS+自由基清除率Fig.8 ABTS+ radical scavenging rate of exopolysaccharides

2.4.3 OH 自由基清除率 OH 自由基與核酸、蛋白質(zhì)等生物大分子作用，會(huì)造成機(jī)體嚴(yán)重的氧化損傷[29]。胞外多糖主要通過螯合金屬離子來抑制羥基的形成，金屬離子可以作為助氧化劑催化氧化反應(yīng)[30]。植物乳植桿菌A63、A120、A128 胞外多糖對(duì)OH 自由基清除率如圖7 所示，圖中以胞外多糖的最低濃度2 mg/mL 的抗壞血酸作為陽性對(duì)照。由圖9 可知，當(dāng)胞外多糖濃度為2 mg/mL 時(shí)，三株菌的OH 自由基清除率均超過20%。隨著胞外多糖濃度升高，OH 自由基清除活性增大，但不同濃度之間差異并不顯著。當(dāng)胞外多糖濃度為10 mg/mL 時(shí)，OH 自由基清除活性達(dá)到最大，清除率分別為56.21%、34.98%、35.09%。葉廣彬等[31]從東北發(fā)酵酸菜中分離的乳酸菌GX-3，其胞外多糖濃度在5 mg/mL 時(shí)，對(duì)OH 自由基的清除率為78.24%±3.52%，高于本研究中植物乳植桿菌A63 胞外多糖的OH 自由基清除率，但DPPH 自由基清除率顯著低于A63 胞外多糖，說明不同乳酸菌產(chǎn)生的胞外多糖可以作用于不同種類的自由基，都具有一定程度的抗氧化活性。

圖9 胞外多糖的羥基自由基清除率Fig.9 Hydroxyl radical scavenging of exopolysaccharides

3 結(jié)論

本研究從吉林省延吉市300 余份發(fā)酵醬菜中篩選出3 株高產(chǎn)胞外多糖的菌株A63、A120、A128，分別對(duì)其所產(chǎn)胞外多糖進(jìn)行體外抗氧化活性的測定。研究表明，菌株A63、A120、A128 胞外多糖產(chǎn)量分別為0.806、0.663、0.630 g/L，經(jīng)16S rDNA 和pheS基因鑒定為植物乳植桿菌。體外抗氧化結(jié)果顯示，三株菌所產(chǎn)胞外多糖都具有清除DPPH、ABTS、OH 自由基的能力，且表現(xiàn)為明顯的劑量依賴性，當(dāng)胞外多糖濃度為10 mg/mL 時(shí)，植物乳植桿菌A63胞外多糖的DPPH、ABTS 和OH 自由基清除率分別為90.47%、51.67%和35.08%，高于同濃度下菌株A120、A128 胞外多糖的自由基清除率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明植物乳植桿菌A63 所產(chǎn)胞外多糖具有較強(qiáng)的抗氧化能力，且具有較高產(chǎn)量，可以作為潛在的天然抗氧化劑來源。本實(shí)驗(yàn)為乳酸菌胞外多糖的抗氧化性研究提供了理論依據(jù)，但體外理化實(shí)驗(yàn)雖然在一定程度上能反映胞外多糖的抗氧化性，卻無法體現(xiàn)生物有效性和細(xì)胞代謝等問題。因此，后續(xù)計(jì)劃利用小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7 開展細(xì)胞抗氧化試驗(yàn)，探究A63 胞外多糖對(duì)巨噬細(xì)胞RAW264.7 氧化損傷的保護(hù)作用，以便更好地評(píng)估乳酸菌胞外多糖的細(xì)胞抗氧化活性。