菌酶復合物對飼喂小麥型飼糧蛋雞生產性能、營養物質表觀消化率、腸道消化酶活性和盲腸微生物區系的影響

田慧麗， 郭志有， 郭瑞萍， 趙滿達

（山東畜牧獸醫職業學院，山東濰坊 261061）

智能養殖技術與飼料行業的迅速發展， 對飼料原料數量與質量均提出更高的要求， 玉米自身代謝能高，常作為蛋雞生產中常用能量飼料（李勇等，2013；蘇坤等，2012），在蛋雞飼料配方中的添加比例通常為60% ~ 70%，因玉米區域種植量與運輸問題，存在玉米短期供應偏緊現象，導致實際生產中玉米高位價格現象發生， 提高蛋雞飼料成本，影響養殖利潤。 在玉米高價位時，蛋雞飼料中使用玉米合適替代物， 并針對替代物在使用中存在的問題尋找解決辦法， 是保障蛋雞高效生產的有效手段。

小麥總能與代謝能水平略低于玉米（Barzegar等，2019），而粗蛋白質、賴氨酸、蛋氨酸、蘇氨酸、色氨酸和可利用磷水平均高于玉米 （Mirzaie 等，2012），在使用時，還可以減少豆粕與磷酸氫鈣使用量， 被認為是高價玉米的理想替代者（Nguyen等，2021）。小麥中淀粉的含量高于玉米，同時總非淀粉多糖（NSP）、可溶性NSP 與不可溶NSP 均高于玉米 （Barzegar 等，2019）， 給小麥營養物質消化、吸收與利用造成負面影響，限制其在蛋雞生產中的應用（漆雯雯等，2015）。 同時，小麥在替換玉米使用時還需在系統動物營養學方面關注替換前后飼料中脂肪酸含量變化， 玉米色素含量差異等問題。

現已有較多的學者研究了小麥中NSP 的種類與含量（呂秋鳳等，2014；仁美琦等，2010），同時研究了小麥在蛋雞飼料中的使用及NSP 酶在蛋雞或肉雜雞小麥型飼糧中的應用效果（盧麗枝等，2022；Addeo 等，2021）。本研究使用10%小麥替換同比例玉米，降低飼料中豆粕使用量，同時在小麥型蛋雞日糧中再額外添加菌酶復合物， 研究菌酶復合物在小麥型蛋雞飼料上使用效果， 為菌酶復合物在小麥型蛋雞飼糧中應用提供理論依據與數據支撐。

1 材料與方法

1.1 試驗設計 本試驗共分為3 個處理組，分別為以玉米-豆粕型飼糧作為基礎日糧的對照組；使用10%小麥替換對照組中同等比例玉米，并適當調低豆粕用量作為小麥組； 在小麥組基礎上添加0.02%菌酶復合物的菌酶復合物組。 不同處理組飼糧組成及營養水平如表1 所示。

表1 飼糧組成及營養水平（風干基礎）

1.2 試驗材料

1.2.1 試驗用菌酶復合物 山東蘇柯漢生物工程股份有限公司生產的蛋雞菌酶復合物制劑： 其中枯草芽孢桿菌含量≥5.00×109CFU/g， 植物乳桿菌≥2.00×108CFU/g，釀酒酵母≥5.00×109CFU/g，淀粉酶≥50 U/g，蛋白酶≥1200 U/g，纖維素酶≥1500 U/g，β-葡聚糖酶≥1000 U/g，β-木聚糖酶≥2000 U/g，菌酶復合物在蛋雞全價料中的添加比例為0.02%。

1.2.2 試驗動物 本試驗選用360 只體重、 產蛋率、蛋重相近的同批次48 周齡健康正常產蛋京紅1 號商品代蛋雞， 蛋雞飼養設備選用常規3 層H型籠養模式，將蛋雞隨機分成3 個處理組，每個處理設10 個重復，每個重復12 只雞。

1.3 試驗時間及地點 試驗于2021 年4 ~ 5 月，在山東省青島市萊西市姜山鎮林宇蛋雞養殖場進行。

1.4 飼養管理 按照試驗分組， 先進行預飼，時間為3 d，正式試驗時間為28 d。 試驗期間常規飼養，自由飲水，每天檢查水線5 次，試驗期間蛋雞采食方式為自由采食，試驗期內環境（溫度、相對濕度、飼養密度、通風等）與光照（16L：8D）等控制程序均一致，免疫程序按照常規要求進行。

1.5 測定指標與方法

1.5.1 蛋雞生產性能的測定 蛋雞產蛋性能自正試期開始每日以重復為單位記錄產蛋數、總蛋重。每周單個重復結算一次耗料量。 試驗結束后計算每個重復的平均產蛋率、 平均蛋重、 平均日采食量、料蛋比、死淘率、破殘次蛋率。 具體計算公式如下所示：

平均產蛋率=每個重復產蛋數/每個重復產蛋雞存欄數；

平均蛋重=每個重復所產蛋總重/每個重復的產蛋數；

平均日采食量=（每個重復飼喂量-每個重復剩料量）/雞數量；

料蛋比=每個重復耗料量/每個重復蛋重；

死淘率=每個重復死淘蛋雞數/每個重復試驗起始蛋雞數；

破殘次蛋率=每個重復破殘次蛋數/每個重復的產蛋數。

1.5.2 蛋雞營養物質表觀消化率的測定 日糧表觀消化率測定使用內源指示劑方法進行， 在試驗結束前3 d， 以重復作為單位， 收集蛋雞排泄物（去除羽毛與碎屑）， 將3 d 的糞樣混勻， 取出約200 g 鮮糞，加入30 mL 濃度為10%稀硫酸固氮，并加入2 滴甲苯防腐， 裝入自封袋編號后于-20 ℃冰箱凍存，用于測定粗蛋白質含量，剩余糞樣正常裝自封袋重新編號后于-20 ℃冰箱凍存， 用以分析干物質、 鈣與磷含量。 通過糞中酸不溶灰分（AIA）含量計算營養物質表觀消化率。 其中飼料與糞中酸不溶灰分含量按照國標GB/T 6438-2007 測定方法進行，干物質、粗蛋白質、鈣、磷含量測定按照常規分析方法進行（張麗英，2020），計算公式如下所示：

1.5.3 蛋雞腸道消化酶活性測定 試驗結束時，每個重復隨機取一只雞，經頸靜脈放血致死，剖開腹腔， 找到十二指腸與空腸， 隨后用細線進行結扎， 分別獲得十二指腸與空腸食糜， 裝入離心管中，標號后置于-20 ℃冰箱冷凍保存，用于測定食糜中淀粉酶、脂肪酶、蛋白酶活性。

消化酶樣本前處理按照冰凍的食糜在室溫下自然解凍，之后取少量食糜，加入雙蒸水[按食糜質量（g）：水體積（mL）＝1：5]，搖勻后置于4 ℃離心機3000 r/min 離心5 min， 取上清液作為待測樣品，采用試劑盒測定淀粉酶、脂肪酶、蛋白酶活性，試劑盒購自南京建成生物有限公司， 同時使用BCA 方法測定上清液蛋白含量。

1.5.4 蛋雞盲腸微生物區系的測定 在取消化酶樣品之后，找到蛋雞盲腸部分，用細線對盲腸部位進行結扎，獲得盲腸食糜，裝入離心管中，標號后置于-20 ℃冰箱冷凍保存， 用以測定盲腸內微生物區系。

盲腸食糜從冰箱中取出后，常溫解凍，然后用平板涂布法測定盲腸內微生物。 取盲腸食糜0.5 g，加入滅菌生理鹽水4.5 mL 稀釋成為10-1懸濁液，漩渦振蕩3 min，離心5 min，吸取0.5 mL 上清液加入盛有4.5 mL 滅菌生理鹽水試管中稀釋至10-2懸濁液， 按照此方法再依次將空腸和盲腸內容物稀釋至10-3、10-4、10-5、10-6、10-7用于涂板培養。 乳酸桿菌采用Rogasa 瓊脂培養基采用37 ℃恒溫培養箱沖氮氣進行厭氧培養48 h，大腸桿菌采用麥康凱培養基（MacConkey 瓊脂）采用37 ℃恒溫培養箱培養24 h 分別計數，結果以每克腸道內容物中含有菌落總數的常用對數lg（CFU/g）來表示。

1.6 數據分析 試驗數據先用Microsoft Excel作初步處理， 然后用SPSS 18.0 統計軟件進行單因素方差分析（one-way ANOVA）， 采用Duncan氏法進行多重比較， 以P < 0.05 表示差異達到顯著水平。試驗數據以“平均數±標準差”（Mean±SD）表示。

2 結果與分析

2.1 菌酶復合物對飼喂小麥型飼糧蛋雞生產性能的影響 由表2 可知，與對照組相比，小麥組處理并未影響到平均蛋重、產蛋率、平均日采食量、料蛋比（P > 0.05）， 小麥組處理蛋雞死淘率增加9.0%，破殘次蛋率增加2.9%，差異均不顯著（P >0.05）； 菌酶復合物組處理同樣未影響到平均蛋重、產蛋率、平均日采食量、料蛋比、蛋雞死淘率和破殘次蛋率（P > 0.05）。 與小麥組相比，菌酶復合物組處理并未影響到平均蛋重、產蛋率、平均日采食量（P > 0.05），料蛋比降低3.4%，死淘率降低9.8%，破殘次蛋率降低1.0%，差異均不顯著（P >0.05）。

表2 菌酶復合物對飼喂小麥型飼糧蛋雞生產性能的影響

2.2 菌酶復合物對飼喂小麥型飼糧蛋雞營養物質表觀消化率的影響 由表3 可知， 與對照組相比，小麥組處理未影響到飼糧干物質、粗蛋白質、鈣和磷的表觀消化率（P > 0.05）。 與小麥組相比，菌酶復合物組處理干物質表觀消化率增加3.9%，鈣表觀消化率增加5.8%， 差異均不顯著 （P >0.05）。 粗蛋白質表觀消化率增加8.4%，磷表觀消化率增加11.1%，差異顯著（P < 0.05）。

表3 菌酶復合物對飼喂小麥型飼糧蛋雞營養物質表觀消化率的影響

2.3 菌酶復合物對飼喂小麥型飼糧蛋雞腸道消化酶活性的影響 由表4 可知，與對照組相比，小麥組處理并未影響到十二指腸與空腸中淀粉酶、脂肪酶和蛋白酶活性（P > 0.05）；菌酶復合物處理淀粉酶活性增加17.6%（十二指腸） 和30.5%（空腸）， 脂肪酶酶活性增加19.3%（十二指腸）和21.6%（空腸），蛋白酶活性增加11.4%（十二指腸）和10.5%（空腸），差異顯著（P < 0.05）。 與小麥組相比，菌酶復合物處理淀粉酶活性增加15.5%（十二指腸） 和24.8%（空腸）， 脂肪酶酶活性增加22.6%（十二指腸）和23.3%（空腸），蛋白酶活性增加9.3%（十二指腸）和8.8%（空腸），差異顯著（P< 0.05）。

表4 菌酶復合物對飼喂小麥型飼糧蛋雞腸道消化酶活性的影響

2.4 菌酶復合物對飼喂小麥型飼糧蛋雞盲腸微生物區系的影響 由表5 可知，相比于對照組，小麥組處理并未影響到盲腸內大腸桿菌、 沙門氏菌和乳酸桿菌（P > 0.05）；菌酶復合物處理盲腸大腸桿菌降低11.5%，沙門氏菌降低8.7%，乳酸桿菌增加7.6%，差異顯著（P < 0.05）。 與小麥組相比，菌酶復合物處理盲腸大腸桿菌降低15.5%， 沙門氏菌降低13.4%，乳酸桿菌增加12.7%，差異顯著（P < 0.05）。

表5 菌酶復合物對飼喂小麥型飼糧蛋雞盲腸微生物區系的影響 lg（CFU/g）

3 討論

3.1 菌酶復合物對飼喂小麥型飼糧蛋雞生產性能的影響 小麥在蛋雞生產中的應用研究， 在蛋雞育成階段， 使用70%的小麥作為飼料原料，對蛋雞生產性能無負面影響（李勇等，2013），在蛋雞高峰期， 小麥在蛋雞飼糧中的添加量達到30%，并不影響蛋雞生產性能 （Abudabos 等，2011），Mirzaie 等（2012）研究進一步表明，小麥在蛋雞飼料中添加量達到45%，同樣不會對蛋雞生產造成不利影響。在蛋雞產蛋中后期，小麥可以完全替代玉米在蛋雞飼糧中使用（魏玉梅等，2013）。在本研究中，小麥的使用量僅為10%，試驗中并未產生不利影響。但蛋雞死淘率和破殘次蛋率略高，推測主要原因是小麥中的抗營養因子增多所致，因此，本試驗中在小麥型飼糧基礎上添加菌酶復合物，結果發現菌酶復合物能降低蛋雞死淘率和破殘次蛋率，進而改善蛋雞生產性能。王麗娟等（2016）發現，在蛋雞飼糧中使用復合酶（木聚糖酶、甘露聚糖酶、纖維素酶、蛋白酶和淀粉酶）能改善蛋雞產蛋性能， 在高齡蛋雞中補充添加酶制劑（木聚糖酶） 對生產性能起到更好的效果 （Abdollahi 等，2021）。菌酶復合物對蛋雞生產性能的提升也有可能是通過益生菌途徑， 益生菌能夠調節腸道上皮屏障功能， 進而促進營養物質消化與吸收（高侃等，2013）。 林標聲等（2022）研究菌酶協同發酵飼料，發現菌酶復合（木聚糖酶、β-葡聚糖酶、纖維素酶、果膠酶、乳酸菌、酵母菌和芽孢桿菌）能夠降低破蛋率，提高商品蛋雞生產性能。

3.2 菌酶復合物對飼喂小麥型飼糧蛋雞營養物質表觀消化率的影響 關于小麥型飼糧使用對營養物質表觀消化率的影響，段磊（2011）研究結果表明， 低劑量的小麥添加并未影響到蛋雞飼料中各營養物質表觀消化率，李勇等（2013）使用青年蛋雞研究表明，45%與70%的小麥添加量對粗蛋白質表觀代謝率沒有負面影響。 這與本試驗結果相一致。關于小麥中的抗營養因子，主要集中在小麥中的NSP 方面， 其NSP 主要是阿拉伯木聚糖，不易被動物消化酶消化，同時會使食糜黏性增加，阻礙其他易消化營養物質的消化與吸收（仁美琦等，2010）。 在菌酶復合物對蛋雞營養物質表觀消化率方面，Mathlouthi 等（2003）研究表明，在小麥或大麥蛋雞飼糧中，添加木聚糖酶和β-葡聚糖酶能夠提高蛋雞生產性能和飼料轉化率。 Mirzaie 等（2012）研究表明，在一種非淀粉多糖含量較高的小麥品種中， 使用木聚糖酶能夠增加海蘭白產蛋雞對營養物質的沉積。 Nguyen 等（2021）研究表明，日糧中可溶性NSP 會影響蛋雞產蛋率，而補充木聚糖酶能夠通過提高養分利用率而對蛋雞產蛋性能起到有益效果。張萌等（2012）研究表明，在蛋雞小麥型日糧中添加NSP 酶能夠表現出額外能力效應，這與NSP 酶對小麥中NSP 的分解有關。劉閏等（2022）研究表明，菌酶協同發酵可提高蛋雞能量和蛋白表觀消化率。菌酶復合物對營養物質消化利用率的提升也與益生菌的使用改善了蛋雞腸道健康有關（Khan 等，2020），菌酶協同作用處理飼料原料，可以提高微生物對飼料大分子物質的利用效率，如NSP 酶促進小麥中的NSP 分解成葡萄糖，葡萄糖產生后作為乳酸菌與酵母菌的作用底物，促進NSP 酶的水解作用（李旺等，2020）。

3.3 菌酶復合物對飼喂小麥型飼糧蛋雞腸道消化酶活性的影響 小麥型蛋雞飼糧使用并未對腸道消化酶活性的造成影響， 而菌酶復合物添加到蛋雞飼糧中，能夠補充蛋雞內源性消化酶的不足，增加蛋雞腸道內消化酶的種類與數量， 進而增加消化酶的活性（呂秋鳳等，2014），復合酶中的NSP酶能夠降解小麥中的NSP，消除食糜黏性，減少抗營養作用。在豬上的研究表明，使用微生物發酵飼料（菌酶協同發酵）能夠增加萊蕪黑豬腸道內消化酶的活性（胡文平等，2022），在蛋雞生產中，本試驗得出類似結論。

3.4 菌酶復合物對飼喂小麥型飼糧蛋雞盲腸微生物區系的影響 小麥型蛋雞飼糧使用并未對盲腸微生物造成影響，殷璐瑤等（2017）研究表明，在蛋雞日糧中使用益生菌（枯草芽孢桿菌和乳酸片球菌）， 能夠降低蛋雞腸道內腸桿菌細菌（艾希氏細菌和沙門氏菌）、腸桿菌屬與變形菌屬（大腸桿菌），同時能夠增加盲腸內菌群種類與數量（芽孢桿菌）。 張利環等（2022）研究表明，在肉雞中使用復合益生菌（干酪乳桿菌、嗜酸乳桿菌、乳雙歧桿菌）能增加回腸中乳酸桿菌數，減少回腸梭菌屬與葡萄球菌屬，降低致病原菌豐度而改善腸道菌群組成。 盧麗枝等（2022）研究結果表明， 在三黃雞日糧中添加0.01%木聚糖酶和0.01%β-甘露聚糖酶能提高廣西三黃雞盲腸中乳酸桿菌的數量，降低大腸桿菌數，本試驗結果與上述試驗結果相一致。

4 結論

在蛋雞飼糧中使用10%小麥替換10%玉米，并減少豆粕使用量， 未對蛋雞生產性能造成負面影響， 菌酶復合物添加能提高小麥型飼糧蛋雞營養物質表觀消化率，提高腸道消化酶活性，改善腸道微生物組成，提高蛋雞生產性能。