白藜蘆醇對(duì)芙蓉鯉鯽生長(zhǎng)性能、肌肉質(zhì)構(gòu)特性及其理化指標(biāo)的影響

王永芳， 王 敏， 尹 月， 李 響， 張喜聞， 陳佳億， 趙玉蓉

（1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，湖南長(zhǎng)沙 410128；2.長(zhǎng)沙醫(yī)學(xué)院院士工作站，湖南長(zhǎng)沙 410219）

芙蓉鯉鯽是湖南省水產(chǎn)科學(xué)研究所以散鱗鏡鯉、興國(guó)紅鯉和紅鯽為雜交原種，采用群體繁殖混合選育技術(shù)選育而成的國(guó)家農(nóng)業(yè)農(nóng)村部水產(chǎn)新品種，具有生長(zhǎng)速度快、肉質(zhì)好以及抗逆性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)（陳林等，2019）。 相同條件下，芙蓉鯉鯽生長(zhǎng)速度比湘鯽、彭澤鯽和銀鯽等相似品種快，且肉質(zhì)明顯高于普通鯉鯽魚（李傳武等，2010），因此深受廣大養(yǎng)殖戶的喜愛。但隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖行業(yè)的發(fā)展，高密度的集約化養(yǎng)殖模式容易造成魚類肝臟及機(jī)體的氧化應(yīng)激損傷，使魚類生長(zhǎng)性能和肉品質(zhì)降低。因此， 研發(fā)新型高效環(huán)保飼料添加劑已成為生產(chǎn)者及科研工作者發(fā)展綠色健康水產(chǎn)養(yǎng)殖模式極為緊迫的課題。

白藜蘆醇是一種植物多酚化合物， 廣泛存在于虎杖、葡萄等植物中，具有多種生物學(xué)活性，包括抗氧化、抗炎、抗菌、免疫調(diào)節(jié)等（Zheng 等，2020；Cheng 等，2019）， 還能影響動(dòng)物脂質(zhì)代謝，減少肝臟脂質(zhì)積累（Alberdi，2013），因此可作為一種理想的新型飼料添加劑應(yīng)用于水產(chǎn)行業(yè)中。 相關(guān)研究表明， 白藜蘆醇可通過提高機(jī)體抗氧化能力來實(shí)現(xiàn)對(duì)魚類生長(zhǎng)的促進(jìn)作用 （Simoes 等，2019）。 段平男等（2021）研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加300 mg/kg 白藜蘆醇能顯著提高寧鄉(xiāng)豬肌肉的抗氧化能力，降低屠宰后肌肉的糖酵解速率，一定程度上改善寧鄉(xiāng)豬肉品質(zhì)。Tan 等（2019）發(fā)現(xiàn)，白藜蘆醇可提高大菱鲆肝臟SOD 活性并上調(diào)其mRNA 表達(dá)，減輕大菱鲆由豆粕誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激。 但白藜蘆醇對(duì)芙蓉鯉鯽生長(zhǎng)性能、 肌肉質(zhì)構(gòu)特性及其理化指標(biāo)的影響尚鮮見報(bào)道。因此，本試驗(yàn)旨在探究飼料中添加不同水平的白藜蘆醇對(duì)芙蓉鯉卿生長(zhǎng)性能、肌肉質(zhì)構(gòu)特性及其理化指標(biāo)的影響，以期為白藜蘆醇在水產(chǎn)飼料中的合理應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 白藜蘆醇購(gòu)自長(zhǎng)沙艾康生物技術(shù)有限公司，為虎杖提取物，純度為98.5%。 芙蓉鯉鯽由湖南省湘陰縣水產(chǎn)科學(xué)研究所提供。

1.2 試驗(yàn)飼料及配制 參照鯉魚配合飼料營(yíng)養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)（GB/T36782-2018）和鯽魚配合飼料營(yíng)養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)（SC/T1076-2004）設(shè)計(jì)芙蓉鯉鯽基礎(chǔ)飼糧配方。將所有飼料原料用粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎并過60 目篩，然后按飼料配方精確稱取原料， 通過逐級(jí)擴(kuò)大的方法將其均勻混合， 然后經(jīng)SLX-80 型顆粒飼料機(jī)制成直徑為2.0 mm 的顆粒飼料，自然風(fēng)干后置于-20 ℃冰柜中保存?zhèn)溆谩?基礎(chǔ)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)） %

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及飼養(yǎng)管理 飼養(yǎng)試驗(yàn)在湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)耘園基地的網(wǎng)箱 （1.5 m×1.5 m×1.5 m）中進(jìn)行。 試驗(yàn)魚購(gòu)入后，在網(wǎng)箱中暫養(yǎng)2 周，投喂基礎(chǔ)飼料。 在正式試驗(yàn)開始之前，禁食24 h，再選取健康且規(guī)格接近的芙蓉鯉鯽450 尾，隨機(jī)分為3 個(gè)處理組。試驗(yàn)魚初始體質(zhì)量為（24.98±0.05）g。分別投喂白藜蘆醇添加水平為0 （對(duì)照）、150、300 mg/kg 的飼料，每個(gè)處理5 個(gè)重復(fù)（網(wǎng)箱），每個(gè)重復(fù)30 尾。

試驗(yàn)為期8 周， 每日定時(shí)在2 個(gè)時(shí)間段投喂飼料（08：30、17：30），并記錄投飼量。 日投喂量以芙蓉鯉鯽體重的2% ～5%為標(biāo)準(zhǔn)， 根據(jù)水溫、天氣和攝食情況進(jìn)行調(diào)整。 記錄每日攝食和死亡情況。 試驗(yàn)期間水溫（26.0±2.0）℃，pH 保持在（7.7±0.2），氨氮≤0.2 mg/L，亞硝酸鹽＜0.005 mg/L，溶解氧（7.5±1.5）mg/L。

1.4 樣品采集 養(yǎng)殖試驗(yàn)完成后， 禁食24 h，采用濃度為0.01%的MS-222 麻醉后稱重。 每個(gè)網(wǎng)箱中挑選接近平均體重的5 尾魚， 稱重并測(cè)量體長(zhǎng)， 然后用一次性無菌注射器從尾部靜脈血管采集血液，低溫離心（4 ℃，3000 r/min，10 min），吸取上層血清分裝后保存于-80 ℃冰箱中備用。 采血后，將魚放置在冰盤上解剖，分離出內(nèi)臟、肝胰臟并稱重。 隨后將肝臟保存于-80 ℃冰箱進(jìn)行后續(xù)指標(biāo)的測(cè)定。 采集側(cè)線鱗上方靠近鰓蓋同一部位肌肉，用于肌肉的質(zhì)構(gòu)特性和理化指標(biāo)的測(cè)定。每個(gè)網(wǎng)箱另取4 尾魚，用于全魚常規(guī)營(yíng)養(yǎng)組成的測(cè)定。

1.5 測(cè)定指標(biāo)與方法

1.5.1 生長(zhǎng)性能 計(jì)算增重率、特定生長(zhǎng)率、飼料系數(shù)等指標(biāo)，具體公式如下：

增重率/%=［終末體重 （g）－初始體重（g）]/初始體重（g）×100；

特定生長(zhǎng)率/（%/d）=［ln 終末體重（g）－ln 初始體重（g）］/飼養(yǎng)天數(shù)×100；

飼料系數(shù)=攝食飼料總量（g） /［終末體重（g）－初始體重（g）］；

存活率/%=終末尾數(shù)/初始尾數(shù)×100；

肥滿度/（g/cm3）=體重（g）/體長(zhǎng)3（cm3）×100；

臟體比/%=內(nèi)臟重（g）/體重（g）×100；

肝體比/%=肝胰臟重（g）/體重（g）×100。

1.5.2 魚體組成分析 飼料及全魚中水分、 粗脂肪、粗蛋白質(zhì)、粗灰分含量測(cè)定分別采用105 ℃恒溫干燥法 （GB/T5009.3）、 索氏 抽提法（GB/T5009.6）、凱氏定氮法（GB/T5009.5）和550 ℃馬福爐灰化法（GB/T5009.4）。

1.5.3 肌肉的質(zhì)構(gòu)特性 肌肉的質(zhì)構(gòu)特性包括硬度、彈性、膠著性、黏性、內(nèi)聚性和咀嚼性等指標(biāo)。采用英國(guó)SMS 公司的TAXT plus 質(zhì)構(gòu)儀進(jìn)行檢測(cè)，待檢測(cè)肌肉規(guī)格為1 cm×1 cm×1 cm。 采用圓柱形探頭（直徑6 mm）進(jìn)行質(zhì)地剖面分析（TPA）測(cè)試，壓縮肌肉2 次，探頭測(cè)試前速度2 mm/s，測(cè)試速度l mm/s，壓縮50%，間隔時(shí)間為5 s。

1.5.4 肌肉理化指標(biāo) 羰基、巰基（-SH）含量，總超氧化物歧化酶 （T-SOD）、 總抗氧化能力 （TAOC）、Ca2+-ATP 酶等酶活性和丙二醛（MDA）、總蛋白（TP）等含量測(cè)定均采用南京建成生物工程研究所試劑盒，具體測(cè)定方法見試劑盒說明書。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析 采用SPSS 22.0 對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析（one-way ANOVA），若差異達(dá)到顯著水平，則進(jìn)行Duncan 氏法多重比較，顯著性水平為P < 0.05。試驗(yàn)數(shù)據(jù)均以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 白藜蘆醇對(duì)芙蓉鯉鯽生長(zhǎng)性能的影響 由表2 可知，與對(duì)照組相比，150 mg/kg 和300 mg/kg白藜蘆醇添加組的肝體比分別顯著降低了11.36%和16.12%（P ＜0.05），各組間末均重、增重率、特定生長(zhǎng)率、飼料系數(shù)、存活率、肥滿度和臟體比均無顯著差異（P ＞0.05）。

表2 白藜蘆醇對(duì)芙蓉鯉鯽生長(zhǎng)性能的影響

2.2 白藜蘆醇對(duì)芙蓉鯉鯽常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分含量的影響 由表3 可知，150 mg/kg 和300 mg/kg 白藜蘆醇組全魚中粗脂肪含量較對(duì)照組分別顯著降低了19.40%和25.52%（P ＜0.05）；300 mg/kg 白藜蘆醇組肝臟粗脂肪含量較對(duì)照組顯著降低了48.17%（P ＜0.05）， 各組間全魚水分和粗蛋白質(zhì)含量無顯著差異（P ＞0.05）。

表3 白藜蘆醇對(duì)芙蓉鯉鯽常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分含量的影響（以濕重計(jì)） %

2.3 白藜蘆醇對(duì)芙蓉鯉鯽肌肉質(zhì)構(gòu)特性的影響由表4 可知，300 mg/kg 白藜蘆醇組與對(duì)照組相比，肌肉黏性顯著降低了51.61%（P ＜0.05）；與對(duì)照組相比，150 mg/kg 和300 mg/kg 白藜蘆醇組肌肉的內(nèi)聚性分別顯著提高了9.52%和9.52%（P ＜0.05）；150 mg/kg 白藜蘆醇組肌肉咀嚼性較對(duì)照組顯著提高了39.22%（P ＜0.05）。 各組間肌肉的硬度、彈性和膠著性均無顯著差異（P ＞0.05）。

表4 白藜蘆醇對(duì)芙蓉鯉鯽肌肉質(zhì)構(gòu)特性的影響

2.4 白藜蘆醇對(duì)芙蓉鯉鯽肌肉理化指標(biāo)的影響由表5 可知，150 mg/kg 和300 mg/kg 白藜蘆醇組的肌肉Ca2+-ATP 酶較對(duì)照組分別顯著提高了338.46% 和369.23% （P ＜ 0.05）；150 mg/kg 和300 mg/kg 白藜蘆醇組的肌肉T-AOC 活性較對(duì)照組分別顯著提高了65.00%和62.50%；150 mg/kg白藜蘆醇組肌肉中巰基含量較對(duì)照組顯著增加了50.00%（P ＜0.05）；各組間肌肉羰基、MDA 含量和T-SOD 活性沒有顯著差異（P ＞0.05）。

表5 白藜蘆醇對(duì)芙蓉鯉鯽肌肉理化指標(biāo)的影響

3 討論

3.1 白藜蘆醇對(duì)芙蓉鯉鯽生長(zhǎng)性能和體組成的影響 日糧中添加白藜蘆醇可改善動(dòng)物機(jī)體抗氧化狀態(tài)以及對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用率，從而對(duì)動(dòng)物生長(zhǎng)性能有促進(jìn)作用 （馬玉靜等，2019）。 Wilson 等（2015）報(bào)道，飼料添加600 mg/kg 白藜蘆醇可促進(jìn)漠斑牙鲆生長(zhǎng)，使其體長(zhǎng)增長(zhǎng)9%，體重增加33%。Rohmah 等（2022）研究發(fā)現(xiàn)，飼料添加300 mg/kg白藜蘆醇可促進(jìn)鯉魚生長(zhǎng)， 顯著增加末均重和增重量，顯著降低飼料系數(shù)。 Valenzano 等（2006）發(fā)現(xiàn)， 在綠松石魚飼料中添加白藜蘆醇對(duì)生長(zhǎng)沒有顯著影響。趙志祥等（2018）發(fā)現(xiàn)，在基礎(chǔ)飼料中添加0.025%、0.05%和0.1%的白藜蘆醇顯著降低了吉富羅非魚的WGR、SGR 和FCR。 本試驗(yàn)結(jié)果表明， 飼料添加150、300 mg/kg 白藜蘆醇對(duì)芙蓉鯉鯽的生長(zhǎng)性能無顯著影響， 與Valenzano 等（2006）研究結(jié)果相似。綜上，關(guān)于白藜蘆醇對(duì)魚類生長(zhǎng)性能的影響可能與動(dòng)物品種、 白藜蘆醇添加水平、魚類生長(zhǎng)階段等有關(guān)，且水產(chǎn)動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育也與周圍環(huán)境、飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平、水溫及水質(zhì)等因素息息相關(guān)，具體原因尚有待進(jìn)一步探究。

本試驗(yàn)結(jié)果表明， 飼料添加150、300 mg/kg白藜蘆醇可顯著降低芙蓉鯉鯽的肝體比和全魚粗脂肪含量， 添加300 mg/kg 白藜蘆醇可顯著降低其肝臟粗脂肪含量， 與在團(tuán)頭魴 （閆亞楠等，2017）、虹鱒魚（Torno 等，2019）等水產(chǎn)動(dòng)物上的研究結(jié)果相似。 Wu 等（2022）也研究報(bào)道，白藜蘆醇可通過促進(jìn)脂肪酸β 氧化，抑制脂肪酸及脂肪合成從而減少肝臟脂肪聚集。 這說明水產(chǎn)飼料中白藜蘆醇的適宜添加能調(diào)控機(jī)體的脂肪代謝、減少脂肪在機(jī)體和肝臟中過度沉積。

3.2 白藜蘆醇對(duì)芙蓉鯉鯽肌肉質(zhì)構(gòu)特性及其理化指標(biāo)的影響 質(zhì)構(gòu)特性是評(píng)價(jià)魚肉品質(zhì)高低的重要指標(biāo)，主要包括硬度、彈性、黏附性、黏性、內(nèi)聚性、咀嚼性和膠黏性等，反映肉制品的物理性質(zhì)和組織結(jié)構(gòu)（Rodrigues 等，2020），其中硬度、彈性和咀嚼性是影響魚肉品質(zhì)的主要因素。 硬度的變化可能與水分含量（郝紅濤等，2009）、蛋白質(zhì)變性有關(guān)（陳瑤君等，2022）。 而咀嚼性與硬度、內(nèi)聚性和彈性緊密相關(guān) （Jannat 等，2019）。 韋玲靜等（2020）已證實(shí)，肌肉的硬度和咀嚼性越大，肌肉更結(jié)實(shí)，口感更有嚼勁。肌肉的內(nèi)聚性可用于反映肌肉細(xì)胞組織間的結(jié)合力大小。本試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，飼料添加150 mg/kg 白藜蘆醇可顯著提高芙蓉鯉鯽肌肉咀嚼性和內(nèi)聚性， 飼料添加300 mg/kg 白藜蘆醇顯著降低肌肉黏性。 這說明白藜蘆醇能增強(qiáng)芙蓉鯉鯽肌肉細(xì)胞間的結(jié)合力， 使肌肉更加緊密結(jié)實(shí)，口感更有嚼勁，且對(duì)肌肉的硬度、彈性不會(huì)產(chǎn)生負(fù)面影響，可改善芙蓉鯉鯽的肌肉質(zhì)構(gòu)特性。

當(dāng)魚類受到內(nèi)源性或外源性刺激時(shí)， 會(huì)產(chǎn)生大量的自由基，引起機(jī)體脂類、蛋白質(zhì)、和DNA 的氧化，導(dǎo)致肉品質(zhì)下降（儲(chǔ)蓄等，2021）。 魚肉組織中含有大量蛋白質(zhì)，易被活性氧（ROS）攻擊從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)發(fā)生氧化， 其氧化程度與羰基化合物的形成和巰基基團(tuán)的丟失密切相關(guān) （李慧芝等，2020）。巰基作為肌肉蛋白質(zhì)中最具反應(yīng)活性的功能性基團(tuán)， 對(duì)于維持穩(wěn)定的蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)至關(guān)重要，其含量越低，蛋白質(zhì)氧化越嚴(yán)重，抗氧化作用越弱（Van 等，2003）。Ca2+-ATP 酶的活性可反映肌原纖維蛋白分子的完整性，其活性越高，蛋白質(zhì)變性程度越低，而巰基的氧化會(huì)導(dǎo)致Ca2+-ATP 酶活性降低（Kong 等，2013）。 白藜蘆醇作為核因子E2 相關(guān)因子2（Nrf2）的激活劑，可通過Nrf2 信號(hào)通路調(diào)節(jié)其下游SOD、谷氨酸半胱氨酸連接酶等抗氧化基因的轉(zhuǎn)錄，抑制機(jī)體的氧化應(yīng)激（Csiszar等，2015）。 本試驗(yàn)中添加150 mg/kg 白藜蘆醇可顯著提高肌肉中的巰基含量、T-AOC 和Ca2+-ATP酶活性， 這說明白藜蘆醇提高了肌肉的抗氧化能力、減少了巰基的暴露，使芙蓉鯉鯽肌肉的蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)更加穩(wěn)定， 能一定程度地預(yù)防肌肉中蛋白質(zhì)的變性，防止蛋白質(zhì)氧化。

4 結(jié)論

在本試驗(yàn)條件下， 飼料添加白藜蘆醇對(duì)芙蓉鯉鯽生長(zhǎng)性能無顯著影響， 但添加150 mg/kg 白藜蘆醇可減少芙蓉鯉鯽體內(nèi)脂肪沉積， 并提高肌肉抗氧化能力，改善肌肉質(zhì)構(gòu)特性。