2022—2023年新冠疫情期間及疫情后手足口病流行病學及分型分析

肖雪 梁妤婷 古銳 李莉 陳娟 鐘家禹

1 廣州天愛兒科專科門診部，廣州 510630；2 佛山南海天愛普通專科門診部，佛山528299；3廣州醫科大學附屬廣州市婦女兒童醫療中心，廣州 510120

手足口病（hand， foot and mouth disease，HFMD）是腸道病毒（enterovirus，EV）引起的常見小兒急性傳染病之一，多發生于5 歲以下的嬰幼兒，臨床癥狀以手掌、腳掌、口腔黏膜上發生水皰、發燒、嘔吐為特征的一種病毒性皮膚病［1］。2008 年暴發時HFMD 病原主要以腸道病毒71 型（enterovirus 71，EV71）、柯薩奇病毒 A 組 16 型（Coxsaekievirus group A 16，CA16）為主要病原［2］，隨后在2013 年前后HFMD 的病原譜逐漸發生改變，非EV71 非CA16 腸道病毒成為HFMD 的主要病原體［3-5］，其中以CA6 為HFMD 的主要流行病原體［6-7］。HFMD 從2008 年暴發以來，10多年來持續流行，也說明了HFMD的病原譜是在不斷變化，需要長期監測與跟蹤。

2020 年，新冠病毒突然暴發，改變了人們的生活方式，戴口罩，減少了傳染病的流行。為了解新冠疫情期間及疫情后廣佛地區的HFMD 病原感染情況，我們選取了新冠疫情期間及疫情后的兩年進行對比，以分析廣佛地區EV 的感染情況。

資料與方法

1.一般資料

2022 年1 月至2023 年8 月，采集到廣州天愛兒科專科門診部和佛山南海天愛普通專科門診部就診的疑似HFMD患者標本共659 份，其中2022 年362 份，2023 年1—8 月297份；標本大部份是咽拭子和肛拭子，小部份是皰疹液等。

2.方法

2.1.病原學熒光逆轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）方法檢測 2022 年1 月至2023 年8 月門診收集659 份標本都外送到廣州金域檢測公司同時進行EV 通用型、EV71、CA16 熒光PCR 檢測；檢測試劑是金域公司的EV71、CA16 和EV 通用型三重熒光PCR 試劑盒，結果按說明書進行判斷。

2.2.EV 型別5'非編碼區（UTR）的引物設計與擴增 在對熒光PCR 檢測結果為EV71 和CA16 病毒陰性而EV 通用型為陽性的標本，設計了UTR合成兩對引物，引物參考之前的文章［8］，提取病毒RNA 進行RT-PCR，電泳片段符合預期大小的PCR產物送上海英駿生物技術有限公司進行序列測定，根據UTR基因核苷酸序列的同源性進行型別鑒定。

結果

1.2022年HFMD病原體檢出情況

2020 年新冠病毒突然暴發后，EV 陽性率明顯下降，2022 年同時進行EV 通用型、EV71、CA16 檢測的標本有362份，總陽性47份，陽性率為12.98%，EV71全年沒有檢測到，CA16病毒陽性率為1.38%（5/362），CA16僅在4—7月份檢測到，且檢出率不高。非EV71非CA16的EV全年陽性率為11.60%（42/362）。全年檢出率較高在5—7 月份，最高檢出率在6月份，為22.22%。見表1。

2.2023年1—8月HFMD病原體檢出情況

2023年是新冠病毒全國放開管控的第一年，EV 陽性明顯增多，2023 年1—8 月同時進行EV 通用型、EV71、CA16 3種病毒檢測的手足口病標本有297份，總陽性100份，陽性率為33.67%，1—8 月沒有檢出EV71，CA16 的檢出率為2.36%（7/297），非EV71 非CA16 的EV 共檢測出93 份，陽性率為31.31%（93/297），2023 年6、7 月份維持于較高的陽性率。2023年1—8月各月同時檢測3種病毒情況見表1。

3.非EV71非CA16的EV型別擴增與分析

我們選取了熒光PCR檢測結果中的EV71和CA16是陰性而EV 通用型為陽性的部份標本提取RNA，選取2022 年標本26份、2023年標本38份，提取RNA進行RT-PCR，對電泳片段符合預期大小的PCR產物送上海英駿生物技術有限公司測序，2022 年標本成功測序20 份，可分型為18 份，2023年成功測序31份，可分型為28份。序列用美國國家生物技術信息中心（NCBI）的BLAST 程序進行比較后，確定序列屬于EV 型別，各序列屬于病原譜如表2。在2022—2023 年中檢出的非EV71 非CA16 的EV 有9 種，分別為：CA6、CA10、CA4、CA2、CA8、柯薩奇病毒B 組5 型（CB5）、CB2、CB3、埃可病毒30 型（E30）。其中CA6 在非EV71 非CA16 的EV 中占主要病原，檢出率為27.45%，第二位是CA10，檢出率為15.69%，這兩種病毒占到非EV71 非CA16的EV的43.14%。各種型別的EV檢出情況見表2。

討論

HFMD 在我國從2008 年大規模暴發以來，連續多年在我國尤其是華南地區普遍流行，HFMD是一種對5歲以下兒童具有嚴重危害性的傳染病，2008 年已將HFMD 納入國家法定傳染病丙類傳染病。2020年，新冠病毒的突然暴發，導致管控措施的出現：如戴口罩、城市局部封閉，同時限制人口流動，改變了人們的生活方式，2022 年底才放開疫情管控。為了解新冠疫情期間及放開后廣州地區的HFMD 病原感染情況，我們選取了新冠疫情期間及新冠疫情期放開后這段時間進行對比，分析廣州和佛山地區手足口病的感染情況。

2022 年是新冠病毒暴發的第3 年，也是疫情管控的最后一年，2022年上半年廣佛地區疫情管控相對較松的，下半年從國慶節后收緊直到11 月底放開，12 月份大規模感染新冠病毒，反映在HFMD 病原體流行特征為：上半年相對有流行，下半年流行明顯下降。2022 年全年我們門診HFMD 的總陽性檢出率為12.98%（47/362），2022 年全年沒有檢出EV71，CA16 檢出率也較低，僅在4—7 月有檢出，在同時進行3 種病毒檢測標本中，非EV71 非CA16 的EV，除12 月外全年11 個月都有檢出，因為12 月是疫情放開的第一個月，很多人感染了新冠病毒，12月份沒有檢出EV，5—7月是EV檢出較高的月份，其中全年最高檢出率在6月份，為22.22%（8/36）。2023 年是新冠疫情放開的第一年，在1—4 月，EV的檢出率不算高，而到了5 月份，EV 的檢出率突然增加，到了8 月份又下降明顯，2023 年1—8 月的檢出率為33.67%，最高檢出率為6月，為54.55%。2023年廣佛地區的EV檢出在5—7 月陽性率有一個突然上升的趨勢，增加明顯，而到8 月份又下降明顯。2022 年的HFMD 流行特征與前兩年我們收集的數據（2020、2021）有些不一樣［9］，2022 年因為下半年的管控與放開，2022年下半年HFMD并沒有明顯的流行，與2020年上半年管控相似，而在2021年HFMD 還是存在兩個明顯的流行時期，到了2023 年，前4 月EV 并沒有明顯流行，可能是人們剛剛感染了新冠病毒，而到了5 月份后，EV感染突然開始上升，到了8月份又比7月份下降明顯。新冠疫情結束后的2023 年比疫情期間的2022 年EV 陽性率高，今后的EV 感染趨勢是否存在與2019 年之前那樣存在夏秋兩季流行，有待觀察。

為了解2022—2023年EV 中除CA16、EV71外的具體哪些病毒流行，我們選取了熒光PCR 檢測結果為EV71 和CA16 是陰性而EV 通用型為陽性的部份標本直接提取RNA，設計了EV 5'UTR 的引物進行PCR 擴增，之后進行測序及序列分析。2022—2023 年共選取了64 份標本進行PCR 擴增測序分析，有效分析了51 份序列，可以分型的有46 份，而5 份不能確定型別的，占9.80%，本次非EV71 非CA16 病毒確定了9 種病毒型別，這些型別存在于我們之前的統計數據中［8-9］，HFMD 經過10 多年的演變，感染型別趨于多樣化［10］，這次我們分析的序列中分型的型別相對偏少，這可能與我們擴增的標本數量、分析的序列偏少有關。我們確定的型別中占主要的是腸道病毒A 組，為CA6、CA10、B5 等，其中CA6 和CA10 是最主要的兩種病毒，這與國內別的地區流行趨勢基本一致［11-13］，CA6 和CA10 已成為全球HFMD流行的主要病原［14-16］。

2022—2023年的檢測標本中沒有檢測出EV71感染，這與我國多年來推行EV71 疫苗相關［17］，而CA16 感染率也是較低，非EV71非CA16的病毒占主要，這種感染狀況在全國持續多年［3-4，18］，非EV71 非CA16 的EV 中存在較多型別，型別復雜，現在主要以CA6、CA10為主，CA6從2013年前后在我國開始流行［7，19］，現在已成為HFMD 的主要病原體，而近年來柯薩奇病毒B 組型別檢出率也相對較高，其中以CB5 為多，同時埃可病毒型別也檢出較多［13］，在我們測序中，有一定比例的非EV71 非CA16 的EV 難以定型，可能還有別的型別沒有區分，這表明HFMD 感染型別較多，也側面說明我國HFMD 這10 多年長期一直流行，可能與EV 型別多樣化相關。因此，在監測EV71 和CA16 這兩種主要型別EV 的同時，需要加強對非EV71 非CA16 的EV 的監測及分子流行病學研究。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

作者貢獻聲明 肖雪：構建思路，論文寫作，設計試驗；梁妤婷、古銳：標本采集，數據收集，整理資料；李莉、陳娟：標本采集，實施試驗，分析數據；鐘家禹：審核論文，修改論文