非洲豬瘟疫苗研究現(xiàn)狀

金貴兵 楊 丁 金仕強(qiáng) 鄒仲航 牟燕平 古從偉 楊 倩*

(1 宜賓市敘州區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，四川宜賓 644600；2 宜賓市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，四川宜賓 644000；3 西南醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，四川瀘州 646000；）

1921年，非洲豬瘟病毒（ASFV）首次在肯尼亞被報(bào)道，隨后經(jīng)西歐、東歐傳入東亞。2018年，非洲豬瘟病毒蔓延到我國，給我國生豬養(yǎng)殖業(yè)造成了不可估量的損失[1]。從發(fā)現(xiàn)至今，非洲豬瘟已有上百年的流行歷史，為了根除該病毒，人們采用了諸如生物防控、撲殺、隔離等策略，雖然取得了階段性的成功，但在缺乏非洲豬瘟病毒商業(yè)化疫苗的情況下，還是難以控制其蔓延和反復(fù)發(fā)生[2]。疫苗接種一直被認(rèn)為是控制傳染性疾病最有效的方法，通過疫苗接種得到徹底根除的傳染病有天花、牛瘟等[3]。20世紀(jì)我國研制的脊髓灰質(zhì)炎“糖丸”口服減毒活疫苗，就成功控制和消滅了脊髓灰質(zhì)炎在我國的流行[4,5]。

自20世紀(jì)60年代以來，全世界范圍就開始了非洲豬瘟病毒疫苗的開發(fā)與研究，但研究成果一般都處于實(shí)驗(yàn)室階段，距離實(shí)際應(yīng)用還有一定差距。導(dǎo)致非洲豬瘟病毒疫苗開發(fā)滯后的主要因素在于非洲豬瘟病毒復(fù)雜的基因組結(jié)構(gòu)和多變的基因型。非洲豬瘟病毒基因組是一個(gè)線性且共價(jià)封閉的雙鏈DNA 分子，長度在170～190 kbp 之間，可編碼大量的蛋白質(zhì)參與逃避宿主的防御系統(tǒng)[6]。而且非洲豬瘟病毒基因組結(jié)構(gòu)也不夠穩(wěn)定，常因病毒間的基因重組和基因突變發(fā)生遺傳改變[7]，這無疑加大了非洲豬瘟病毒疫苗的研究難度。截至目前，根據(jù)B646L（p72）基因末端的核苷酸差異，已鑒定出24 種非洲豬瘟病毒的基因型[8]。這24 種基因型在非洲均有流行報(bào)道，且主要分布在東非和南非。目前大多數(shù)試驗(yàn)階段研究的非洲豬瘟病毒疫苗主要針對(duì)基因Ⅰ型（歐洲）和基因Ⅱ型（亞洲）流行毒株。從部分研究結(jié)果來看，多種疫苗僅對(duì)同源毒株感染具有保護(hù)作用，因此，不太可能針對(duì)其他系統(tǒng)發(fā)育差異較大的毒株提供交叉保護(hù)，這也阻礙了疫苗的進(jìn)一步開發(fā)與利用。此外，疫苗開發(fā)通常還受到接種策略、抗原免疫原性、毒株類型、免疫劑量、攻毒劑量、接種動(dòng)物個(gè)體差異、接種途徑等多種因素影響。因此，非洲豬瘟病毒疫苗的開發(fā)還需要大量的研究來解決以上各種問題。

雖然現(xiàn)在的研究已證實(shí)多種類型的疫苗可以對(duì)感染非洲豬瘟病毒后提供強(qiáng)保護(hù)，但對(duì)其保護(hù)性免疫的了解和定義還十分有限。本文對(duì)現(xiàn)有不同類型的非洲豬瘟病毒疫苗研究現(xiàn)狀進(jìn)行初步的概述，以期更好地了解該病毒，為非洲豬瘟的預(yù)防、控制和根除提供參考。

1 非洲豬瘟病毒滅活疫苗

一直以來，滅活疫苗都是一種較為安全、廉價(jià)且成熟的疫苗。因?yàn)樵跍缁钸^程中，各類物理或化學(xué)作用有效消除了病毒向毒性表型的逆轉(zhuǎn)，使病毒不再具備潛在傳染能力。雖然滅活疫苗具有較高的安全性，但過去的研究表示，針對(duì)非洲豬瘟病毒的滅活疫苗無法提供很好的免疫保護(hù)，即使聯(lián)合了刺激細(xì)胞免疫的佐劑[9]。非洲豬瘟病毒滅活疫苗雖然在某些情況下能夠誘導(dǎo)體液免疫反應(yīng)，但產(chǎn)生的抗體在感染中很難實(shí)現(xiàn)有效的病毒中和[10]，而且非洲豬瘟病毒滅活疫苗通常不會(huì)引發(fā)完整的細(xì)胞免疫反應(yīng)。因此，滅活疫苗可能不是開發(fā)有效非洲豬瘟病毒疫苗的可行策略。

2 非洲豬瘟病毒亞單位疫苗

亞單位疫苗是一類不含有核酸的重組蛋白或合成肽疫苗，這些蛋白和肽類通常是能夠誘導(dǎo)保護(hù)性免疫反應(yīng)的特定病毒表位。此類疫苗的關(guān)鍵是篩選能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生中和抗體的抗原或抗原表位[10]，旨在誘導(dǎo)中和血清學(xué)反應(yīng)。非洲豬瘟病毒編碼多達(dá)170 多種蛋白質(zhì)，其中包括結(jié)構(gòu)蛋白和宿主免疫調(diào)節(jié)蛋白，因此，在篩選免疫性較好的抗原蛋白上存在一定難度。目前已經(jīng)評(píng)估了幾種非洲豬瘟病毒抗原的保護(hù)潛力，包括結(jié)構(gòu)蛋白p54、p30、p72 和血凝素CD2v 等。第一個(gè)被證明對(duì)非洲豬瘟病毒攻擊具有保護(hù)作用的重組病毒蛋白是桿狀病毒表達(dá)的非洲豬瘟病毒血凝素（HA）蛋白--CD2v，其產(chǎn)生的中和抗體能抑制病毒對(duì)宿主血細(xì)胞的吸附和單核細(xì)胞的侵染，可部分抵御同源毒株的感染[11,12]。p54、p30 和p72是非洲豬瘟病毒的結(jié)構(gòu)蛋白，均能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體，其中針對(duì)p72 和p54 的抗體可以阻斷非洲豬瘟病毒的吸附，針對(duì)p30 的抗體可以阻斷病毒的內(nèi)化[13]。桿狀病毒中表達(dá)的重組p54 和p30 蛋白單獨(dú)使用時(shí)，不能保護(hù)免疫豬免受非洲豬瘟病毒的攻擊，然而二者同時(shí)使用能讓50%的免疫豬抵御非洲豬瘟病毒強(qiáng)毒株E75 的致死性攻擊，而且病毒血癥癥狀出現(xiàn)的時(shí)間延遲，癥狀也有所減輕[14]。此外，用桿狀病毒表達(dá)的p54/p30 融合蛋白進(jìn)行免疫，也減輕了非洲豬瘟病毒血癥癥狀，并保護(hù)接受免疫的豬免受E75 的攻擊[15]。

Neilan 等[16]采用桿狀病毒表達(dá)的p54、p30、p72 和p22 蛋白組合免疫豬時(shí)，盡管檢測到高滴度的ASFV 特異性中和抗體，但卻不能抵御毒株P(guān)retoriuskop/96/4（Pr4）的攻擊，說明在非洲豬瘟病毒感染中，抗體介導(dǎo)的免疫反應(yīng)似乎不能提供足夠的免疫保護(hù)。Oura 等[17]的研究證明細(xì)胞毒性T 淋巴細(xì)胞（CTL）介導(dǎo)的細(xì)胞免疫反應(yīng)在抵御非洲豬瘟病毒感染方面發(fā)揮著至關(guān)重要的作用，表明除了中和抗體外，還需要能夠刺激CTL 的疫苗來抵御非洲豬瘟病毒的感染。

3 非洲豬瘟病毒核酸疫苗

核酸疫苗免疫主要是將DNA 或信使RNA（mRNA）序列遞送進(jìn)宿主細(xì)胞內(nèi)生成抗原蛋白，模擬疾病抗原刺激免疫應(yīng)答。核酸疫苗可產(chǎn)生具有翻譯后修飾天然構(gòu)象的內(nèi)源性蛋白，并通過MHC Ⅰ類和Ⅱ類復(fù)合物進(jìn)行抗原遞呈，從而激活CD8＋T 和CD4＋T 細(xì)胞。因此，與基于抗原蛋白的亞單位疫苗相比，核酸疫苗能夠誘導(dǎo)CTL免疫反應(yīng)。

2011年，Argilaguet 等[18]構(gòu)建了表達(dá)p54/p30 融合蛋白的質(zhì)粒DNA（pCMV-PQ），pCMV-PQ 不能在豬體內(nèi)誘導(dǎo)可檢測的免疫反應(yīng)，但在小鼠體內(nèi)可以。為了改善這一狀況，他們將編碼豬白細(xì)胞抗原Ⅱ的特異性抗體單鏈可變區(qū)與pCMV-PQ 融合構(gòu)建pCMV-APCH1PQ。然而，pCMV-APCH1PQ 雖然誘導(dǎo)了廣泛的免疫應(yīng)答，但卻對(duì)非洲豬瘟病毒的攻擊無效，而且還加重免疫豬的病毒血癥癥狀。2012年，Argilaguet 等[19]又構(gòu)建了表達(dá)CD2v/p54/p30 融合蛋白的質(zhì)粒DNA（pCMV-sHAPQ），發(fā)現(xiàn)pCMV-sHAPQ 能夠在體內(nèi)誘導(dǎo)特異性的B 細(xì)胞和T 細(xì)胞反應(yīng)，但無法提供免疫保護(hù)。此后，繼續(xù)在pCMV-sHAPQ 質(zhì)粒的基礎(chǔ)上融合泛素蛋白，構(gòu)建了pCMV-UbsHAPQ 質(zhì)粒，用于靶向體內(nèi)Ⅰ類抗原呈遞。pCMV-UbsHAPQ 誘導(dǎo)了強(qiáng)烈的CTL 反應(yīng)，在缺乏特異性抗體的情況下，為超過50%的免疫豬提供了保護(hù)，文章作者推測這種保護(hù)作用與血液中大量CD2v 特異性CD8+T 細(xì)胞相關(guān)。

為了篩選更多參與ASFV 保護(hù)性免疫的T 細(xì)胞靶點(diǎn)抗原，2014年，Lacasta 等[20]基于ASFV 毒株Ba71v，構(gòu)建了與泛素融合的DNA 表達(dá)文庫（ASFVUblib），ASFVUblib 激發(fā)了大量ASFV 特異性CD8＋T 細(xì)胞，CD8＋T 細(xì)胞在缺乏特異性抗體的情況下，保護(hù)了60%的免疫豬免受毒株E75 的致命攻擊。該研究進(jìn)一步支持了CTL 細(xì)胞反應(yīng)在抗非洲豬瘟病毒中的重要性，同時(shí)揭示了多種具有潛在誘導(dǎo)T 細(xì)胞反應(yīng)能力的非洲豬瘟病毒抗原的存在。因此，在隨后的研究中，該實(shí)驗(yàn)室研究者們繼續(xù)篩選和鑒定不同基因型非洲豬瘟病毒的T 細(xì)胞靶點(diǎn)抗原[21,22]。

4 非洲豬瘟病毒重組病毒載體疫苗

除了核酸疫苗，病毒載體疫苗也能誘導(dǎo)體液免疫和細(xì)胞免疫。通過將目標(biāo)病毒的免疫原基因?qū)胼d體病毒基因組中實(shí)現(xiàn)。此外，病毒載體疫苗可以很好地區(qū)分感染動(dòng)物和接種動(dòng)物（DIVA），即病毒載體疫苗自身編碼的免疫原可作為疫苗標(biāo)記。

2013年，Argilaguet 等[23]在BacMam 載體（一種基于桿狀病毒的載體，具有轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)靶基因的能力）上導(dǎo)入非洲豬瘟病毒的CD2v/p54/p30 融合基因構(gòu)建了BacMam-sHAPQ 病毒載體疫苗，Bac-Mam-sHAPQ 可保護(hù)2/3 的豬免受同源亞致死性毒株的攻擊，免疫豬的血清中沒有檢測到特異性抗體，保護(hù)作用可能與病毒特異性T 細(xì)胞反應(yīng)相關(guān)。

通過“雞尾酒”免疫方式，人們?cè)u(píng)估了病毒載體遞送的多種非洲豬瘟病毒抗原的免疫原性。其中，腺病毒載體遞送的非洲豬瘟病毒抗原混合物（p32、p54、pp62 和p72 抗原，以及A151R、B119L、B602L、EP402RΔPRR、B438L、K205R 和A104R 抗原），均誘導(dǎo)了特異性抗體和細(xì)胞免疫反應(yīng)[24,25]。改良安卡拉痘病毒載體（MVA）遞送的p72、CD2v 和C- 型凝集素抗原雖然沒有誘導(dǎo)特異性抗體產(chǎn)生，但卻檢測到特異性T細(xì)胞反應(yīng)[26]。隨后Lokhandwala 等[27]將上述非洲豬瘟病毒腺病毒載體疫苗重新組合，測試了其攻毒后的保護(hù)效果。在與佐劑BioMize 的組合免疫下，不僅沒有提高免疫保護(hù)率，還出現(xiàn)了疾病加重的現(xiàn)象。而與佐劑ZTS-01 組合免疫有較好的存活率，但沒有很好控制臨床癥狀?？傊瑳]有一種抗原產(chǎn)生了具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的保護(hù)作用。

為了增強(qiáng)免疫保護(hù)效果，研究者們又采用了初次免疫和加強(qiáng)免疫的接種策略。Goatley 等[28]克隆了OURT88/3 毒株的B602L、p72、p30、p54、E199L、EP153R、F317L 和MGF505-5R 基因，導(dǎo)入腺病毒載體后進(jìn)行初次免疫，隨后又將以上抗原基因?qū)隡VA載體進(jìn)行加強(qiáng)免疫，最后獲得100%的同源攻毒保護(hù)。

5 非洲豬瘟病毒減毒活疫苗

減毒活疫苗（live-attenuated vaccines,LAVs）大致可分為天然減毒活疫苗、傳統(tǒng)人工減毒活疫苗和人工基因缺失減毒活疫苗。相比于亞單位疫苗和核酸疫苗只能提供部分同源保護(hù)，非洲豬瘟病毒減毒活疫苗可以提供完全同源和部分異源感染保護(hù)[29]。

5.1 天然減毒活疫苗

天然減毒活疫苗是從自然界中分離到的毒性降低或無紅細(xì)胞吸附（non-HAD）能力的自然減毒毒株。NH/P68 和OURT88/3 是非洲豬瘟病毒的2 個(gè)天然弱毒株，由葡萄牙科學(xué)家分離得到，屬于non-HAD 基因Ⅰ型。早期的研究發(fā)現(xiàn)，NH/P68 接種豬主要表現(xiàn)為非洲豬瘟慢性病變或是無癥狀反應(yīng)，且這些無癥狀的免疫豬能100%抵抗毒株L60 和Arm07 的攻擊[30]，期間所產(chǎn)生的免疫保護(hù)與NK 細(xì)胞的活性呈正相關(guān)[31]。King 等[32]用OURT88/3 對(duì)歐洲家豬進(jìn)行初次免疫，隨后用同基因型的OURT88/1 加強(qiáng)免疫，發(fā)現(xiàn)85.7%和100%的免疫豬可以免受非洲株Benin 97/1 和Uganda 1965 的攻擊，其中分別有超過78%和50%的豬，在受到Benin 97/1和Uganda 1965 攻擊時(shí)，沒有表現(xiàn)出任何病毒血癥的跡象。Mulumba 等[33]用OURT88/3 弱毒株免疫豬后，50%的免疫豬可以抵御OURT88/1（基因型Ⅰ）的攻擊，而且存活下來的免疫豬還能繼續(xù)抵御DRC085/10（基因型Ⅰ）的攻擊。隨后，又有研究者比較了不同劑量和不同接種途徑接種OURT88/3 后的保護(hù)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)鼻內(nèi)接種（100%）比肌肉注射（50%～66%）顯示出更高的保護(hù)率[34]。

2017年，人們?cè)诶摼S亞的野豬身上又分離到1 株non-HAD 基因Ⅱ型ASFV 天然弱毒株，命名為Lv17/WB/Rie1[35]。在對(duì)抗強(qiáng)毒株Arm07 的致死性感染時(shí)，Lv17/WB/Rie1 對(duì)野豬的口服免疫保護(hù)率達(dá)到了92%[36]。2021年，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所報(bào)道了國內(nèi)non-HAD 低致死率自然變異株，雖然毒力明顯降低，但仍然具有很強(qiáng)的水平傳播能力[37]?？偟膩碚f，天然弱毒株不太可能直接作為LAVs 使用，由于殘余毒力，部分豬在一定劑量下接種弱毒株后會(huì)出現(xiàn)副反應(yīng)。通過基因重組技術(shù)進(jìn)一步刪除弱毒株的相關(guān)毒力基因可能會(huì)提高其作為LAVs 的安全性。

5.2 傳統(tǒng)人工減毒活疫苗

傳統(tǒng)人工減毒活疫苗是病毒在體外細(xì)胞系或通過非宿主動(dòng)物連續(xù)傳代而形成的。20世紀(jì)60年代，研究者們就通過細(xì)胞傳代的方式進(jìn)行了ASF 減毒活疫苗的研制。早期的這些研究已經(jīng)證實(shí)非洲豬瘟病毒可以在豬骨髓細(xì)胞、Vero 細(xì)胞、豬腎細(xì)胞（PK-2a）等傳代細(xì)胞系上繁殖，而且連續(xù)傳代后的毒株接種豬時(shí)，臨床癥狀大大減輕并能不同程度抵御強(qiáng)毒株的攻擊[38]。1960年，西班牙和葡萄牙大范圍使用非洲豬瘟病毒弱毒活疫苗（豬骨髓細(xì)胞上連續(xù)傳代所得）進(jìn)行田間試驗(yàn)，結(jié)果導(dǎo)致了免疫失敗事件，動(dòng)物出現(xiàn)肺炎、流產(chǎn)和死亡等不良反應(yīng)[39]。這也表明非洲豬瘟病毒細(xì)胞傳代致弱毒株雖然是疫苗研究的一個(gè)重要方向，但是依然存在很多不確定性，其安全性和有效性還很難得到保障。

通過一系列研究發(fā)現(xiàn)，增加傳代次數(shù)雖然降低了病毒毒力，但也容易導(dǎo)致病毒的免疫原性降低，而且受不同毒株和細(xì)胞系的影響，也很難摸索到合適的傳代次數(shù)進(jìn)行后續(xù)的動(dòng)物免疫試驗(yàn)，因而非洲豬瘟病毒細(xì)胞傳代致弱毒株的研制具有一定的盲目性和隨機(jī)性，很難預(yù)判其攻毒后的免疫保護(hù)效果。2015年，Krug 等[40]將非洲豬瘟病毒格魯吉亞株（ASFV-G）在Vero 細(xì)胞中連續(xù)傳代110 次，發(fā)現(xiàn)毒力完全消失，接種家豬后無任何臨床反應(yīng)，但攻毒后卻發(fā)現(xiàn)沒有任何免疫保護(hù)作用。同樣，Balysheva 等[41]將Stavropol 01/08 強(qiáng)毒株分別在A4C2細(xì)胞、CV 細(xì)胞和豬腎細(xì)胞（PSGK-60）上連續(xù)傳代，結(jié)果發(fā)現(xiàn)A4C2 細(xì)胞的第14 代毒和PSGK-60 細(xì)胞的第20 代毒毒力依然很強(qiáng)，接種豬全部死亡。A4C2 細(xì)胞的第24/33 代毒和CV 細(xì)胞的第20 代毒毒力明細(xì)減弱，接種豬全部存活，但接種后的豬無法抵御強(qiáng)毒株的攻擊。

比起疫苗研制，細(xì)胞傳代致弱毒株在基因組功能和致病機(jī)理研究等方面發(fā)揮了更大的作用。Krug 等[40]通過對(duì)ASFV-G 細(xì)胞傳代致弱毒株突變基因區(qū)域進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)ASFV-G 在Vero 細(xì)胞上連續(xù)傳60 代后，其I177L基因第42 位脯氨酸變成絲氨酸。傳至110 代時(shí)，M1249L 基因第471 位的Arg 變成Gln，CP2475L 基因第200 位的Glu 變成Gly。這不僅能很好地了解突變基因與病毒毒力和免疫原性的相關(guān)性，對(duì)基因缺失減毒活疫苗的研制也更具有指導(dǎo)意義。

5.3 人工基因缺失減毒活疫苗

人工基因缺失減毒活疫苗是通過敲除病毒的某些毒力基因而形成的。早期研究較多的與非洲豬瘟病毒毒力和感染宿主范圍相關(guān)基因有TK、MGF505、MGF360、CD2v（EP402R）、9GL（B119L）、NL（DP71L）等[42]。在這些基因中，TK 和9GL 可以通過調(diào)控宿主的蛋白去磷酸化酶1α 來阻止宿主細(xì)胞蛋白合成的關(guān)閉，TK 和9GL 基因缺失的非洲豬瘟病毒在豬巨噬細(xì)胞中無法正常復(fù)制[43,44]。MGF505/360 基因能抑制宿主I 型IFN 應(yīng)答，該類基因的缺失不僅會(huì)降低非洲豬瘟病毒的毒力，還能抑制其體外復(fù)制[45]。敲除這些基因不僅可以降低非洲豬瘟病毒的致病性，還能誘導(dǎo)針對(duì)同源非洲豬瘟病毒感染的保護(hù)性反應(yīng)[46,48]。

除了誘導(dǎo)同源保護(hù)外，非洲豬瘟病毒基因缺失減毒活疫苗還具有良好的免疫交叉保護(hù)。缺失CD2v 基因的非洲豬瘟病毒毒株BA71ΔCD2，不僅對(duì)親本株BA71 的致命攻擊具有保護(hù)作用，而且對(duì)異源毒株E75（基因Ⅰ型）和Georgia 2007/1（基因Ⅱ型）也具有100%保護(hù)作用，且大部分豬沒有表現(xiàn)出非洲豬瘟病毒感染癥狀，這也是基因缺失減毒活疫苗抵抗異源非洲豬瘟病毒毒株的首次報(bào)道[49]。在隨后的擴(kuò)展研究中，Lopez 等[50]繼續(xù)深入探究了BA71ΔCD2 的交叉免疫保護(hù)，采用106PFU 劑量的 BA71ΔCD2 免疫豬后，用毒株RSA/11/2017（基因XIX 型）和Ken06.Bus（基因Ⅸ型）進(jìn)行攻擊，分別有83.3%和33.3%的免疫豬存活。BA71ΔCD2 的加強(qiáng)免疫可以使抗Ken06.Bus 的保護(hù)率提高至50%，存活下來的豬有輕微的非洲豬瘟臨床癥狀。如果用BA71ΔCD2 進(jìn)行初次免疫，BA71 進(jìn)行加強(qiáng)免疫，則可獲得100%的抗Ken06.Bus 保護(hù)率，所有豬幾乎不表現(xiàn)非洲豬瘟的任何臨床癥狀。該研究結(jié)果證實(shí)，交叉保護(hù)可能是一種多因素現(xiàn)象，不僅取決于基因序列相似性。

雖然非洲豬瘟病毒基因缺失減毒活疫苗與其他類型的疫苗相比具有很好的免疫交叉保護(hù)，但非洲豬瘟病毒的基因修飾結(jié)果同樣不可預(yù)測。首先，不同非洲豬瘟病毒毒株即使缺失相同的基因，產(chǎn)生的致病性和誘導(dǎo)的免疫保護(hù)效果可能不同。例如，毒株BA71 缺失CD2v 基因后，毒力降低，并誘導(dǎo)了很好的免疫交叉保護(hù)。而同樣缺失了CD2v 基因的Georgia2010（基因Ⅱ型）致死性卻與親本無異[51]。毒株E70 缺失DP71L 基因后毒力明顯下降，所有接種動(dòng)物均未出現(xiàn)死亡。而毒株Malawi Lil-20/1（Mal）在缺失DP71L 基因后，致死率仍高達(dá)100%[52,53]。馬拉維毒株和格魯吉亞毒株在缺失TK 基因后均表現(xiàn)出減毒，但只有馬拉維毒株誘導(dǎo)了免疫豬的保護(hù)反應(yīng)[54,55]。其次，某些天然弱毒株在刪除特定毒力基因后，其免疫保護(hù)率會(huì)明顯降低。從OURT88/3 中刪除DP71L 和DP96R 基因后，毒力雖然減弱，但是保護(hù)效力降為原來的66%[56]。同樣，從NH/P68 中刪除A238L或是EP153R 基因后，無法再抵抗異源毒株Arm07 的攻擊[30]。此外，為了提高LAVs 的安全性，研究者試圖通過多重基因缺失來完全去除非洲豬瘟病毒的毒力。發(fā)現(xiàn)Georgia 2007 毒株除了缺失9GL 和UK 基因的ASFV-G-Δ9GL/ΔUK[48]毒株外，其他缺失多個(gè)基因毒株均不具備誘導(dǎo)保護(hù)性反應(yīng)的能力[57-59]。這些研究證實(shí)，基因缺失誘發(fā)的免疫保護(hù)在很大程度上受毒株特異性的影響。

2020年，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所以我國第1 株非洲豬瘟病毒分離株P(guān)ig/HLJ/2018 為骨架，利用DNA 同源重組技術(shù)，通過刪除7 種不同蛋白質(zhì)的基因片段構(gòu)建的非洲豬瘟病毒弱毒活疫苗HLJ/18-7GD，對(duì)家豬（包括懷孕母豬）具有最好的安全性和有效性[60]。該疫苗可能是目前國內(nèi)最具備實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用的疫苗。同年，Borca 等[61]通過刪除非洲豬瘟病毒Georgia 2007 毒株的一個(gè)未知基因I177L，構(gòu)建的ASFV-G-ΔI177L 可以100%保護(hù)家豬免受親本株感染，該疫苗既可以肌肉注射也可以經(jīng)口鼻給藥[62]，同時(shí)還開發(fā)了能夠大規(guī)模生產(chǎn)的衍生株ASFV-G-ΔI177L/ΔLVR，該衍生株具有同樣的免疫原特性和保護(hù)效力[63]。后續(xù)的試驗(yàn)還證明ASFV-G-ΔI177L 能抵抗越南強(qiáng)毒株TTKN/ASFV/DN/2019的致死攻擊[64]。于是，2022年，越南農(nóng)業(yè)和農(nóng)村發(fā)展部批準(zhǔn)了ASFV-G-ΔI177L 在越南的上市，但其實(shí)際應(yīng)用效果和安全穩(wěn)定性還有待長期觀察考證。

6 結(jié)語

綜上所述，疫苗接種是控制非洲豬瘟的一種有效策略。不同種類的疫苗存在其各自的優(yōu)勢，但也顯示出不足。滅活疫苗雖然具有制作簡單、安全性高等特點(diǎn)，但卻無法保護(hù)豬免受非洲豬瘟病毒的侵害。亞單位疫苗能夠激發(fā)宿主產(chǎn)生體液免疫，誘導(dǎo)產(chǎn)生中和抗體，但針對(duì)非洲豬瘟病毒感染產(chǎn)生的保護(hù)性免疫并不理想。多項(xiàng)研究指證細(xì)胞免疫，尤其是細(xì)胞毒性CD8+T 細(xì)胞，才是宿主抵抗非洲豬瘟病毒感染的關(guān)鍵。核酸疫苗和病毒載體疫苗的優(yōu)勢在于能夠很好地誘導(dǎo)體液免疫反應(yīng)和細(xì)胞免疫反應(yīng)，但試驗(yàn)階段呈現(xiàn)出的免疫保護(hù)還有待進(jìn)一步提高。從目前的研究來看，非洲豬瘟病毒重組減毒活疫苗免疫保護(hù)效果相對(duì)較好，但其也存在病毒返強(qiáng)、疫苗生物脫落、慢性感染等系列安全性問題。近期已有多個(gè)非洲豬瘟病毒弱毒疫苗獲得了專利認(rèn)證，并進(jìn)入臨床測試。這給非洲豬瘟商業(yè)化疫苗的誕生提供了希望，希望這些疫苗在經(jīng)過長期的臨床試驗(yàn)和優(yōu)化改良后能克服一系列安全和生產(chǎn)問題成功上市。