長鏈非編碼RNA LINC00958 在惡性腫瘤發生發展中的作用及作用機制研究進展

劉劍，侯凈，倪青

1 貴州醫科大學臨床醫學院，貴陽 550004；2 貴州省人民醫院乳腺外科

人類基因組被廣泛轉錄，除mRNA 參與編碼蛋白質外，絕大多數從人類基因組轉錄的RNA 都是非編碼RNA（ncRNA）。非編碼RNA 對生物的發育、遺傳及疾病的發生發展具有重要作用，可以通過多種生物學方式對癌癥施加影響及調控［1］。長鏈非編碼RNA（lncRNAs）屬于非編碼RNA 中的調控型ncRNA［2］，長度＞200 個核苷酸，一般不編碼蛋白質，通過與RNA、DNA 相互作用來調節基因表達，具有保守的二級結構。隨著轉錄組學測序的不斷深入，lncRNAs 的類型及功能不斷更新，其功能與亞細胞定位密切相關，可與蛋白質、DNA 及RNA 相互作用，通過多種機制（如染色質重塑，染色質相互作用，ceRNA 和天然反義轉錄物NAT）在不同層面（表觀遺傳學、轉錄調控及轉錄后調控等）影響基因的表達［3］。LncRNA LINC00958又稱膀胱癌相關轉錄本2（BLACAT2），位于人類染色體13p15.2上，在發生淋巴結轉移的膀胱癌細胞中顯著上調，降低其表達可以抑制相關RNA 過表達膀胱癌的淋巴結轉移，這證實了其對淋巴結轉移性膀胱癌的治療潛能［4］。隨著研究的深入，LINC00958 作為長鏈非編碼RNA 家族的一員，在多種癌癥中（甲狀腺乳頭狀癌、食管鱗癌、乳腺癌及子宮內膜癌）也被證實發揮作用。研究［5-6］顯示，LINC00958 作為一種內源性競爭性RNA（ceRNA），通過miRNA-mRNA 軸調控腫瘤細胞的惡性行為，參與腫瘤的糖酵解代謝，在促進腫瘤細胞的增殖、侵襲和遷移中起著至關重要的作用。現將lncRNAs LINC00958在惡性腫瘤發生發展中的作用及作用機制研究進展綜述如下，以期對LINC00958 參與的惡性腫瘤的臨床治療提供參考。

1 LINC00958在惡性腫瘤發生發展中的作用

LINC00958 是一種新型的lncRNA，近年來越來越受到關注，其在多種惡性腫瘤中表達異常，且與腫瘤患者的臨床病理分期以及生存有關。不同種類的腫瘤中LINC00958的表達水平與腫瘤的臨床病理特征存在差異，且LINC00958 的高表達可誘導腫瘤微血管及淋巴管生成，促進腫瘤代謝重編程，在促進腫瘤細胞的增殖、侵襲和遷移中起著至關重要的作用。

1.1 LINC00958 影響惡性腫瘤的臨床病理分期 LINC00958 的表達水平與惡性腫瘤患者的不良臨床特征密切相關。在腫瘤組織中LINC00958表達增高，其高表達往往提示更差的臨床分期及生存預后。對Kaplan-Meier生存曲線分析顯示，LINC00958可作為舌鱗狀細胞癌（OSCC）患者診斷和生存的獨立預測因子［7］。收集肺腺癌（LAD）患者的LAD 配對組織樣本及相應正常組織，在LAD 組織中LINC00958 的表達模式異常升高，分析發現LINC00958 表達上調LAD 患者的死亡風險［8］。研究［9-10］顯示，乳腺癌組織中的LINC00958表達水平顯著升高，并且在乳腺癌患者中晚期（Ⅲ～Ⅳ級）的表達高于早期階段（Ⅰ～Ⅱ級）。研究［11］發現，LINC00958的高表達在胃癌中與其TNM分期、淋巴結轉移和血管侵犯密切相關。LINC00958 在骨肉瘤組織中表達水平顯著提高，并且體內實驗研究證明過表達LINC00958導致浸潤分期上升和腫瘤轉移增加［12］。

1.2 LINC00958 影響惡性腫瘤的遠處轉移 LINC00958 的表達不僅與病理分級密切相關，而且與淋巴結轉移狀態相關，LINC00958 過表達促進膀胱癌相關的淋巴管生成和淋巴轉移，誘導遠處轉移導致早期死亡［13］。肝癌中高表達的LINC00958與腫瘤分化和微血管侵襲呈正相關［14］。有趣的是，LINC00958 作為宮頸癌組織中上調最高的lncRNA 之一，與總生存率相關，但與淋巴結的轉移無關，其對宮頸癌的調控在于促進血管生成［6］。LINC00958 在50 歲以上的子宮內膜癌患者中的表達量高于年輕患者，并且LINC00958 高表達與子宮內膜癌的臨床晚期、腫瘤分級高、血管浸潤和遠處轉移相關［15］。 同時體內實驗［16］證明，下調LINC00958可抑制腫瘤中的腫瘤微血管密度標志物CD34 和VEGFA，抑制裸鼠異種移植模型中的腫瘤血管生成。

1.3 LINC00958 影響惡性腫瘤細胞增殖、遷移及凋亡 研究［17］表明，在多種惡性腫瘤細胞中LINC00958 呈高表達，其表達水平與腫瘤細胞的增殖、侵襲、遷移能力呈正相關。LINC00958敲低后甲狀腺乳頭狀癌細胞的增殖、遷移受到抑制。LINC00958 可作為miRNA 海綿吸附體來抑制miR-627-5p RNA 與YBX5 的mRNA 結合，間接調節功能基因的表達，調節caspase-3 的活性及鈣黏蛋白轉錄及翻譯水平，促進腫瘤細胞生長、延緩凋亡、加速遷移［18］。LINC00958 促進c-Myc 的轉錄及c-Myc 下游靶向基因啟動子表達，增加腫瘤細胞活力和促進集落形成［19］。此外，LINC00958/miR-4306通過AIM 調控腫瘤p53 水平，并通過LINC00958/SIRT1 影響p53 的表達，從而增強細胞增殖，減少細胞死亡，促進腫瘤存活［20］。LINC00958 過表達促進細胞周期進程，敲低LINC00958 則誘導細胞周期阻滯在G0/G1期［21］。

在部分腫瘤中，LINC00958 還參與上皮-間充質轉化（EMT）。有學者［14］發現，膀胱癌細胞系T24 和J82 中LINC00958 呈高表達，抑制LINC00958 表達后，EMT 標志蛋白E-cadherin 表達降低，而Vimentin表達升高。敲低LINC00958可抑制食管癌細胞中的上皮-間質轉化［22］。上皮-間質轉化是上皮去分化為間質細胞的過程，是腫瘤細胞侵襲、轉移的關鍵環節，上述研究提示LINC00958 可能成為惡性腫瘤的新型上皮-間質轉化標志物。

LINC00958 還參與了惡性腫瘤細胞凋亡、焦亡等程序性細胞死亡相關表型的調控。相關研究［20］表明，在口腔鱗狀細胞癌過表達內源性LINC00958 后，發現自噬相關蛋白Beclin-1和Atg5顯著增加，LC3-II/LC3-I 比值增大。SUN 等［23］人沉默LINC00958 后發現，結直腸癌中SW480 細胞的細胞凋亡率顯著增加，使用蛋白質印跡法測量細胞凋亡相關蛋白的表達水平，Bcl-2的表達降低，Bax和半胱天冬氨酸酶-3 表達均顯著增加。LINC00958 通過調控黑色素瘤缺乏因子2（AIM2）介導凋亡相關斑點樣蛋白（ASC）募集并招募Caspase1，活化其切割底物GSDMD 可導致細胞焦亡，檢測發現過表達LINC00958 顯著增加了炎性小體介導的焦亡相關蛋白c-casp-1、IL-1β 和IL-18 的表達，下調LINC00958 被認為可以通過抑制AIM2 的表達來降低細胞焦亡，還可以降低p53的抑制作用，從而增加細胞凋亡，減少自噬和增殖［20］。

1.4 LINC00958 影響惡性腫瘤細胞代謝 LINC00958 可通過不同方式調控腫瘤細胞的代謝行為。LINC00958 可通過m6A 依賴的方式與GLUT1 mRNA 相互作用，增強GLUT1 mRNA 轉錄穩定性，控制細胞酸化速率，調節胃癌細胞的葡萄糖攝取及細胞內乳酸含量，從而正向調節胃癌中有氧糖酵解［5］。此外，m6A 修飾還能夠上調LINC00958 誘導HCC細胞脂肪生成，促進HCC惡性進展［24］。

2 LINC00958 在惡性腫瘤發生發展中的作用機制

LINC00958 在惡性腫瘤中存在著普遍升高的表達水平，提示其具有促癌因子身份，但是LINC00958在不同類型的腫瘤發生發展過程中所起到的作用機制是多樣且復雜的。其中一個主要機制是其作為競爭性內源RNA（ceRNA）來調節癌癥進程，吸收miRNA并隨后調節具體基因mRNA的功能。此外，它也可以透過不同的信號途徑參于調控，如SIRT1/p53通路和Wnt/β-catenin 等。盡管如此，對于每種類型的腫瘤中LINC00958所產生的具體影響和分子機制方面更細致的論述是必要的。

2.1 LINC00958 作為ceRNA 調控惡性腫瘤的發生發展 MiRNA 是小的非編碼的單鏈RNA，通過靶向mRNA 組成一系列調節因子，可阻止mRNA 翻譯或導致mRNA 降解。大量報告表明，LINC00958 可作為細胞質中的競爭性內源性RNA（ceRNA），阻止miRNA 與mRNA 的堿基配對結合，從而誘導mRNA 的表達，間接調控miRNA 對下游靶基因或通路的作用，從而影響各種腫瘤細胞的生物學行為，參與腫瘤的發生與發展。

在大多數惡性腫瘤中，敲低LINC00958 能夠抑制腫瘤細胞增殖、侵襲及遷移，并且顯著減少腫瘤細胞在體內的體積及重量，抑制了腫瘤在體內和體外的惡性行為，這可能是LINC00958 的3′非翻譯編碼區（3′-UTR）具有miRNA 的互補序列。相關研究［7，20，25-26］表明，miR-106a-5p、miR-422a、miR-4306及miR-185-5p都能夠同時靶向LINC00958和相關基因（包括AKT、mTOR、AIM2、p53、YWHAZ、YY1 等）的3′-UTR，從而減少腫瘤細胞凋亡，促進其增殖、侵襲、遷移及EMT 的轉化等調控，從而促進腫瘤的發生進展。在腦及頭頸部腫瘤中，GUO 等［27］人發現LINC00958作為致瘤因子在膠質瘤組織和細胞系中顯著上調，LINC00958 可作為ceRNA 結合miR-203 靶向CDK2 的3′-UTR 的互補結合位點，體外抑制腫瘤細胞增殖、侵襲及G0/G1 期轉變，并限制體內腫瘤生長，從而形成LINC00958/miR-203/CDK2軸影響膠質瘤的生長。 LI 等［17］人通過干擾LINC00958 轉錄，觀察到LINC00958 可通過腫瘤抑制因子miR-627 間接影響TRIM44 的表達來抑制腫瘤細胞的增殖、遷移和侵襲，從而發揮其在甲狀腺乳頭狀癌中的促癌作用，挽救實驗驗證了 LINC00958 在這一過程中的關鍵作用。LINC00958 在口腔鱗狀細胞癌（OSCC）定位在細胞質中，作為miRNA 海綿吸附體抑制miR-627-5p RNA 與YBX5 的mRNA 結合，間接調節功能基因的表達，促進OSCC 的細胞生長、延緩凋亡、加速遷移和EMT［18］。 在舌鱗狀細胞癌（TSCC）中，通過LINC00958/mir2115p/CENPK 軸調節細胞周期過程（cyclinD1-Rb）并且激活JAK/STAT3 信號通路來促進TSCC 的增殖［7］。但有趣的是，有關研究［28］表明，通過比較不同來源的HNSCC 中LINC00958 和HOXC13-AS 的表達值，頭頸部不同解剖部位來源的鱗狀細胞癌之間沒有明顯差異。

在消化道相關的惡性腫瘤中，LINC00958 也發揮了重要作用。WANG 等［22］人發現，LINC00958 在食管鱗狀細胞癌（ESCC）中主要通過競爭性抑制miR-510-5p調節SPOCK5的表達，促進ESCC 的增殖、遷移、侵襲、細胞周期及EMT。HU 等［11］人發現，敲低LINC00958 能夠通過調節miR-193b-5p/METTL3 軸有效抑制癌細胞的增殖、遷移和侵襲，增加細胞凋亡率。LINC00958 通過負向調控miR-422a，直接結合MAPK1 mRNA 的3′-UTR 來抑制MAPK1 的表達，從而抑制腸癌細胞增殖，增強細胞凋亡［25］。肝癌中LINC00958 表現出高表達，并提示與腫瘤分化和微血管侵襲呈正相關，ZUO 等［24］人進行體外實驗觀察到作為ceRNA 結合miR-3619-5p 上調肝癌衍生生長因子（HDGF）的表達，從而促進肝癌的脂肪生成和進展，而此過程中mettl3介導的N6-甲基腺苷修飾通過穩定LINC00958 的RNA 轉錄上調其表達。與此相對，LAN等［14］人發現，敲低LINC00958抑制肝細胞癌的增殖、遷移和EMT 過程。CHEN 等［29］人研究證明，通過LINC00958/miRNA-330-5p/PAX8軸能夠促進腫瘤的遠處轉移，沉默LINC00958 能夠抑制PAX8的表達阻止胰腺癌的進展。

YANG 等［30］人下調LINC00958 對肺腺癌（LAD）細胞增殖、遷移和侵襲的抑制作用揭示了LINC00958在LAD 中的致癌特性，通過SP1/LINC 00958/miR-625-5p/CPSF7 軸促進致癌基因轉錄重編程來加速LAD 的進展。此外，非小細胞肺癌（NSCLC）被敲低LINC00958 后，腫瘤細胞的增殖和遷移同樣受到抑制，這是通過LINC00958/miR-204-3p/KIF2A軸來實現的［31］。

乳腺癌相關臨床研究顯示，腫瘤晚期中的LINC00958 表達高于初期，LINC00958 可作為ceRNA，通過miR-378a-3p 靶向YY1 mRNA 的3′-UTR，形成LINC00958/miR-378a-3p/YY1 軸，參與腫瘤細胞增殖和凋亡調控，從而促進乳腺癌的發生進展。值得注意的是m6A 甲基轉移酶樣3（METTL3）也能通過促進LINC00958 的RNA 轉錄穩定性而導致其上調［26］。

LINC00958 女性生殖道腫瘤較早被研究。LINC00958 在宮頸癌中是上調最高的lncRNA之一，提示其為致癌基因，促進細胞增殖和侵襲，LINC00958 通過miR-185-5p/RSF-1 軸對AKT1/GSK3β/VEGFA 途徑進行調控參與調節腫瘤血管生成［16］，LINC00958/miR-625-5p/LRRC8E 軸參與了宮頸癌細胞的增殖和遷移［32］。在子宮內膜癌（UCEC）中敲除LINC00958能夠抑制其與miR-378a-3p結合，降低下游致癌基因的YY1 的表達，并且挽救了MEK/ERK 在增殖和遷移中的致癌作用［9］。除此之外，LINC00958 可通過miR-145-3p/TCF4 和miR-3174/PHF6軸增強子宮內膜癌細胞的增殖、侵襲、遷移［15］。LINC00958 不僅能夠通過結合miR-378a-3p參與IGF1R 翻譯調控和起始以及RNA 轉錄后修飾的蛋白，導致膀胱癌細胞侵襲性增加［13］，并且能夠作為膀胱癌的診斷標志在尿外泌體被檢測出，其具有92%的敏感性和91.7%的特異性［33］。

LINC00958 在間葉源性腫瘤中也被證實促進腫瘤的發生發展。ZHOU 等人的研究顯示，沉默LINC00958 的骨肉瘤細胞中細胞遷移誘導蛋白（CEMIP）的表達水平能夠被miR-4306 抑制劑挽救，提示LINC00958 作為ceRNA 與miR-4306 結合正向調控骨肉瘤細胞中CEMIP 的表達。異種移植瘤實驗和裸體小鼠腫瘤轉移實驗［12］表明，LINC00958 導致腫瘤浸潤分期增高，腫瘤轉移率上升。

2.2 LINC00958 通過不同信號通路調控惡性腫瘤的發生發展

2.2.1 LINC00958通過LINC00958/c-Myc信號通路調控惡性腫瘤的發生發展 C-Myc 與LINC00958 呈陽性共表達，c-Myc 處于LINC00958 基因的上游區域。LINC00958-c-Myc相互作用是化療和放療耐藥的機制［19］。進行ChIP 測定發現，內源性c-Myc 能夠與LINC00958啟動子結合，且LINC00958激活c-Myc的轉錄活性，形成正反饋環，LINC00958 的表達進一步促進c-Myc的轉錄活性及c-Myc下游靶向基因啟動子（CDK4、CDC45 和CyclinA2）的表達。LINC00958激活在體外誘導HNSCC 細胞化學和輻射抵抗，敲低LINC00958 則降低了HNSCC 細胞活力和集落形成，并增強腫瘤細胞對電離輻射或順鉑的敏感性。在基因水平上，LINC00958是HNSCC細胞中c-Myc的下游靶點，LINC00958 增強c-Myc 的轉錄活性和c-Myc轉錄本的表達，形成正反饋環。這種正反饋回路在體外誘導HNSCC細胞化學和輻射抵抗。

2.2.2 LINC00958通過LINC00958/SIRT1/p53信號通路調控惡性腫瘤的發生發展 通過降低內源性LINC00958 的表達，miR-4306 顯著增加，因此，JIANG等［20］人認為下調LINC00958不僅可以通過抑制AIM2的表達來降低細胞焦亡，還可以降低p53的抑制作用，從而增加細胞凋亡，減少自噬和增殖。MiR-4306 可以與LINC00958 及AIM2 的3′-UTR 結合，LINC00958/miR-4306通過AIM調控腫瘤焦亡和p53 水平，并通過LINC00958/SIRT1 影響p53 的表達，從而通過增強細胞增殖和減少細胞死亡來促進腫瘤存活。

2.2.3 LINC00958 通過KIAA1429/LINC00958/GLUT1 軸調控惡性腫瘤的發生發展 在胃癌中發現LINC00958 與癌細胞的有氧糖酵解相關。LINC00958 沉默抑制細胞酸化速率，抑制胃癌細胞的葡萄糖攝取，降低細胞內乳酸含量。LINC00958通過m6A依賴方式與GLUT1 mRNA相互作用，增強GLUT1 mRNA 轉錄穩定性，通過KIAA1429/LINC00958/GLUT1 軸從而正向調控胃癌的有氧糖酵解［5］。

2.2.4 LINC00958 通 過 LINC00958/NUDT19/mTORC1/P70S6K 軸調控惡性腫瘤的發生發展 LINC00958 在HCC 組織中明顯過表達，尤其是中度/低分化、微血管浸潤和TNM Ⅲ/Ⅳ分期的患者，LINC00958 作為一種與脂肪生成相關的lncRNA，可加劇HCC 的惡性表型。 NUDT19是LINC00958 的直接靶標，并受到LINC00958 的正調控。此外，NUDT19激活了mTORC1/P70S6K 信號通路，NUDT19 過表達和mTORC1 激活劑MYH1485均逆轉了LINC00958 沉默對HCC 增殖、遷移和EMT過程的抑制作用［14］。

2.2.5 LINC00958 通 過 H3K4me/BLACAT2/WDR5/VEGF-C 軸調控惡性腫瘤的發生發展 LINC00958 過表達促進膀胱癌相關的淋巴管生成和淋巴轉移。用VEGF-C 抗體阻斷VEGF-C 信號通路，可以顯著減少體內高表達LINC00958 的膀胱癌的淋巴結轉移。在體內實驗［4］中證實，小鼠LINC00958過表達更容易發生遠處轉移導致早期死亡，LINC00958 的上調增強了腫瘤細胞對放療和化療的耐藥性，并誘導淋巴管生成，并且H3K4me的表觀遺傳學修飾能夠調節LINC00958 的表達，從而影響WDR5對VEGF-C的調控。

2.2.6 LINC00958 通過Wnt/β-catenin 通路調控惡性腫瘤的發生發展 GEPIA數據庫的檢索結果及臨床驗證卵巢癌（EOC）組織及鄰近非腫瘤標本，均支持LINC00958 在EOC 組織中的表達明顯增加，而敲除LINC00958 可以抑制EOC 細胞的增殖、遷移和侵襲，參與對Wnt/β-catenin通路的調節［34］。

2.2.7 LINC00958通過LINC00958/IGF2BP3/E2F3軸調控惡性腫瘤的發生發展 LINC00958 通過IGF2BP3 高表達與食管癌（EC）的臨床晚期、腫瘤分級高、血管浸潤和遠處轉移相關。IGF2BP3 通過改變E2F3 mRNA 的穩定性發揮了調節作用，此外，LINC00958 通過與IGF2BP3 結合而不改變其表達水平幫助IGF2BP3 完成其功能。敲除LINC00958能夠抑制其與IGF2BP3 結合，損害下游致癌基因的mRNA 穩定性，挽救了IGF2BP3 在UCEC 增殖和遷移中的致癌作用［35］。

綜上所述，LINC00958的表達模式和作用在不同類型的癌癥中是相似的，均扮演了腫瘤促進因子的角色。其在大多數癌癥中均處于高表達的狀態，在臨床上其與腫瘤的淋巴結轉移、遠距離轉移、腹膜播散和腫瘤周圍組織浸潤顯著相關，與血管生成及更晚期的TNM分期相關，且與部分腫瘤的不良預后相關。在體內外實驗中過表達LINC00958可促進腫瘤細胞增殖和侵襲性遷移及EMT，敲低LINC00958得到的結果相反，并且會誘導細胞凋亡，以及減緩腫瘤在體內的生長。在機制上，LINC00958 不僅可作為ceRNA，通過miRNA-mRNA 軸調控腫瘤細胞的惡性行為，而且與多種關鍵信號通路之間存在潛在關系，如PI3K/AKT/mTOR、JNK、JAK/STAT3、Wnt/β-連環蛋白等，此外，LINC00958 參與了表觀遺傳學重編程、腫瘤代謝和腫瘤耐藥。雖然LINC00958的臨床意義及其控制癌癥的分子機制尚沒有明確的定論，但目前研究表明LINC00958可能為癌癥的發展機制提供新的見解，這些研究表明LINC00958可能作為一種很有前途的癌癥診斷和預后評估的生物標志物，通過新型途徑給藥使得LINC00958靶點干預也可能成為一種有價值的治療人類惡性腫瘤的新型治療工具。