不同免疫劑量的豬圓環(huán)滅活疫苗減量免疫效果分析

高勤學(xué) ，蔡云鵬 ，楊偉光 ，祝正高

（1.江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院，江蘇 泰州 225300；2.江蘇省種豬性能測定中心，江蘇 泰州 225311；3.江蘇鉑可醫(yī)療科技有限公司，江蘇 泰州 225316）

前言

無針注射器作為一種取代傳統(tǒng)有針玻璃/金屬注射器的新型藥物輸送方式有悠久的歷史，最初無針注射器較多用于注射胰島素、干擾素、麻醉劑等藥物，減少病人的痛苦和交叉感染的機(jī)會。1992年美國FDA（食品藥品監(jiān)督管理局）批準(zhǔn)無針注射胰島素。加拿大、美國較早開展獸醫(yī)無針注射器的研究，據(jù)報道美國有近80%的大型養(yǎng)殖場在使用無針注射器，代表性公司有美國的Pulse公司和加拿大的Agro-jet公司。但是進(jìn)口無針注射器價格昂貴，操作繁瑣，使用疫苗類型受限制等一系列的問題也限制了它的推廣使用。非洲豬瘟催生了一系列養(yǎng)殖技術(shù)的變革，注射疫苗作為豬場生物安全必不可少的防線，減少交叉感染勢在必行，無針注射器又提上議事日程。國內(nèi)已經(jīng)出現(xiàn)了4～6家國產(chǎn)無針注射器廠家，針對進(jìn)口無針注射器太重、操作時噪音太大、不能注射油佐劑疫苗等缺點(diǎn)進(jìn)行了攻關(guān)和技術(shù)革新。據(jù)報道，無針注射胰島素可以減少30%劑量；默沙東在美國使用IDAL無針注射器免疫圓環(huán)-支原體二聯(lián)苗，只需要0.2 mL每頭份；在動物上也發(fā)現(xiàn)了類似效果。為了驗(yàn)證動物使用無針注射疫苗的減量效果，本文針對豬圓環(huán)滅活疫苗減量免疫仔豬進(jìn)行了對比研究，對不同劑量仔豬的免疫效果進(jìn)行了評價，確定了用無針注射器免疫豬圓環(huán)滅活疫苗最佳免疫劑量。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動物

日齡16～21日齡健康三元仔豬，除傳統(tǒng)肌肉注射組以外，未注射任何疫苗，體重6～7 kg，購自江蘇眾成牧業(yè)有限公司。飼料采購自南通安佑生物科技有限公司，910T和911T乳豬配合飼料，自由采食。試驗(yàn)地點(diǎn)在江蘇省種豬性能測定中心。

1.2 試驗(yàn)材料

圓力康豬圓環(huán)病毒2型桿狀病毒載體滅活疫苗（CP08株），購自國藥集團(tuán)動物保健股份有限公 司（批 號：170261098）；豬 圓環(huán)病毒2型抗體酶聯(lián)免疫試劑盒（PCV2ELISASK105， 貨 號：FS8116），購自常州品芝道科學(xué)器材有限公司（荷蘭百測BioCheck公司）；有針注射器為常規(guī)金屬注射器；無針注射器（型號：POK-V-Ⅰ），生 產(chǎn) 批號014710172（20201010），購自江蘇鉑可醫(yī)療科技有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

將30只16～21日齡仔豬隨機(jī)分成6組，每組5頭；第1組采用傳統(tǒng)有針注射1頭份圓環(huán)疫苗，第2組采用無針注射1頭份圓環(huán)疫苗，第3組采用無針注射0.75頭份圓環(huán)疫苗，第4組采用無針注射0.5頭份圓環(huán)疫苗，第5組采用無針注射0.25頭份圓環(huán)疫苗，第6組作為對照。第2～5組接種時采用CO2氣瓶作為動力源，供氣壓力1.5 MPa。具備減量功能的無針注射器每次注射量為0～0.3 mL，本次試驗(yàn)調(diào)整為每次0.25 mL，0.25頭份注射一次，0.5～1頭份分別注射2～4次，例如1頭份就在仔豬頸部兩側(cè)各注射兩次。

1.4 PCV（豬圓環(huán)病毒）抗體檢測

圓力康疫苗免疫后7 d、14 d、28 d分別頸靜脈采血，分離血清，按照豬圓環(huán)病毒2型抗體酶聯(lián)免疫試劑盒操作步驟進(jìn)行檢測，在405 nm波長處測定OD值、S/P值，將OD值代入標(biāo)準(zhǔn)品制作的直線回歸方程，計(jì)算每頭豬產(chǎn)生的PCV抗體濃度。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

用SPSS軟件ANOVA程序分析每組仔豬免疫后產(chǎn)生的抗體濃度、體重差異，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，分析各組之間的差異，確定無針注射對仔豬減量免疫效果的影響。

2 結(jié)果

2.1 不同免疫劑量接種圓環(huán)病毒疫苗后對仔豬增重的影響

試驗(yàn)豬分別飼養(yǎng)在三個獨(dú)立的保育圈里，每個保育圈飼養(yǎng)10頭。記錄仔豬的初生重、斷奶重，每次采血的同時進(jìn)行稱重、記錄。最后一次稱重減去試驗(yàn)開始時的重量即為增重，增重除以試驗(yàn)期32 d即為日增重。用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS25.0的ANOVA程序進(jìn)行單因素方差分析結(jié)果表明（表1）：對照組和全量免疫組與減量免疫組增重差異顯著，日增重差異亦顯著。

表1 不同接種劑量接種圓環(huán)疫苗對仔豬增重的影響

2.2 不同免疫劑量接種圓環(huán)病毒疫苗后PCV抗體濃度比較

分別于免疫后10 d、21 d和32 d采血，分離血清，檢測血清PCV抗體濃度。根據(jù)百測（BIOCHECK）豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）抗體ELISA檢測試劑盒說明書，樣品S/P值大于或等于0.5時認(rèn)為樣品陽性、免疫合格、具有保護(hù)作用。結(jié)果顯示（見表2）：傳統(tǒng)有針注射組抗體上升很快，10 d即達(dá)合格水平，一直維持到32 d都處于合格水平。無針注射組（1頭份，0.75頭份和0.5頭份）抗體上升較慢，但是10 d也達(dá)到合格水平，32 d抗體濃度和傳統(tǒng)注射組濃度接近。0.25頭份注射組一直達(dá)不到合格水平。

表2 不同接種劑量接種圓環(huán)疫苗對仔豬抗體的影響

3 討論

3.1 減量免疫的有效性

金擴(kuò)世等豬圓環(huán)病毒免疫仔豬抗體消長規(guī)律試驗(yàn)表明，仔豬免疫圓環(huán)病毒后滅活疫苗后7 d免疫抗體開始升高，21 d達(dá)到峰值，抗體可以維持180 d以上。本試驗(yàn)對照組仔豬免疫時間為22日齡，無針注射日齡為23日齡，由于應(yīng)激較大，第一次檢測抗體時間為免疫后10 d。因此對照組抗體上升很快，試驗(yàn)組也達(dá)到合格水平。空白對照組抗體一直都是陰性，說明母源抗體或野毒抗體對試驗(yàn)干擾不嚴(yán)重。0.25頭份試驗(yàn)組32日齡抗體不合格，和對照組差異顯著。因此除0.25頭份試驗(yàn)組以外，無針減量試驗(yàn)組抗體都達(dá)到了合格水平，對豬具有保護(hù)作用。筆者也同時監(jiān)測了豬生長情況，結(jié)果表明傳統(tǒng)免疫組、對照組和1頭份試驗(yàn)組增重差異不顯著，0.75頭份和0.5頭份、0.25頭份試驗(yàn)組增重差異不顯著，但是和前面三組增重差異顯著。《現(xiàn)代養(yǎng)豬生產(chǎn)技術(shù)》（P269）記載第8周仔豬平均日增重應(yīng)為429 g，本試驗(yàn)組日增重大大小于參考值。可能的原因是豬只采血應(yīng)激較大，影響生長，也有可能和品種有關(guān)，由于非洲豬瘟影響，很多仔豬是商品豬再留種的母豬生產(chǎn)的，較純正的三元豬生長性能要差一些。但是空白組的日增重大于其他組，可能和沒有注射圓環(huán)疫苗應(yīng)激小有關(guān)，如果延長試驗(yàn)時間，有可能觀察到圓環(huán)疫苗對豬整個生產(chǎn)的影響。減量免疫對于豬生長的影響需要更大的樣本和更長的試驗(yàn)期來觀察。

3.2 最優(yōu)減量免疫劑量

本試驗(yàn)的目的是驗(yàn)證豬圓環(huán)滅活疫苗減量免疫的效果，探索最佳免疫劑量，從而達(dá)到養(yǎng)豬業(yè)降本增效的最終目的。從免疫抗體分析結(jié)果來看，除0.25頭份試驗(yàn)組抗體下降較快，32日齡變?yōu)殛幮裕渌M都是合格的，因此建議將0.5頭份作為減量免疫的最佳劑量。

綜上所述，采用無針注射器給仔豬接種圓環(huán)疫苗可以達(dá)到傳統(tǒng)有針疫苗同樣的抗體水平。除了0.25頭份試驗(yàn)組32日齡抗體不合格以外，0.5頭份、0.75頭份和1頭份的無針注射組抗體都達(dá)到合格水平，因此建議采用0.5頭份作為仔豬減量免疫圓環(huán)病毒的最佳免疫劑量。此外，本文還對不同試驗(yàn)組增重進(jìn)行了初步探討，減量免疫組增重較慢，原因還需要擴(kuò)大試驗(yàn)動物數(shù)量和試驗(yàn)時間進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證。