PCOS患者血清miR-206表達(dá)及其與下丘腦-垂體-性腺軸內(nèi)分泌的關(guān)系分析

戎小煥，胥世凡

（許昌市人民醫(yī)院，1.內(nèi)分泌代謝科；2.內(nèi)骨外一科，河南 許昌 461000）

多囊卵巢綜合征（PCOS）是影響育齡期女性生殖健康的常見(jiàn)疾病之一，主要由內(nèi)分泌系統(tǒng)紊亂與代謝紊亂引發(fā)，導(dǎo)致患者出現(xiàn)月經(jīng)不調(diào)、閉經(jīng)甚至或不孕等［1］。下丘腦-垂體-性腺軸對(duì)生殖發(fā)揮著重要的調(diào)控作用，通過(guò)調(diào)節(jié)促性腺素釋放激素、促卵泡激素（FSH）、促黃體生成素（LH）的分泌，影響卵泡發(fā)育、雌激素釋放與排卵等，最終影響女性月經(jīng)周期與生育，下丘腦-垂體-性腺軸內(nèi)分泌功能失調(diào)是PCOS 發(fā)病的重要病理機(jī)制［2］。胰島素抵抗是影響PCOS 發(fā)病的另一公認(rèn)的生理病理特征，可促進(jìn)PCOS 患者病情進(jìn)展［3］。近年來(lái)，微小核糖核酸（miRNA）在臨床多種疾病診治中的作用逐漸被探索與發(fā)現(xiàn)，且已有研究［4-5］表明miRNA 與胰島素抵抗、PCOS 發(fā)病存在密切關(guān)系。微小核糖核酸-206（miR-206）為miRNA 家族重要成員，有研究［6］表明，miR-206 可通過(guò)促進(jìn)胰島素受體的磷酸化而促進(jìn)胰島素信號(hào)傳導(dǎo)，抑制葡萄糖生成；另有研究［7］報(bào)道，miR-206 可能通過(guò)調(diào)節(jié)卵巢顆粒細(xì)胞生存與凋亡而在PCOS 中起著重要作用。但關(guān)于PCOS 患者血清miR-206 表達(dá)與下丘腦-垂體-性腺軸內(nèi)分泌的關(guān)系尚需進(jìn)一步深入探索、揭示，鑒于此，本研究旨在通過(guò)探討二者間的關(guān)系，以為臨床治療提供新思路，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取許昌市人民醫(yī)院2020 年3 月至2022 年12 月收治的148 例PCOS 患者設(shè)為研究組，另同期選取年齡、體質(zhì)量指數(shù)與之相匹配的133 例月經(jīng)正常的健康體檢未孕女性設(shè)為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①研究組均符合相關(guān)指南［8］中PCOS 診斷標(biāo)準(zhǔn)，且為初診患者；②對(duì)照組月經(jīng)正常；③年齡20～40 歲；④受試者均知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴有垂體瘤、腺垂體功能減退、甲狀腺/甲狀旁腺疾病、庫(kù)欣綜合癥、先天性腎上腺皮質(zhì)增生、性腺發(fā)育不全、醛固酮增多癥、高泌乳素血癥、卵巢早衰等其他內(nèi)分泌疾病；②伴有心肝腎等臟器嚴(yán)重疾病；③伴有腫瘤疾病；④伴有自身免疫性疾病；⑤近6 個(gè)月內(nèi)使用過(guò)激素類藥物治療；⑥伴有感染性疾病；⑦有酗酒、藥物濫用史；⑧妊娠期、哺乳期女性。

本研究已獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)審批，受試者均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 血清miR-206 表達(dá)檢測(cè) 月經(jīng)規(guī)律者于月經(jīng)第5 天，月經(jīng)無(wú)規(guī)律或閉經(jīng)者于B 超檢查未發(fā)現(xiàn)優(yōu)勢(shì)卵泡時(shí)，采集受試者晨起空腹肘靜脈5 mL，離心10 min（3 000 r/min、半徑10 cm），提取血清，放于-20℃冰箱保存待檢。采用Trizol 法［愛(ài)必信（上海）生物科技有限公司］提取所有受試者血清總RNA，以紫外分光光度計(jì)鑒定其純度、完整性，使用miRNeasy 提取分離試劑盒（Qiagen 公司）提取miRNA。采用 miRNA Reverse Transcription Kit 反轉(zhuǎn)錄試劑盒（上海慧穎生物科技有限公司）逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，按照SYBR PrimeScript RT-PCR Kit 試劑盒（上海易匯生物科技有限公司）說(shuō)明書進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qRT-PCR）操作，miR-206 引物序列：上游5'-ATCCAGTGCGTGTCGTG-3'，下游5'-TGCTTGGAATGTAAGGAAG-3'；內(nèi)參U6 引物序列：上游5' -GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3'，下游5'-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT。反應(yīng)總體積25 μL，其中cDNA 為1.0 μL，SYBR Primix Ex Taq TM 為10 μL，Primer 為0.8 μL，RNase H2O為13.2 μL。反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性5 min，95℃變性15 s，60℃ 30 s，72℃延伸10 s，總共40 個(gè)循環(huán)。以2-ΔΔct計(jì)算miR-206 表達(dá)。

1.2.2 血清性激素水平檢測(cè) 采用化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測(cè)血清FSH、LH、雌二醇（E2）、睪酮（T）、泌乳素（PRL）、孕酮（P）水平，全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀購(gòu)自北京貝爾生物工程股份有限公司，相關(guān)試劑盒購(gòu)自賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司。

1.3 觀察指標(biāo)

①研究組、對(duì)照組血清miR-206 表達(dá)。②研究組、對(duì)照組血清FSH、LH、E2、T、PRL、P 水平。③分析PCOS 患者血清表達(dá)與FSH、LH、E2、T、PRL、P 的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 24.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。經(jīng)正態(tài)性檢驗(yàn)，年齡、體質(zhì)量指數(shù)、血壓、血清各指標(biāo)等計(jì)量資料均符合正態(tài)分布，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料如生育史以百分率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)；血清miR-206表達(dá)與性激素水平的關(guān)系采用Pearson 相關(guān)系數(shù)分析。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較

研究組年齡、體質(zhì)量指數(shù)、血壓、有生育史情況與對(duì)照組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表1。

表1 兩組一般資料比較

2.2 兩組血清miR-206 表達(dá)比較

研究組血清miR-206 表達(dá)平均為0.38±0.07，對(duì)照組平均為0.95±0.12，研究組血清miR-206 表達(dá)明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=49.220,P＜0.001）。

2.3 兩組血清性激素水平比較

研究組血清FSH、P 水平均明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），血清LH、E2、T、PRL 水平均明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 兩組血清性激素水平比較（）

表2 兩組血清性激素水平比較（）

2.4 PCOS 患者血清miR-206 表達(dá)與性激素水平的關(guān)系

經(jīng)Pearson 相關(guān)系數(shù)分析，PCOS 患者血清miR-206 表達(dá)與LH、E2、T、PRL 水平均呈負(fù)相關(guān)性（r=-0.546、r=-0.501、r=-0.533、r=-0.485,P＜0.001、P＜0.001、P＜0.001、P=0.001），與FSH、P 水平均呈正相關(guān)性（r=0.493、r=0.528,P=0.001、P＜0.001），見(jiàn)圖1。

圖1 PCOS 患者血清miR-206 表達(dá)與性激素水平的關(guān)系散點(diǎn)圖

續(xù)圖1 PCOS 患者血清miR-206 表達(dá)與性激素水平的關(guān)系散點(diǎn)圖

3 討論

PCOS 是內(nèi)分泌科常見(jiàn)病，發(fā)生與遺傳、環(huán)境等因素有關(guān)，調(diào)查顯示，我國(guó)育齡期婦女PCOS 患病率可高達(dá)10%［9］，并呈逐漸上升趨勢(shì)。PCOS 對(duì)女性身心健康可造成嚴(yán)重?fù)p害，及早對(duì)患者病情進(jìn)行準(zhǔn)確評(píng)估、為其制定合適的個(gè)體化治療方案，對(duì)促進(jìn)其預(yù)后改善意義重大。調(diào)節(jié)內(nèi)分泌激素水平、降低胰島素抵抗等是臨床治療PCOS 患者的重要干預(yù)途徑，而探尋影響內(nèi)分泌或胰島素抵抗等的相關(guān)因素、尋找相關(guān)分子靶點(diǎn)對(duì)指導(dǎo)臨床治療具有積極意義。

miRNA 屬于非編碼單鏈RNA，在胚胎發(fā)育、調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖/分化/凋亡、調(diào)控免疫功能等生物過(guò)程中具有舉足輕重的作用，其在血清中穩(wěn)定、易于檢測(cè)，目前已被證實(shí)可作為多種疾病診斷的特異性生物標(biāo)志物與治療靶點(diǎn)［10-12］。miR206 位于人類染色體6p12.2 上，參與機(jī)體多種重要生理學(xué)過(guò)程。miR-206 可通過(guò)調(diào)節(jié)胰島素信號(hào)傳導(dǎo)、葡萄糖激酶活性，抑制葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)，減少葡萄糖產(chǎn)生［13］，同時(shí)其可調(diào)節(jié)人類卵巢顆粒細(xì)胞增殖與凋亡［14］。本研究中顯示，研究組血清miR-206表達(dá)較對(duì)照組明顯降低，提示PCOS 患者血清miR-206 表達(dá)明顯下降。分析原因可能為，當(dāng)血清miR-206 表達(dá)明顯下降時(shí)，則其調(diào)節(jié)胰島素信號(hào)傳導(dǎo)、卵巢顆粒細(xì)胞增殖與凋亡的作用減弱，引起顆粒細(xì)胞功能失調(diào)，對(duì)卵巢激素分泌和卵泡發(fā)育等產(chǎn)生影響，從而參與PCOS 的發(fā)病過(guò)程。白愛(ài)紅等［15］研究指出，PCOS 患者血清miR-206 表達(dá)明顯低于月經(jīng)規(guī)律健康女性，本研究結(jié)果與此相一致，共同表明血清miR-206 低表達(dá)可能參與了PCOS 發(fā)生發(fā)展。

另本研究中，研究組血清FSH、P 水平均明顯低于對(duì)照組，而血清LH、E2、T、PRL 水平均明顯高于對(duì)照組，提示PCOS 患者存在下丘腦-垂體-性腺軸內(nèi)分泌紊亂。高雄激素血癥是PCOS 患者重要臨床特征之一，血清T 水平明顯升高，其可正反饋?zhàn)饔糜谙虑鹉X-垂體，誘導(dǎo)LH 分泌過(guò)多，F(xiàn)SH 處于正常狀態(tài)或分泌減少；而持續(xù)高水平LH又可促使卵泡膜細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞增生，進(jìn)而導(dǎo)致雄激素合成增多，過(guò)多的雄激素通過(guò)芳香化作用可轉(zhuǎn)化生成雌激素，導(dǎo)致E2水平升高，且高水平雄激素可持續(xù)刺激垂體而促使PRL 分泌增多。此外，胰島素抵抗是PCOS 患者另一常見(jiàn)特征，此可引起雄激素水平升高、P 水平降低等。黃立等［16］研究報(bào)道，PCOS 患者血清T、E2、LH 水平明顯高于健康體檢婦女，本研究結(jié)果與此相符合。本研究還發(fā)現(xiàn)，PCOS 患者血清miR-206 表達(dá)與LH、E2、T、PRL 水平均呈負(fù)相關(guān)性，而與FSH、P 水平均呈正相關(guān)性。研究［17］表明，miRNA 參與了PCOS 中胰島素抵抗的病理生理學(xué)過(guò)程。另有研究［18］報(bào)道，血清miRNA 表達(dá)與E2、P 等性激素水平具有一定的相關(guān)性。覃舒婷等［19］研究指出，血清miR-206 表達(dá)與雌激素受體表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。miR-206 對(duì)人卵巢顆粒細(xì)胞增殖與凋亡具有一定的調(diào)節(jié)作用，其低表達(dá)可促進(jìn)PCOS 發(fā)生發(fā)展［20］，同時(shí)其表達(dá)上調(diào)對(duì)促進(jìn)胰島素信號(hào)改善具有一定作用［21］，因此，血清miR-206 表達(dá)有可能通過(guò)上述路徑而對(duì)PCOS 患者下丘腦-垂體-性腺軸內(nèi)分泌相關(guān)指標(biāo)產(chǎn)生調(diào)節(jié)作用，影響LH、E2、T、PRL、FSH、P 分泌與釋放。

綜上所述，PCOS 患者血清miR-206 表達(dá)明顯下降，且與LH、E2、T、PRL、FSH、P 水平存在一定關(guān)系，臨床中可通過(guò)干擾miR 表達(dá)調(diào)節(jié)下丘腦-垂體-性腺軸內(nèi)分泌狀態(tài)與功能，此為PCOS治療方案的研究提供了新思路。但本研究具有一定的局限性，miR-206 參與PCOS 發(fā)生與發(fā)展的具體機(jī)制尚不明確，后續(xù)需進(jìn)一步深入探索分析。