免疫組化技術(shù)在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用價(jià)值

席芳

（濟(jì)源市婦幼保健院 病理科，河南 濟(jì)源 459000 ）

腫瘤呈占位性塊狀突起，也稱為贅生物，發(fā)病率逐年升高，通常早期沒有明顯臨床表現(xiàn)，患者在確診時(shí)已處于中晚期，錯(cuò)過(guò)了最佳治療時(shí)機(jī)。現(xiàn)階段，臨床診斷腫瘤多采用X 線、CT、磁共振成像（MRI）等影像學(xué)技術(shù)進(jìn)行診斷，具有操作簡(jiǎn)單、價(jià)格低廉等優(yōu)勢(shì)，但存在較高的誤診、漏診率。病理檢查是診斷腫瘤的一種重要方法，可確定其組織來(lái)源、范圍及性質(zhì)，決定下步治療方案及預(yù)后。病理檢查包括常規(guī)技術(shù)及免疫組化技術(shù)等，而不同檢查技術(shù)診斷結(jié)果不同［1-3］。本文研究免疫組化技術(shù)對(duì)腫瘤病理診斷中的診斷意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020 年6 月至2022 年6 月濟(jì)源市婦幼保健院收治的100 例疑似腫瘤患者進(jìn)行前瞻性研究。納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)影像學(xué)檢查疑似腫瘤；臨床資料完整；治療依從性好，可配合診療。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并心、肺、肝、腎等嚴(yán)重臟器疾病；合并血液系統(tǒng)疾病或凝血功能障礙；合并影響病理檢查的相關(guān)疾病；意識(shí)不清，無(wú)法配合；拒絕參與或中途退出。其中男56 例，女44 例；年齡42～79 歲，平均（59.67±3.25）歲；病程1～12 個(gè)月，平均（6.21±1.34）個(gè)月；體重指數(shù)18.21～24.64 kg/m2，平均（21.23±0.41）kg/m2。

1.2 方法

所有患者均病理檢查根據(jù)病灶大小、類型及位置實(shí)施穿刺活檢，取樣本。

常規(guī)技術(shù)：在活檢過(guò)程中，需在超聲條件下取出腫瘤組織，制備切片、蘇木精-伊紅染色，與標(biāo)準(zhǔn)組織進(jìn)行對(duì)比，觀察組織結(jié)構(gòu)和細(xì)胞形態(tài)。

免疫組化技術(shù)：將準(zhǔn)備好的樣本切片依次放到染色架上，置于200 mL，2%的APES-丙酮溶液中1 min，立即放入烘箱中60 ℃，15 min，避免脫片，從烘箱中取出后依次進(jìn)行如下步驟：脫蠟水化、過(guò)氧化氫（H2O2）封閉內(nèi)源性過(guò)氧化物酶、高壓抗原修復(fù)、10%非免疫山羊血清（封閉液）封閉、利用1%酪蛋白稀釋后的液體進(jìn)行一/二/三抗孵化、DAB 染色、蘇木素染色、脫水、中性樹膠封片，最后選取合適的視野進(jìn)行拍照。

1.3 觀察指標(biāo)

以手術(shù)病理結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，比較兩種技術(shù)診斷效能。敏感性=真陽(yáng)性/（真陽(yáng)性+假陰性）×100%；特異性=真陰性/（真陰性+假陽(yáng)性）×100%；準(zhǔn)確性=（真陽(yáng)性+真陰性）/總例數(shù)×100%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)錄入Excel，利用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料以百分率（%）表示，用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，用t檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 手術(shù)病理結(jié)果

100 例疑似患者中，72 例確診為腫瘤，包括肺癌16 例，胃癌32 例，肝癌24 例。

2.2 兩種技術(shù)診斷結(jié)果

100 例疑似患者中，常規(guī)技術(shù)檢查出64 例腫瘤，誤診8 例，漏診16 例；免疫組化技術(shù)檢查出71 例，誤診1 例，漏診2 例。見表1。

表1 常規(guī)技術(shù)、免疫組化技術(shù)的診斷結(jié)果（例）

2.3 常規(guī)技術(shù)、免疫組化技術(shù)的診斷效能比較

免疫組化技術(shù)檢查的敏感性、特異性及準(zhǔn)確性高于常規(guī)技術(shù)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 常規(guī)技術(shù)、免疫組化技術(shù)的診斷效能比較 %

3 討論

腫瘤在臨床上可分為良、惡性腫瘤，良性病情較輕，但隨著病情的進(jìn)展，可轉(zhuǎn)變?yōu)閻盒裕{患者生命安全。多數(shù)惡性腫瘤患者確診時(shí)已為晚期，具有較高的死亡率，因此需增加診斷精準(zhǔn)度，及時(shí)診斷疾病進(jìn)展，延長(zhǎng)患者生存時(shí)間。病理檢查是檢查機(jī)體器官、組織或細(xì)胞中的病理改變的病理形態(tài)學(xué)方法，以探討器官、組織或細(xì)胞所發(fā)生的疾病過(guò)程，做出病理診斷，包括脫落細(xì)胞學(xué)、活體組織檢查，其中活體組織檢查是從身體病變部位取小塊組織或手術(shù)切除標(biāo)本制成病理切片，觀察細(xì)胞、組織形態(tài)結(jié)構(gòu)變化，確定病變性質(zhì)，已成為腫瘤診斷較為常用且準(zhǔn)確的方法，但灰塵、試劑污染及染色失效等因素會(huì)影響診斷準(zhǔn)確率。免疫組化技術(shù)是利用抗原抗體特異性結(jié)合反應(yīng)檢測(cè)組織中的未知抗原或抗體，借以判斷腫瘤的來(lái)源或分化程度，協(xié)助腫瘤及鑒別診斷［4-6］。

免疫組化技術(shù)是一種輔助檢查方式，在進(jìn)行病理診斷的過(guò)程中，通常需要選擇20 多種抗體，以滿足相應(yīng)的診斷需求，選擇抗體時(shí)需以節(jié)約成本為基礎(chǔ)，根據(jù)實(shí)際需求來(lái)選擇［7-9］。該技術(shù)具備以下優(yōu)勢(shì)：①免疫組化技術(shù)中可依據(jù)實(shí)際需要來(lái)選擇合適的抗體（不同的腫瘤類型確定抗體種類），從而利用抗體進(jìn)行鑒別診斷；②免疫組化技術(shù)中抗體的特異性可隨著免疫組化使用范圍的增大而增大；③免疫組化技術(shù)可依據(jù)腫瘤切片樣本抗原數(shù)量在腫瘤分狀態(tài)來(lái)對(duì)抗原抗體實(shí)施定量定性及定位研究工作；④在進(jìn)行免疫組化技術(shù)病理診斷時(shí)，標(biāo)本通常為組織標(biāo)本，切片主要采用石蠟切片法，這種方法能夠最大程度的保存組織樣本的形態(tài)，延長(zhǎng)樣本保存時(shí)間，更好的幫助醫(yī)生觀察樣本染色情況［10-12］。國(guó)內(nèi)外有很多學(xué)者［13-15］將免疫組化應(yīng)用于肺癌、乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌等惡性腫瘤的診斷中，均證實(shí)具有較好的診斷價(jià)值。本研究以疑似腫瘤患者為研究對(duì)象，以手術(shù)病理結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，常規(guī)技術(shù)為對(duì)照，分析免疫組化技術(shù)的診斷價(jià)值。

本結(jié)果顯示，與免疫組化技術(shù)檢查的敏感性、特異性及準(zhǔn)確性均更高于常規(guī)技術(shù)，這一結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道相似［16］。筆者認(rèn)為：常規(guī)技術(shù)可判定腫瘤細(xì)胞的形態(tài)、組織學(xué)和細(xì)胞學(xué)特征，準(zhǔn)確性高，檢查方便快捷，副作用小，但只可作為初步診斷，故而不可將其作為首選方案；而免疫組化技術(shù)可對(duì)抗原進(jìn)行定量、定性、定位，觀察抗原在組織中的分布情況，具有定位準(zhǔn)確、定性靈敏度高的特點(diǎn)，可通過(guò)標(biāo)記抗體顯色確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原進(jìn)行診斷，從而用來(lái)確定細(xì)胞來(lái)源及分化程度，是形態(tài)學(xué)的補(bǔ)充，卻不能代替形態(tài)學(xué)檢查。且在免疫組化技術(shù)中，脫蠟與水化可確保抗體能夠充分與組織中抗原結(jié)合發(fā)生反應(yīng)；封閉內(nèi)源性過(guò)氧化物酶可降低內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性；需要注意的是石蠟切片過(guò)程中需要使用甲醛溶液，其可使組織中部分抗原發(fā)生蛋白間的交聯(lián)及醛基的封閉作用，致使抗原失去抗原性，故需對(duì)組織進(jìn)行修復(fù)，確保了診斷的準(zhǔn)確性；組織切片上部分剩余位點(diǎn)可非特異性結(jié)合抗體，造成假陽(yáng)性的結(jié)果，因此需進(jìn)行血清封閉；因抗原抗體形成的復(fù)合物本身沒有顏色，無(wú)法直接觀察，因此需借助染色，使復(fù)合物顯色，便于顯微鏡下觀察。為了提高免疫組化技術(shù)的診斷準(zhǔn)確率，降低誤診、漏診情況，需做好以下幾點(diǎn)：①固定液是10%的中性緩沖甲醛固定液，具有固定時(shí)間長(zhǎng)、不易脫落的優(yōu)點(diǎn)；在使用烘箱時(shí)，溫度設(shè)置為60℃，可避免溫度過(guò)高破壞組織結(jié)構(gòu)，影響診斷效果；高壓鍋進(jìn)行抗原修復(fù)時(shí)，其修復(fù)時(shí)間為10 min，切片自然冷卻后，應(yīng)用了蘇木精染色，可避免顏色過(guò)濃，影響診斷結(jié)果；孵育時(shí)需先將封閉液甩去，以避免封閉液體流入組織，從而確保抗體液體均勻，降低假陰性率［17-19］。②組織染色時(shí)切片需保持濕潤(rùn)狀態(tài)，如玻片上的組織干化，需重新補(bǔ)充水分并在染色過(guò)程中保持組織被覆蓋在緩沖液中，避免出現(xiàn)染色弱或無(wú)染色的情況。③在進(jìn)行免疫組化診斷過(guò)程中如缺乏光鏡，就需要通過(guò)HE 切片對(duì)腫瘤組織進(jìn)行深入觀察、明確診斷，就有可能出現(xiàn)誤診的情況，因此對(duì)于免疫組化陽(yáng)性結(jié)果的標(biāo)本，需要以細(xì)胞形態(tài)學(xué)作為認(rèn)知基礎(chǔ)，但不可將其來(lái)替代病理學(xué)家的臨床經(jīng)驗(yàn)；④在染色時(shí)如存在不均衡的背景染色，這可能意味著脫蠟不正常，此時(shí)需要使用新鮮的二甲苯并延長(zhǎng)脫蠟時(shí)間。⑤洗滌不充分（固定劑殘留）導(dǎo)致高背景值，因此需確保在步驟間用PBS 至少洗3 次；固定不充分，可能導(dǎo)致抗原在組織中擴(kuò)散，出現(xiàn)高背景值的現(xiàn)象，需降低固定后時(shí)間；檢測(cè)試劑的滲透不充分而導(dǎo)致的高背景值，可制備更薄的切片；固定劑的差異可影響組織抗原，因此在使用時(shí)需優(yōu)化pH、孵育時(shí)間及溫度。

綜上所述，免疫組化技術(shù)在腫瘤病理診斷中，具有較高的診斷價(jià)值，但需結(jié)合形態(tài)學(xué)檢查，以更好的明確診斷，為治療提供指導(dǎo)，便于改善預(yù)后。